CRISPR(Cas9)
源自细菌适应性免疫系统的CRISPR/Cas9系统是最强大的基因组编辑技术之一。它是一种基于单向导RNA (sgRNA) 和Cas9 核酸酶的RNA 引导的基因组编辑工具。 sgRNA 使 Cas9 能够通过碱基配对来识别和切割特定的目标 DNA 序列。这会导致双链断裂 (DSB),从而导致 DSB 位点或附近的细胞修复机制和突变。经过广泛的研究,CRISPR/Cas9技术的应用已经从改变细胞中的基因发展到生物体。癌症治疗中最热门的话题之一是 CRISPR/Cas9,因为它在基因治疗中具有潜在的用途。不同的CRISPR/Cas9介导的癌症治疗概念,例如操纵肿瘤相关基因、肿瘤免疫治疗、用于研究的肿瘤模型以及克服抗癌耐药性,在各种癌症类型中都得到了广泛应用。 CRISPR-Cas9 系统的最大优点是其易于使用,并且在几乎所有测试的生物系统(包括细胞系、干细胞、酵母、蠕虫、昆虫、啮齿动物和哺乳动物)的基因组修饰中具有广泛的适用性。为了引导 CRISPR-Cas9 在预定位置切割目标 DNA,可靶向 DNA 位点只需要相应的 20 个核苷酸的 gRNA。受损 DNA 末端的修复要么通过 NHEJ 产生 indels(已用于产生随机基因组突变),要么通过 HDR 在存在供体寡核苷酸或含有 DSB 位点侧翼同源序列的 DNA 片段的情况下产生精确的定点突变核苷酸或大基因替换,产生目标基因突变或校正。
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