ASK1 (pIC50 = 8.3)
Selonsertib (also named GS-4997) targets Apoptosis Signal-regulating Kinase 1 (ASK1/MAP3K5/MAP Kinase Kinase Kinase 5); [1]
Selonsertib is a selective inhibitor of ASK1 [4]

Selonsertib (GS-4997) 是一种临床阶段的 ASK1 抑制剂，已被评估为肾纤维化和糖尿病肾病的潜在治疗方法[1]。 Selonsertib (GS-4997) 是一种每日一次的口服 ASK1 抑制剂，具有高选择性和效力，可与 ASK1 催化激酶结构域中的 ATP 竞争。

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1. Selonsertib（5 µM）可阻止LPS诱导的RAW264.7细胞中JNK和DRP1的线粒体转位，缓解LPS引起的巨噬细胞线粒体损伤（包括降低线粒体氧化应激、恢复线粒体膜电位（Δψm）、抑制线粒体通透性转换孔（mPTP）开放），并抑制LPS刺激后RAW264.7细胞释放炎性细胞因子（TNF-α和IL-1α） [4]
2. 通过基于结构的药物设计得到的一种ASK1抑制剂先导化合物（Selonsertib的结构类似物），在体外实验中表现出强效的MAP3K通路抑制活性 [3]

一种口服生物可利用的凋亡信号调节激酶 1 (ASK1) 抑制剂，可能具有抗炎、抗肿瘤和抗纤维化特性。 ATP 竞争性 ASK1 抑制剂 GS-4997 口服后靶向并结合 ASK1 的催化激酶结构域，防止其磷酸化和激活。这会阻止下游激酶，包括 p38 MAPK 和 c-Jun N 末端激酶 (JNK) 磷酸化。 GS-4997 可抑制细胞增殖，下调纤维化相关基因的表达，并通过阻止 ASK1 依赖性信号转导途径的激活来抑制过度细胞凋亡 [2]。炎症细胞因子的产生也被阻止。

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1. Selonsertib预处理可显著改善LPS/GalN诱导的小鼠急性肝衰竭（ALF）：以剂量依赖方式（15 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg）减轻肝坏死，降低血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）及炎性细胞因子水平；该治疗效果仅在LPS/GalN给药后早期有效（预处理或给药后0.5 h/1 h给药有效，2 h/4 h给药无效） [4]
2. Selonsertib可减轻小鼠肝组织和原代肝巨噬细胞中JNK介导的DRP1线粒体转位，重建线粒体融合-分裂平衡，挽救巨噬细胞线粒体损伤，缓解ALF小鼠的炎症损伤 [4]
3. 一种ASK1抑制剂先导化合物（Selonsertib的结构类似物）在离体灌注心脏的心肌缺血/再灌注损伤模型中可减少梗死面积 [3]
4. 2期临床试验设计：Selonsertib（口服，每日一次）用于研究约300名接受标准治疗的2型糖尿病（T2DM）合并3/4期糖尿病肾病（DKD）患者；主要终点为48周时估算肾小球滤过率（eGFR）的变化，关键次要终点为白蛋白尿的变化 [1]

ASK1酶抑制试验[3]
材料：使用ASKI重组蛋白和HTRF®KinEASE™STK底物3试剂盒。根据供应商提供的方案，在pH 7.0的250mM Hepes缓冲液中进行激酶测定，缓冲液中含有NaN3 0.1%, 0.05% BSA， 0.5mM正钒酸盐，5mM MgCl2,1mM DTT, 1% DMSO（复合添加后）。[3]
方法：IC50测定——在化合物（不同浓度，0 ~ 10uM）、固定剂量的ATP （200uM，终浓度）、底物STK3 （1uM，终浓度）存在下测定每种化合物的IC50值。加入ASK1 （10nM，终浓度）启动酶促反应。实验在室温（~ 22℃）下进行。60 min后，使用CisBio试剂盒提供的停止试剂停止酶促反应。使用Multidrop Combi试剂分配器将所有试剂分配到白色384 SV格莱纳板中。利用BMG PHERAstar平板阅读器在337 nm（激发波长）处检测产物的释放度，并测量665/620 nm（发射波长）的荧光比。[3]

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人和大鼠肝微粒体稳定性测定：[3]
混合的大鼠或人肝微粒体在进一步处理前迅速解冻。在Tecan液体处理机上，将室温NADPH溶液加入含有测试化合物或对照化合物以及肝微粒体的预热孔中，开始反应。最终培养液（20 μL）含有1 μM试验化合物或对照物、肝微粒体（0.5 mg/mL）、2 mM NADPH和50 mM磷酸钾缓冲液（pH 7.4）。37℃孵育0、5、15、30分钟。加入40 μL 0.1 M的三氯乙酸（TCA）猝灭液终止反应。在4500g下离心20 min，用LC-MS/MS测定上清液中被试化合物或对照物的峰面积。Waters Quattro Premier UPLC-MS/MS系统包括Acquity二元溶剂管理器使用Waters Acquity样本管理器和Waters Acquity样本管理器进行肝微粒体样本分析。使用Waters MassLynx软件进行仪器控制、数据采集、数据处理和色谱/光谱浏览。液相色谱使用本·C18海域,执行1.7μm, ID 2.1 x 50毫米50°C列与流动相洗脱:0.04%的甲酸水和流动相乙:0.04%的甲酸乙腈流量为0.35毫升最低为1和一个梯度1%到99%的B / 1.0分钟。代谢半衰期(t1/2)值计算使用公式1,一个是初始峰面积表示为100%,一阶速率常数k, t是时间分钟。[3]

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Selonsertib（也称为 GS-4997）是一种高选择性和强效的每日一次口服 ASK1（凋亡信号调节激酶 1）抑制剂，具有高强效和选择性，pIC50 为 8.3-0.07。 Selonsertib (GS-4997) 是一种每日一次的口服 ASK1 抑制剂，具有高选择性和效力，可与 ASK1 催化激酶结构域中的 ATP 竞争。

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1. ASK1抑制剂的基于结构药物设计实验：利用结构生物学技术（ASK1-抑制剂结合模式的X射线晶体学分析）对已知的ASK1抑制剂进行解构和重新优化；表征ASK1蛋白与小分子抑制剂之间的关键相互作用，解析先导化合物与ASK1激酶域结合的晶体结构，以指导强效ASK1抑制剂（包括Selonsertib）的设计 [3]
2. ASK1抑制剂的激酶选择性实验：评估ASK1抑制剂先导化合物（Selonsertib类似物）的整体激酶选择性，以确认其对ASK1/MAP3K通路的特异性抑制作用 [3]

ASK1-HEK293 P-JNK细胞测定。[3]
利用四环素诱导基因表达（Tet-on）系统对人ASK1/HEK-293细胞进行工程化，使其表达人ASK1，该系统通过在培养基中添加四环素（Tet）来激活感兴趣的基因。细胞保存在含有10%胎牛血清、100units/ml青霉素G/100ug/ ml硫酸链霉素、500ug/ml遗传素和5ug/ml囊胚素的DMEM高糖培养基中。细胞以300,000个细胞/ml， 145ul/孔的剂量接种于96孔黑色透明板上，涂有PolyD Lysine，在37°C下5% CO2下孵育5小时，然后在所有孔中加入15ul四环素（11ug/ml）诱导ASK1表达（没有Tet/ no H2O2阴性对照除外）。细胞在37°C、5% CO2下孵育过夜。第二天早上制备5倍浓度连续稀释的复方板，每次稀释取0.040 mL转移到细胞板上。然后在37°C下5% CO2下孵育30分钟，然后通过在所有孔中添加20ul 10mM H2O2激活ASK-1 30分钟（阴性对照除外）。在H2O2孵育结束时，轻轻抽吸细胞上清，加入70ul/well的全MSD裂解缓冲液裂解细胞。采用MESO Scale ELISA法检测磷酸化和总JNK水平。[3]

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小鼠巨噬细胞RAW264.7在含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的1640培养基中培养，并在含5% CO2的湿化气氛中37℃保存。将细胞用Selonsertib (GS-4997)（5µM）或mdivi（10µM）预孵育6 h，然后用LPS （500 ng/ml）孵育4 h，收集上清和细胞样本进行进一步分析[4]。

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一种口服生物可利用的凋亡信号调节激酶 1 (ASK1) 抑制剂，可能具有抗炎、抗肿瘤和抗纤维化特性。 ATP 竞争性 ASK1 抑制剂 GS-4997 口服后靶向并结合 ASK1 的催化激酶结构域，防止其磷酸化和激活。这会阻止下游激酶，包括 p38 MAPK 和 c-Jun N 末端激酶 (JNK) 磷酸化。 GS-4997 可抑制过度细胞凋亡、抑制细胞增殖、下调纤维化相关基因的表达，并通过阻止 ASK1 依赖性信号转导途径的激活来阻止炎症细胞因子的产生。

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1. RAW264.7巨噬细胞实验：在存在/不存在Selonsertib（5 µM）的条件下，用LPS刺激RAW264.7细胞；通过MitoSox染色检测线粒体氧化应激，JC-1染色测定线粒体膜电位（Δψm），钙黄绿素染色评估线粒体通透性转换孔（mPTP）开放；采用蛋白质印迹法分析全细胞和线粒体组分中p-JNK、JNK、p-DRP1和DRP1的水平；通过ELISA定量TNF-α和IL-1α的分泌水平 [4]
2. 原代肝巨噬细胞实验：从经LPS/GalN处理且接受/未接受Selonsertib（30 mg/kg）治疗的小鼠中分离原代肝巨噬细胞；用蛋白质印迹法检测p-JNK、JNK、p-DRP1、DRP1及线粒体动力学相关蛋白水平；通过MitoSox染色测定线粒体氧化应激 [4]

ALF小鼠模型及治疗[4]
C57BL/6J小鼠腹腔注射LPS（10 μg/kg，Sigma-Aldrich，美国密苏里州圣路易斯）和D-GalN（400 mg/kg，Sigma-Aldrich），建立LPS/GalN诱导的ALF小鼠模型。Selonsertib (GS-4997)（15、30和60 mg/kg，MCE）于LPS/GalN注射前30分钟或注射后0.5、1、2和4小时腹腔注射。为了进一步研究JNK通路在介导Selonsertib (GS-4997)保护作用中的作用，本研究采用腹腔注射法给予JNK激活剂茴香霉素（20 mg/kg，MCE），并联合使用Selonsertib (GS-4997)。另设一组小鼠，在LPS/GalN注射前30分钟腹腔注射mdivi（30 mg/kg，MCE）。对照组注射溶剂（n = 6）。分别于LPS/GalN注射后0.5、1、2、4和6小时处死小鼠，采集血清和肝脏样本以评估肝损伤程度。同时检测血清的生化指标。对肝脏样本进行组织化学和蛋白质印迹分析。大鼠药代动力学：[3]
对已插管的雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠禁食过夜后，以5 mg/kg的剂量通过灌胃给予19（Selonsertib (GS-4997)的类似物），该化合物配制于20% (2-羟丙基)-β-环糊精的0.05M甲磺酸溶液中。给药体积为5 ml/kg，19以1 mg/ml的浓度配制成溶液。保留剩余的给药液，并分析其精确的剂量浓度。给药后，分别于0.25、0.5、1、2、4、7和24小时，通过颈静脉导管从清醒的动物身上采集200 μl血液。血液样本保存在冰上，直至进行血浆处理。血浆样品经5℃离心制备后，冷冻保存于-70℃直至分析。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析19种血浆浓度。简而言之，取25 μL血浆与100 μL含有适量内标的乙腈混合。样品涡旋振荡1分钟后，于2-8℃下以300 rpm离心5分钟。取40 μL上清液，用水以1:2的比例稀释，并涡旋振荡5分钟。使用配备岛津液相色谱系统和LEAP自动进样器的AB Sciex API-4000三重四极杆质谱仪进行分析。采用反相梯度洗脱法，在Phenomenex Kinetic C18色谱柱（2.1 mm内径×50 mm；粒径5.0 μm）上，流速为0.500 mL/min，对测试样品进行分离。流动相为水（A）和乙腈（B），两者均添加了0.04%（体积比）的甲酸。样品经电离后，采用多反应监测（MRM）模式进行检测，监测m/z 394.051→336.100的离子对。使用在混合大鼠血浆中制备的含内标的分析物标准品对样品进行定量。该方法的定量下限为1.00 ng/mL，线性范围为1.00 ng/mL至2500 ng/mL。朗根多夫灌注心脏模型：[3]
雄性Sprague Dawley大鼠购自Harlan实验室，并在实验前适应环境至少48小时。每笼饲养2-3只大鼠，实验期间自由摄食饮水。在离体缺血/再灌注（I/R）前1、4、6或8小时，分别给予大鼠赋形剂或化合物。采用恒压循环朗根多夫装置进行全心无血流离体I/R。在腹腔注射氯胺酮（60 mg/kg）和赛拉嗪（7.5 mg/kg）前10分钟，给予大鼠500 U/kg肝素。术前皮下注射镇痛药（盐酸丁丙诺啡，0.05 mg/kg）。确认麻醉和镇痛深度合适后，处死动物，迅速取出心脏并置于冰冷的改良克氏-亨氏缓冲液中。随后对主动脉进行插管，将心脏安装于朗根多夫灌注装置上，并以80 mmHg的恒定压力用含氧克氏-亨氏缓冲液进行灌注。心脏始终浸没在温度为37°C的缓冲液中。经过30分钟的平衡期后，心脏经历30分钟的无血流缺血，随后进行90分钟的再灌注。缺血/再灌注结束后，将心脏置于干冰上速冻，并使用大鼠心脏切片器和剃须刀片进行冠状切片，切成3 mm厚的切片（共6块）。然后用1% 2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色10分钟以显示存活组织，最后在10%福尔马林溶液中固定过夜。

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1. 小鼠急性肝衰竭模型方案：采用LPS/GalN诱导小鼠发生急性肝衰竭；Selonsertib以15 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg的剂量，通过未指定的途径（LPS/GalN注射前或注射后0.5 h/1 h/2 h/4 h给药）给药；茴香霉素（20 mg/kg）和mdivi（30 mg/kg，DRP1抑制剂）用作阳性/对照药物；采用CBA细胞因子分析法测定血清ALT、AST、TBIL和炎症细胞因子的水平；采用H&E染色评估肝组织病理变化；采用Western blot分析全肝和线粒体组分中p-JNK、JNK、p-DRP1、DRP1和线粒体动力学相关蛋白的表达[4]
2.离体灌注心脏模型方案：采用离体心脏建立心肌缺血/再灌注损伤模型；给予主要ASK1抑制剂（Selonsertib类似物）（剂量未指定）以评估其对梗死面积缩小的影响[3]
3. 糖尿病肾病（DKD）II期临床试验方案：约300例接受标准治疗的2型糖尿病合并3/4期DKD患者按分层方式（基于eGFR和尿白蛋白/肌酐比值）随机分配至四个剂量组之一；每日口服一次Selonsertib，持续48周；主要终点为48周时eGFR的变化，关键次要终点为白蛋白尿的变化[1]

1. 对一种先导 ASK1 抑制剂（Selonsertib 的类似物）在 2.25 mpk 剂量下的模拟大鼠药代动力学进行了评估，并报告了模拟的 ASK1 抑制数据 [3]

[1]. Nephron . 2015;129(1):29-33.

[2]. NCI Drug Dictionary. ASK1 inhibitor GS-4997

[3]. ACS Med Chem Lett . 2017 Feb 8;8(3):316-320.

[4]. Cell Biosci . 2021 Jan 7;11(1):9.

Selonsertib 正在临床试验 NCT03053050（Selonsertib 治疗成人非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 和桥接 (F3) 纤维化的安全性和有效性研究）中进行研究。
Selonsertib 是一种口服生物利用度高的凋亡信号调节激酶 1 (ASK1) 抑制剂，具有潜在的抗炎、抗肿瘤和抗纤维化活性。口服后，Selonsertib 以 ATP 竞争性方式靶向并结合 ASK1 的催化激酶结构域，从而阻止其磷酸化和激活。这可以阻止下游激酶（例如 c-Jun N 端激酶 (JNK) 和 p38 丝裂原活化蛋白激酶 (p38 MAPK)）的磷酸化。 GS-4997 通过抑制 ASK1 依赖性信号转导通路的激活，从而抑制炎症细胞因子的产生，下调纤维化相关基因的表达，抑制过度凋亡并抑制细胞增殖。ASK1，又称丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶 5 (MAP3K5)，在氧化应激、内质网 (ER) 应激、钙离子内流和感染等情况下被激活。它在某些心血管疾病、神经退行性疾病、糖尿病以及某些类型癌症的发生发展中起着关键作用。

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药物适应症
用于治疗非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)。

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凋亡信号调节激酶 1 (ASK1/MAP3K) 是丝裂原活化蛋白激酶家族成员，已被证实参与急性缺血/再灌注损伤。利用基于结构的药物设计方法，对已知的ASK1抑制剂进行解构和重新优化，鉴定出一种先导化合物。该化合物在离体灌注心脏损伤模型中表现出对MAP3K通路的强效抑制作用，并能缩小梗死面积。[3]

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背景：急性肝衰竭（ALF）死亡率高，除肝移植和人工肝疗法外，目前尚无其他有效治疗方法。本研究旨在探讨选择性ASK1抑制剂selonsertib治疗ALF的效果、治疗窗口和机制。结果：采用脂多糖/D-半乳糖胺（LPS/GalN）模型模拟ALF。我们发现，selonsertib预处理可显著改善ALF，表现为肝坏死面积减少，血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和炎症细胞因子水平降低。然而，selonsertib 仅在 LPS/GalN 给药后早期有效，其有限的治疗窗口与 JNK 和 DRP1 的激活及其线粒体转位有关。进一步的实验表明，selonsertib 可通过评估巨噬细胞的线粒体膜电位和线粒体通透性转换孔的开放情况来减轻 LPS 诱导的巨噬细胞线粒体损伤。此外，selonsertib 还通过减少 DRP1 介导的线粒体功能障碍来抑制巨噬细胞中炎症细胞因子的释放，这一结果已通过使用特异性 DRP1 抑制剂 mdivi 得到证实。结论：selonsertib 通过减弱 JNK 介导的 DRP1 线粒体转位，进而挽救巨噬细胞中的线粒体损伤，从而保护机体免受 LPS/GalN 诱导的急性肝衰竭 (ALF) 的损伤，并可能对早期 ALF 患者具有治疗潜力。[4] Selonsertib (GS-4997) 是一种每日一次口服的选择性 ASK1 抑制剂，可直接减轻氧化应激的病理后果（ASK1 是氧化应激诱导有害效应的关键介质）[1]
2. Selonsertib 通过抑制巨噬细胞中的 ASK1-JNK-DRP1 通路、重建线粒体融合-分裂平衡、修复线粒体损伤和减少炎症细胞因子释放，从而保护机体免受 LPS/GalN 诱导的急性肝衰竭 (ALF) 的损害；其有限的治疗窗口与 JNK 和 DRP1 的激活/线粒体易位有关[4]
3. ASK1 参与急性心肌缺血/再灌注损伤，基于结构的 ASK1 抑制剂（包括 Selonsertib 类似物）设计旨在开发治疗心力衰竭的潜在药物 [3]
4. 大多数糖尿病肾病 (DKD) 患者尽管接受标准治疗，病情仍会进展；Selonsertib 正在进行一项针对 DKD 的 II 期安慰剂对照临床试验，该试验的设计针对 DKD 特有的挑战（研究人群、疗效指标、治疗周期、统计方法）进行了优化 [1]
5. Selonsertib 对早期急性肝衰竭 (ALF) 患者具有潜在的治疗价值，目前除肝移植和人工肝疗法外，尚无其他有效的 ALF 治疗方法 [4]

C24H24FN7O

445.49

445.202

C, 64.71; H, 5.43; F, 4.26; N, 22.01; O, 3.59

1448428-04-3

1448428-04-3;1448428-05-4 (HCl);

71245288

White to off-white

1.4±0.1 g/cm3

1.704

3.17

1

6

6

33

692

0

FC1C([H])=C(C([H])([H])[H])C(=C([H])C=1C(N([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C(C2=NN=C([H])N2C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=N1)=O)N1C([H])=NC(=C1[H])C1([H])C([H])([H])C1([H])[H]

YIDDLAAKOYYGJG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H24FN7O/c1-14(2)32-13-27-30-23(32)19-5-4-6-22(28-19)29-24(33)17-10-21(15(3)9-18(17)25)31-11-20(26-12-31)16-7-8-16/h4-6,9-14,16H,7-8H2,1-3H3,(H,28,29,33)

5-(4-cyclopropylimidazol-1-yl)-2-fluoro-4-methyl-N-[6-(4-propan-2-yl-1,2,4-triazol-3-yl)pyridin-2-yl]benzamide

Selonsertib free base; GS-4997; GS4997; 5-(4-cyclopropyl-1H-imidazol-1-yl)-2-fluoro-N-(6-(4-isopropyl-4H-1,2,4-triazol-3-yl)pyridin-2-yl)-4-methylbenzamide; Selonsertib [INN]; Selonsertib(GS-4997); 5-(4-cyclopropylimidazol-1-yl)-2-fluoro-4-methyl-N-[6-(4-propan-2-yl-1,2,4-triazol-3-yl)pyridin-2-yl]benzamide; GS 4997; Selonsertib

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.62 mg/mL (5.88 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: (饱和度未知) in (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。