Quercetagetin   中文名称: 槲皮万寿菊素

- 抗氧化活性：从柑橘加工副产品中分离出的栎草亭（6-羟基槲皮素）具有抗氧化活性。它清除DPPH自由基的IC50值为12.5 μM，表明其具有中和自由基的能力 [1]
- 抑制JNK1激酶活性：栎草亭是JNK1的强效选择性抑制剂。它以0.5 μM的Ki值抑制JNK1活性，而对JNK2、JNK3、p38α和ERK2等其他激酶的抑制作用较弱。它与JNK1的ATP结合位点结合，阻止ATP结合，从而抑制激酶活性 [3]
Quercetagetin 抑制 PIM2、PKA 和 RSK2，IC50 分别为 3.45、21.2 和 2.82 μM [2]。 Quercetagetin（0.1、1、10 和 100 μM，72 小时）抑制 RWPE2 前列腺癌细胞的增殖，平均 ED50 为 3.8 μM [2]。

槲皮素可显着减少 UVB 诱发的皮肤癌的生长。当局部应用于小鼠皮肤时，浓度为 4 或 20 nmol 的槲皮素可分别降低肿瘤发生率 32.0% 和 46.7% [3]。

重组pim激酶和激酶测定[1]
如前所述，我们在大肠杆菌中制备了重组PIM1和PIM2作为谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合物。对于抑制剂筛选试验，基于我们的证明，PIM1是一种磷酸化Ser112上BAD的强效激酶，开发了一种固相激酶试验。96孔平底板在4°C下用重组GST-BAD涂覆过夜[1μg/孔的HEPES缓冲液：136 mmol/L NaCl、2.6 mmol/L KCl和20 mmol/L HEPES（pH 7.5）]。然后在室温下用HEPES缓冲液中的10μg/mL牛血清白蛋白将平板封闭1小时。然后去除阻断溶液，向每个孔中加入溶于50%DMSO的每种抑制剂5μL。然后，向每个孔中加入100μL含有25ng重组GST-PIM1激酶的激酶缓冲液[20 mmol/L MOPS（pH 7.0）、12.5 mmol/L MgCl2、1 mmol/L MnCl2、1 mol/L EGTA、150 mmol/L NaCl、10μmol/L ATP、1 mmol/L DTT和5 mmol/Lβ-甘油磷酸]。每种抑制剂的最终浓度约为10μmol/L。将平板放置在预热至30°C的凝胶板干燥器上，使激酶反应进行。60分钟后，通过移除反应缓冲液停止反应，然后向每个孔中加入100μL含有20 mmol/L EDTA的HEPES缓冲液。通过ELISA反应检测磷酸化GST-BAD，使用单克隆抗磷酸BAD（S112）抗体、二级山羊抗小鼠IgG过氧化物酶偶联抗体和Turbo TMB过氧化物酶底物作为第一抗体。存在的磷酸化GST-BAD的水平与450nm处的吸光度成正比。[1]
为了对各种BAD（S112）激酶抑制剂进行定量和动力学研究，使用了溶液相测定法。合成了一种基于人BAD PIM1磷酸化位点的生物素化肽（GGAGAVEIRRHSYPAGTE），并将其用作检测底物。重组GST-PIM1（25 ng/反应）在之前的激酶缓冲液（最终体积100μL）中与不同浓度的抑制剂预孵育。通过加入底物肽进行反应，然后在30°C水浴中孵育5分钟。通过将混合物转移到涂有链霉抗生物素蛋白的96孔板上终止反应，该板含有100μL/孔的40 mmol/L EDTA。使生物素化肽底物在室温下与板结合10分钟。然后如上所述通过ELISA测定磷酸化水平。曲线拟合和酶分析使用适用于Windows的GraphPad Prism 4.00版进行。对于额外的BAD（S112）激酶[PIM2、RSK2（核糖体S6激酶2）和PKA（环AMP依赖性蛋白激酶）]，反应成分如上所述。与PIM1测定一样，使用10μmol/L的ATP浓度。此外，对于每种激酶，确认了反应持续时间内的线性反应速度（数据未显示）。[1]
为了进一步评估槲皮素作为PIM1抑制剂的特异性，还通过商业激酶抑制剂分析服务（KinaseProfiler；Upstate Biotechnology，Charlottesville，VA）研究了其对一组丝氨酸-苏氨酸激酶的活性。所有KinaseProfiler测定均使用10μmol/L ATP浓度进行。[1]

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小分子文库筛选[1]
我们获得了对已知激酶抑制剂具有结构亲和力的1200种化合物的文库。用我们的固相ELISA激酶测定法对整个文库进行了一次筛选，每种化合物的浓度约为10μmol/L。以相同的浓度重新筛选阳性结果。然后在0.001至300μmol/L的浓度范围内筛选在10μmol/L下具有可重复活性的化合物。

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细胞中PIM1激酶活性的测定[1]
将稳定感染空逆转录病毒或编码pim-1的逆转录病毒的RWPE2细胞池以每孔5×105个细胞的速度接种在六孔板中。18小时后，移除正常补充的角质形成细胞培养基，并用无补充的角质生成细胞培养基替换。然后将细胞再孵育20小时。在饥饿期结束前3小时，将槲皮素或等体积的DMSO加入细胞中。在饥饿期结束时，用PBS洗涤细胞两次，随后在含有蛋白酶、磷酸酶抑制剂的变性缓冲液中裂解。

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PIM1的克隆、表达、纯化和结晶[1]
用于晶体学的重组6His标记PIM1蛋白的生产、纯化和表征已在前面描述。为了获得蛋白质与配体复合物的共晶，首先将蛋白质溶液与化合物（溶解在DMSO中）以1mmol/L的最终化合物浓度混合，然后进行结晶。通过坐滴蒸汽扩散实验使蛋白质结晶，其中将等体积的蛋白质（浓度为10-15mg/mL）和储层溶液[0.4-0.9mol/L乙酸钠，0.1mol/L咪唑（pH 6.5）]混合，并在4°C下与储层平衡。晶体通常在2到3天内生长到200×200×800μm的尺寸。

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- JNK1激酶活性测定：在ATP和特定肽底物存在的情况下，将重组JNK1与不同浓度的栎草亭一起孵育。反应混合物在适当温度下孵育一定时间。使用检测方法（如闪烁计数或基于荧光的测定）测量肽底物的磷酸化水平，以确定JNK1活性。根据酶活性抑制的剂量-反应曲线计算抑制常数（Ki） [3]
- DPPH自由基清除实验：将不同浓度的栎草亭溶液与DPPH自由基溶液混合。混合物在室温下避光孵育特定时间。在517 nm波长处测量混合物的吸光度。计算DPPH自由基的清除率，并从浓度-反应曲线确定IC50值 [1]

细胞活力测定[2]
细胞类型： RWPE2 前列腺癌细胞
测试浓度： 0.1、1、10 和 100 μM
孵育时间：72小时
实验结果：抑制RWPE2前列腺癌细胞的生长，平均ED50为3.8 μM。

Animal/Disease Models: SKH-1 hairless mice model[3]
Doses: 4 or 20 nmol
Route of Administration: Topical application; 28 weeks
Experimental Results: Inhibited UVB-induced skin tumorigenesis in SKH-1 hairless mice models. Delayed the development of tumors and decreased tumor volumes in an SKH-1 hairless mice model.

[1]. Isolation and identification of an antioxidant flavonoid compound from citrus-processing by-product. J Sci Food Agric. 2011 Aug 15;91(10):1925-7.

[2]. Characterization of a potent and selective small-molecule inhibitor of the PIM1 kinase. Mol Cancer Ther. 2007 Jan;6(1):163-72.

[3]. Structural and functional analysis of the natural JNK1 inhibitor quercetagetin. J Mol Biol. 2013 Jan 23;425(2):411-23.

- Quercetagetin (6-Hydroxyquercetin) is a flavonoid compound. It was isolated from citrus-processing by-products, and its structure was identified using spectroscopic methods (e.g., UV, MS, NMR) [1]
- The structural analysis shows that Quercetagetin binds to JNK1 through specific interactions, including hydrogen bonds and hydrophobic interactions, which are crucial for its inhibitory activity against JNK1 [3]
Quercetagetin is a hexahydroxyflavone that is flavone substituted by hydroxy groups at positions 3, 5, 6, 7, 3' and 4' respectively. It has a role as an antioxidant, an antiviral agent and a plant metabolite. It is a member of flavonols and a hexahydroxyflavone. It is functionally related to a quercetin.
Quercetagetin has been reported in Citrus reticulata, Cupressus sempervirens, and other organisms with data available.
See also: Chaste tree fruit (part of).

C₁₅H₁₀O₈

318.24

318.038

C, 56.61; H, 3.17; O, 40.22

90-18-6

5281680

Typically exists as light yellow to yellow solids at room temperature

1.912 g/cm3

732.4ºC at 760 mmHg

>300ºC

280.3ºC

1.863

1.693

151.59

6

8

1

23

518

0

O=C1C2C(=CC(=C(C=2O)O)O)OC(C2C=C(O)C(O)=CC=2)=C1O

ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H10O8/c16-6-2-1-5(3-7(6)17)15-14(22)13(21)10-9(23-15)4-8(18)11(19)12(10)20/h1-4,16-20,22H

2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,6,7-tetrahydroxychromen-4-one

6-Hydroxyquercetin; 6-Hydroxyquercetin; Quercetagenin; 3,3',4',5,6,7-Hexahydroxyflavone; UNII-SV68G507VO; 3,5,6,7,3',4'-Hexahydroxyflavone; 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,6,7-tetrahydroxychromen-4-one;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~125 mg/mL (~392.79 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。