| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Axl(IC50= 0.49 nM)
Protein sumoylation [1] - Gephyrin SUMOylation [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：2-D08 是一种合成黄酮，是一种细胞渗透性蛋白质苏酰化抑制剂，具有独特的作用机制。它还抑制 Axl、IRAK4、ROS1、MLK4、GSK3β、RET、KDR 和 PI3Kα，生化测定中的 IC50 值分别为 0.49、3.9、5.3、9.8、11、11、17 和 35 nM。蛋白质苏酰化是一种动态翻译后修饰，参与细胞稳态和发育过程中的多种生物过程。苏酰化已被证明在癌症中发挥着关键作用。 2-D08具有抗聚集和神经保护作用，可用于相关疾病的治疗。激酶测定：2-D08 是一种细胞渗透性、机制独特的蛋白质苏酰化抑制剂。它还抑制 Axl、IRAK4、ROS1、MLK4、GSK3β、RET、KDR 和 PI3Kα，生化测定中的 IC50 值分别为 0.49、3.9、5.3、9.8、11、11、17 和 35 nM。 Axl 激酶抑制剂 (2D08) 的 IC50 值通过 AlphaScreen 发光检测技术利用激酶介导的聚 GAT 磷酸化来测定。抑制剂在八个稀释点进行测试，一式两份。细胞测定：将第5代人肺多能细胞以每孔250 000个细胞的密度接种在含有生长培养基的六孔板中。 24小时后，将多能细胞与含有0.1%DMSO（载体）或2D08（0.1、1、10μM）的DMEM+0.5%BSA+青霉素/链霉素在湿润的5%CO2培养箱中于37℃孵育3小时。将这些细胞用胰蛋白酶消化，并以每孔 20 000 个细胞分三次重复接种在孔径为 8 μm 的 12 孔细胞培养 Transwell 插入物上，其中含有 DMEM+0.5% BSA+青霉素/链霉素。下层 Transwell 室含有 DMEM+10% FBS+青霉素/链霉素，用于允许细胞迁移。将 0.1% DMSO 或 2D08 添加到相应的上下 Transwell 室中。 16小时后，用棉签除去未迁移的细胞。迁移的细胞用 4% PFA 固定，用甲醇透化并用结晶紫染色。每个跨孔的场图像由倒置光学显微镜拍摄。
2-D08 被证实是一种具有细胞渗透性且作用机制独特的蛋白质类泛素化修饰抑制剂。在终点生化实验中，将2-D08与SUMO1、E1酶、E2酶、荧光底物及ATP在适宜缓冲液中共同孵育（90分钟后用EDTA终止反应），通过微流控电泳迁移率变动分析中比率峰高的量化，发现2-D08可抑制类泛素化过程；在动力学生化类泛素化实验中，将2-D08与上述相同组分共同孵育并持续监测110分钟，采用相同的微流控电泳迁移率变动分析方法量化底物转化，结果显示2-D08仍具有抑制活性[1] - 在原代海马神经元中，用2-D08处理会影响gephrin蛋白的乙酰化水平。邻近连接实验（PLA）结果显示，当2-D08阻断gephrin蛋白的类泛素化修饰后，与对照组相比，gephrin蛋白的乙酰化水平（通过Ac-Lys的PLA信号检测）显著降低[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
将 SUMO 抑制剂 2-D08 体内注射到 α2−/− 中，并对 gephyrin 簇与 γ2 GABAAR 共定位进行形态分析； （右图）定量显示，与对侧半球相比，同侧半球上的 gephyrin 聚类以及 γ2 GABAAR 显着增加。将 SUMO 途径抑制剂 2-D08 (30 μM) 或盐水注射到 α2−/− 小鼠 (n=3) 靠近海马区域的一侧半球上。注射后 24 小时，我们分析了同侧半球和对侧半球中的 gephyrin 和 γ2 GABAAR 簇。人们可以使用针对 CD68 的抗体（一种小胶质细胞的标记物）在 2-D08 注射引起的病变附近看到炎症，但用盐水则看不到。
在CA1区或新皮质神经元中缺乏gephrin蛋白簇的Gabra2基因敲除（α2⁻/⁻）小鼠模型中，体内注射类泛素化抑制剂2-D08可挽救gephrin蛋白的聚集。形态学分析显示，与对侧半球相比，注射2-D08的同侧半球中，与γ2 GABAₐ受体共定位的gephrin蛋白簇数量显著增加[2] |
| 酶活实验 |
2-D08 是一种具有细胞渗透性、机制独特的蛋白质苏酰化抑制剂。它还抑制 Axl、IRAK4、ROS1、MLK4、GSK3β、RET、KDR 和 PI3Kα，生化测定中的 IC50 值分别为 0.49、3.9、5.3、9.8、11、11、17 和 35 nM。 Axl 激酶抑制剂 (2D08) 的 IC50 值通过 AlphaScreen 发光检测技术利用激酶介导的聚 GAT 磷酸化来测定。抑制剂在八个稀释点进行测试，一式两份。
终点生化类泛素化实验：首先，在适宜缓冲液中制备包含SUMO1、E1酶、E2酶、荧光底物和ATP的反应混合物；向反应混合物中加入不同浓度的2-D08（或对照化合物），孵育90分钟；孵育结束后，加入EDTA终止反应；随后，使用Perkin Elmer EZ Reader II进行微流控电泳迁移率变动分析，通过测量比率峰高量化荧光底物的转化，以此评估2-D08对类泛素化酶系统的抑制活性[1] - 动力学生化类泛素化实验：在适宜缓冲液中制备与终点实验相同的反应混合物（包含SUMO1、E1酶、E2酶、荧光底物、ATP和2-D08）；不同于终点实验在固定时间终止反应，而是对反应进行110分钟的持续监测；在不同时间点，使用微流控电泳迁移率变动分析（Perkin Elmer EZ Reader II）测量比率峰高，动态量化底物转化，从而分析2-D08对类泛素化的时间依赖性抑制作用[1] |
| 细胞实验 |
将第 5 代人肺多能细胞以每孔 250 000 个细胞的密度接种在含有生长培养基的六孔板中。 24小时后，将多能细胞与含有0.1%DMSO（载体）或2D08（0.1、1、10μM）的DMEM+0.5%BSA+青霉素/链霉素在湿润的5%CO2培养箱中于37℃孵育3小时。将这些细胞用胰蛋白酶消化，并以每孔 20 000 个细胞分三次重复接种在孔径为 8 μm 的 12 孔细胞培养 Transwell 插入物上，其中含有 DMEM+0.5% BSA+青霉素/链霉素。下层 Transwell 室含有 DMEM+10% FBS+青霉素/链霉素，用于允许细胞迁移。将 0.1% DMSO 或 2D08 添加到相应的上下 Transwell 室中。 16小时后，用棉签除去未迁移的细胞。迁移的细胞用 4% PFA 固定，用甲醇透化并用结晶紫染色。每个跨孔的场图像由倒置光学显微镜拍摄。
神经元中gephrin蛋白乙酰化的邻近连接实验（PLA）：培养原代海马神经元（处于适宜发育阶段，如本研究其他实验中提及的DIV 8+7）；用2-D08（文献中未明确浓度）处理神经元，以阻断gephrin蛋白的类泛素化修饰；对照组采用未用2-D08处理或经其他相关处理（如ERK1/2抑制剂PD98059）的神经元；处理后固定神经元，使用针对gephrin和Ac-Lys（乙酰化赖氨酸）的特异性抗体进行PLA实验；通过荧光显微镜观察并拍摄PLA信号；量化PLA信号（如每个细胞或每个突触区域的信号点数量），比较2-D08处理组与对照组中gephrin蛋白的乙酰化水平[2] |
| 动物实验 |
Dissolved in 30 μM (10 μl); injected on one hemisphere near the hippocampal area
α2 / mice (8 to 10 weeks old) In vivo rescue experiment of gephyrin clustering in α2⁻/⁻ mice: Use Gabra2-null (α2⁻/⁻) mice as the experimental model (number of mice: n=3 for mRNA and protein expression analysis, n=5 for in utero electroporation experiments; gender not specified). Prepare 2-D08 (formulation not specified in the literature) and inject it into one hemisphere (ipsilateral hemisphere) of the mice; the contralateral hemisphere serves as the internal control without 2-D08 injection (or with vehicle injection, not specified). After injection (time interval between injection and analysis not specified), sacrifice the mice and dissect the brain tissues. Prepare brain sections and perform immunofluorescence staining using antibodies against gephyrin and γ2 GABAₐ Rs. Use a fluorescence microscope to image the sections and analyze the colocalization of gephyrin clusters with γ2 GABAₐ Rs. Quantify the number or size of gephyrin clusters in the ipsilateral and contralateral hemispheres to evaluate the rescue effect of 2-D08 [2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
2-D08 (chemical name: 2',3',4'-trihydroxyflavone) was initially found as a contaminant in a screening well from a commercial supplier, which was likely generated by an unanticipated Wessely-Moser rearrangement during the deprotection step of methyl ether under vigorous conditions. An efficient synthesis method for 2-D08 and its structurally related but inactive isomer was developed in the study [1]
- Protein sumoylation is a dynamic posttranslational modification involved in diverse biological processes during cellular homeostasis and development, and it plays a critical role in cancer. However, there were few small molecule probes available to inhibit enzymes involved in the SUMO conjugation process before the identification of 2-D08 [1] - The crosstalk between SUMOylation, acetylation, and phosphorylation pathways regulates gephyrin scaffolding at GABAergic synapses. 2-D08, as a SUMO inhibitor, blocks gephyrin SUMOylation, which further affects gephyrin acetylation and ultimately rescues gephyrin clustering in α2⁻/⁻ mice, indicating that 2-D08 acts as a tool compound to study the role of SUMOylation in gephyrin scaffolding and GABAergic transmission [2] |
| 分子式 |
C15H10O5
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|---|---|---|
| 分子量 |
270.24
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| 精确质量 |
270.052
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| 元素分析 |
C, 66.67; H, 3.73; O, 29.60
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| CAS号 |
144707-18-6
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
22507438
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
517.9±50.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
201.7±23.6 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.732
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| LogP |
2.77
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| tPSA |
87
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
419
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC2C(C=C(C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3)OC=2C=C1)=O
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| InChi Key |
JJAXTFSPCLZPIW-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H10O5/c16-10-6-5-9(14(18)15(10)19)13-7-11(17)8-3-1-2-4-12(8)20-13/h1-7,16,18-19H
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| 化学名 |
2-(2,3,4-trihydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one
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| 别名 |
2-D08; 2D08; 2 D08.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 54~150 mg/mL ( 199.82~555.06 mM )
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.7004 mL | 18.5021 mL | 37.0041 mL | |
| 5 mM | 0.7401 mL | 3.7004 mL | 7.4008 mL | |
| 10 mM | 0.3700 mL | 1.8502 mL | 3.7004 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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