Vehicle for drug delivery
Transcription Factor EB (TFEB) activator, cholesterol depletion agent[1]
Cholesterol homeostasis modulator[2]

用 HP-β-CD 处理细胞会激活转录因子 EB（溶酶体活性和自噬的基本调节因子），并促进自噬清除 [1]。 HP-β-CD 疗法可降低细胞内胆固醇，并通过 G2/M 细胞周期停滞和死亡有效抑制白血病细胞增殖。暴露72小时后，HP-β-CD的IC50值在3.86-10.09 mM范围内。 HP-β-CD 对携带 T315I BCR-ABL 突变（对大多数 ABL 酪氨酸激酶抑制剂具有抗性）的 CML 细胞和具有白血病干细胞特征的缺氧适应 CML 细胞也显示出抗癌作用。此外，HP-β-CD 会降低人原代 AML 和 CML 细胞的集落形成能力 [2]。

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用HPβCD（0.1-10 mM）处理稳定表达TFEB-3×FLAG的HeLa细胞，诱导了TFEB的核转位，表明TFEB被激活。核转位程度呈浓度依赖性，在1-10 mM时观察到最大激活[1]
HPβCD（1 mM）处理24小时后，上调了HeLa/TFEB细胞中参与溶酶体功能的TFEB靶基因（GBA：5.1倍；HEXA：2.7倍；LAMP1：3.5倍）和自噬（MAPLC3B：4.8倍；SQSTM1：2.1倍；BECN1：3.0倍）的mRNA表达[1]
HPβCD（1 mM）处理诱导自噬激活，表现为GFP-LC3点状结构增加、Western blot中LC3-II/LC3-I比率增加以及在巴弗洛霉素A1（100 nM）存在下自噬通量增强[1]
在LINCL患者来源的成纤维细胞中，HPβCD（0.1-10 mM）处理以浓度和时间依赖性的方式减少了自发荧光蜡样脂褐素的积累，在1-10 mM处理3天后达到最大清除效果[1]
HPβCD（1 mM）处理LINCL成纤维细胞3天后，也诱导了TFEB核转位，并上调了溶酶体（GBA：2.7倍；HEXA：2.8倍；LAMP1：1.6倍）和自噬（MAPLC3B：3.2倍；SQSTM1：2.5倍；BECN1：2.5倍）基因的表达[1]
TFEB siRNA沉默减弱了HPβCD介导的蜡样脂褐素清除以及溶酶体/自噬基因的上调，证实了TFEB在该过程中的作用[1]
ATG7 siRNA沉默也减少了HPβCD介导的蜡样脂褐素清除，表明清除过程依赖于自噬[1]
HPβCD处理（0.1-10 mM，3天）未在LINCL成纤维细胞中诱导早期或晚期凋亡，通过膜联蛋白V和碘化丙啶染色测定[1]
HP-β-CyD 以剂量和时间依赖性的方式抑制多种白血病细胞系（急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病）的生长。在13个细胞系中，处理72小时的IC₅₀值范围为3.86 mM至10.09 mM[2]
HP-β-CyD (5-15 mM) 在BV173和K562细胞中诱导细胞凋亡，通过膜联蛋白V/7-AAD染色在24小时后测定[2]
HP-β-CyD (5-15 mM) 在BV173、K562及其他白血病细胞系中诱导G₂/M期细胞周期停滞，通过碘化丙啶染色和流式细胞术在12小时后测定[2]
HP-β-CyD (5-10 mM) 处理1-3小时，以时间和剂量依赖性的方式促进胆固醇从Ba/F3 BCR-ABLWT和BV173细胞中外排，并降低细胞内胆固醇含量[2]
HP-β-CyD (10 mM) 处理调节白血病细胞中的信号通路：在BV173细胞中抑制Stat5、Akt和Lyn的磷酸化，在K562细胞中降低p-Lyn水平（8-24小时后恢复），同时增加两个细胞系中的p-ERK1/2水平[2]
HP-β-CyD 抑制表达T315I BCR-ABL突变（对伊马替尼和达沙替尼耐药）的Ba/F3细胞的生长，IC₅₀为6.87 ± 0.76 mM，与对野生型细胞的效果相当[2]
HP-β-CyD 抑制低氧适应（干细胞样）CML细胞系K562/HA和KCL22/HA的生长，IC₅₀值分别为3.86 mM和5.61 mM[2]
HP-β-CyD (5-15 mM) 在甲基纤维素培养体系中抑制来自急性髓系白血病（AML）和加速期慢性髓系白血病（CML-AP）患者的原代单个核细胞的集落形成能力[2]
HP-β-CyD (高达15 mM) 未显著抑制正常人原代肝细胞的生长（IC₅₀: 18.65 mM）[2]
在使用正常小鼠骨髓单个核细胞的集落形成实验中，5 mM和15 mM的HP-β-CyD分别将集落数减少至对照的93%和84%，而25 mM则将其减少至52.4%[2]

由于溶酶体贮积病患者产生的细胞溶酶体自噬系统活性降低，HP-β-CD 治疗可增加转录因子 EB 介导的蛋白脂质聚集体清除和积累 [1]。当HP-β-CD腹腔注射时，白血病小鼠模型可以具有更高的存活率。全身给予 HP-β-CD 的小鼠没有表现出任何明显的负面影响 [2]。

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与载体对照组相比，腹腔注射HP-β-CyD（50 mM或150 mM溶于生理盐水，200 μL，每日两次，连续20天）显著延长了移植Ba/F3 BCR-ABLWT白血病细胞的裸鼠的生存期[2]
与载体对照组相比，腹腔注射HP-β-CyD（50 mM或150 mM溶于生理盐水，200 μL，每周连续5天，持续13周）显著延长了异种移植人BV173白血病细胞的NOD/SCID小鼠的生存期[2]

进行了三肽基肽酶1（TPP1）酶活性测定，以确认LINCL患者来源的成纤维细胞与健康个体成纤维细胞相比的酶活性缺失。裂解细胞后，收集上清液，使用特定底物测量TPP1活性[1]

HP-β-CyD对体外细胞生长的影响[2]
如前所述，使用台盼蓝染料排除法评估细胞存活率，使用改良的甲基噻唑二苯基四氮唑（MTT）试验和SF试剂评估细胞增殖。将包括人原代肝细胞在内的细胞以每孔100μL培养基中1×104个细胞的密度接种在平底96孔板中，并与不同浓度的HP-β-CyD一起孵育72小时。计算每种浓度的三次重复的平均值。

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蛋白质印迹分析[2]
如前所述，使用裂解缓冲液从细胞中制备用或不用HP-β-CyD处理的白血病细胞的全细胞裂解物，并稍作修改。使用10%NuPAGE电泳系统分离蛋白质，转移到硝化纤维膜上，在室温下用5%牛血清白蛋白封闭1小时，并在4°C下与一抗孵育过夜。抗Akt、磷酸化Akt（Thr308或Ser473）、磷酸化Erk1/2（Thr202/Thr204）、磷酸酸化Stat5、Lyn、Stat5、Erk1/2、肌动蛋白和磷酸化Lyn的抗体用作一抗。辣根过氧化物酶偶联免疫球蛋白IgG用作第二抗体。使用增强型化学发光试剂盒进行检测。这些结果代表了至少两个独立的实验。使用ImageJ软件定量背景减除后的免疫印迹信号强度。

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细胞周期分析[2]
如前所述进行人白血病细胞系的细胞周期分析。简而言之，用指定浓度的HP-β-CyD处理1×106个细胞。HP-β-CyD处理后12或24小时，收集细胞并用70%乙醇固定。然后将细胞与0.1%Triton X-100和0.5%RNase A在室温下孵育30分钟，并用50μg/mL碘化丙啶染色。通过流式细胞术分析细胞DNA含量，并使用带有CellQuest软件的FACS Caliber流式细胞仪测定细胞周期特征。数据为三个独立实验的平均值±标准差。

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细胞凋亡检测[2]
根据制造商的说明，通过用7-氨基放线菌素D（7-AAD）和膜联蛋白V对细胞进行染色来进行凋亡测定。细胞在6孔板中以4×105个细胞的密度培养，并与不同浓度的HP-β-CyD一起孵育12或24小时。然后，用7-氨基放线菌素D（7-AAD）和膜联蛋白V-APC对细胞进行染色，并使用带有Diva软件的FACSAriaII系统进行分析。

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造血集落形成试验[2]
如前所述，使用标准甲基纤维素培养试验研究了正常造血祖细胞中HP-β-CyD的毒性。将10周龄C57BL/6N小鼠骨髓中的2×104个单核细胞暴露于1 mL MethoCult M3434中的0、5、15或25 mM HP-β-CyD。培养8天后，使用倒置显微镜计数菌落数量。数据表示菌落的平均数±标准差（n=3）。临床样本是在知情同意的情况下获得的。白血病患者的单核细胞在含有重组细胞因子的半固体培养基中培养。

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胆固醇测定[2]
将白血病细胞（3×106）与5或10 mM HP-β-CyD在37°C的HBSS（pH 7.4）中孵育1、2或3小时。通过离心（3000rpm，5分钟）回收细胞培养上清液。使用胆固醇E-test Wako测定上清液中总胆固醇的浓度。数据为三个实验的平均值±标准差。用甲醇：氯仿（1:2）提取细胞脂质，酶法测定总胆固醇和游离胆固醇。酯化胆固醇的量是通过从总胆固醇中减去游离胆固醇来计算的。通过BCA测定法测定细胞蛋白浓度。数据为三个实验的平均值±标准差。对于filipin染色，将细胞与β-CyDs（10 mM）一起孵育1小时。此后，使用基于胆固醇细胞的检测试剂盒检测细胞胆固醇。

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对于免疫荧光实验，将细胞接种在盖玻片上并用HPβCD处理，然后固定和透化。使用针对FLAG、LC3、LAMP2或TFEB等靶标的一抗，然后使用荧光二抗。通过共聚焦显微镜获取图像，并分析共定位和荧光强度[1]
使用定量RT-PCR测量mRNA表达。从处理细胞中提取总RNA，合成cDNA，并使用基因特异性引物进行qPCR。表达水平归一化至GAPDH，并与未处理对照进行比较[1]
进行Western blot分析以检测蛋白水平。裂解细胞，通过SDS-PAGE分离蛋白，转膜，使用抗LC3和GAPDH的一抗以及HRP标记的二抗进行探测，最后进行化学发光检测[1]
使用膜联蛋白V-FITC/碘化丙啶试剂盒进行细胞凋亡测定。处理后的细胞进行染色，并通过流式细胞术分析以量化早期和晚期凋亡细胞群[1]
对于siRNA转染，将细胞接种于孔板中，并使用转染试剂转染TFEB特异性或对照siRNA。2天后，用HPβCD再处理3天，然后进行分析[1]
使用台盼蓝染料排斥法和改良的MTT法评估细胞活力和增殖。将细胞接种于96孔板中，用HP-β-CyD处理72小时。使用非线性回归分析确定IC₅₀值[2]
对于细胞凋亡实验，将细胞与HP-β-CyD培养12或24小时，然后用膜联蛋白V-APC和7-AAD染色，并通过流式细胞术分析[2]
对于细胞周期分析，用HP-β-CyD处理12或24小时的细胞被固定、透化、用RNase A处理、碘化丙啶染色，并通过流式细胞术分析以确定DNA含量[2]
对于胆固醇外排实验，将白血病细胞与HP-β-CyD在缓冲液中孵育，通过离心收集上清液，并使用商业酶法试剂盒测量总胆固醇浓度[2]
对于细胞内胆固醇测量，使用甲醇:氯仿从处理细胞中提取脂质，并通过酶法测定总胆固醇和游离胆固醇。酯化胆固醇通过相减计算[2]
对于非律宾菌素染色，用HP-β-CyD处理的细胞用非律宾菌素溶液染色，并通过荧光显微镜观察以评估细胞胆固醇水平[2]
对于Western印迹分析，制备处理细胞的全细胞裂解物，通过SDS-PAGE分离蛋白，转膜，并用特异性一抗和二抗进行探测检测[2]
对于造血集落形成实验，将骨髓单个核细胞或原代白血病细胞接种于含有HP-β-CyD和细胞因子的甲基纤维素培养基中。培养8-13天后计数集落[2]

小鼠白血病模型[2]
本研究采用了两种不同的实验方案。实验方案已获得佐贺大学动物实验伦理委员会的批准（批准号：25-028-0）。首先，将1×10⁶个EGFP⁺ Ba/F3 BCR-ABLWT细胞静脉移植到裸鼠体内。移植后3天，连续20天腹腔注射200 μL载体（生理盐水）或HP-β-CyD（50或150 mM），并每日监测小鼠的存活情况。通过流式细胞术检测受体小鼠骨髓中GFP阳性细胞，确认白血病细胞的植入。[2]
第二种实验方案是人白血病异种移植模型。将1×10⁶个BV173细胞静脉注射到经亚致死剂量（2 Gy）照射的NOD/SCID小鼠体内。移植异种细胞72小时后，每周连续5天，每天腹腔注射200 μL载体或HP-β-CyD（50或150 mM），持续13周，并每日监测小鼠存活情况。采用FITC标记的抗人CD19抗体和PE/Cy7标记的抗小鼠CD45抗体进行双重染色，并通过流式细胞术测定骨髓中人白血病细胞的百分比。所有手术均在戊巴比妥钠麻醉下进行，并尽一切努力减少小鼠的痛苦。根据佐贺大学的机构指南，当小鼠濒死或无法获取食物或水时，使用乙醚实施安乐死。采用对数秩非参数检验分析生存数据，并以Kaplan-Meier生存曲线表示（每组n=10）。[2]

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肺组织学[2]
如上文“小鼠白血病模型”部分所述，对NOD/SCID小鼠进行HP-β-CyD治疗13周。使用年龄匹配的小鼠作为对照。用10%中性缓冲福尔马林灌注肺脏并切除。将组织固定于10%中性缓冲福尔马林中，并包埋于石蜡中。然后将这些组织块切片，并用苏木精-伊红（H&E）染色。

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对于小鼠Ba/F3 BCR-ABLWT白血病模型，将1×10⁶ EGFP⁺ Ba/F3 BCR-ABLWT细胞静脉移植到裸鼠体内。三天后，小鼠连续20天，每天两次腹腔注射200 μL载体（生理盐水）、50 mM HP-β-CyD（695.5 mg/kg）或150 mM HP-β-CyD（2086.5 mg/kg）。每日监测小鼠存活率[2]。对于人白血病异种移植模型，NOD/SCID小鼠接受亚致死剂量照射（2 Gy），然后静脉注射1×10⁶个BV173细胞。三天后，小鼠接受腹腔注射，分别注射200 μL生理盐水、50 mM HP-β-CyD（695.5 mg/kg）或150 mM HP-β-CyD（2086.5 mg/kg），每周连续5天，持续13周。每日监测小鼠存活情况[2]

在所描述的小鼠研究中，全身性给予HP-β-环糊精（最高浓度150 mM，2086.5 mg/kg，腹腔注射）未引起明显的病变、溶血或贫血[2]。对接受HP-β-环糊精治疗13周的NOD/SCID小鼠的肺组织进行组织学检查，结果显示与同龄对照组相比无明显变化[2]。相反，所有注射150 mM甲基-β-环糊精（M-β-CyD）的小鼠均在24小时内死于弥漫性肺泡出血[2]。

[1]. 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin promotes transcription factor EB-mediated activation of autophagy: implications for therapy. J Biol Chem. 2014 Apr 4;289(14):10211-22.

[2]. 2-Hydroxypropyl-β-Cyclodextrin Acts as a Novel Anticancer Agent. PLoS One. 2015 Nov 4;10(11):e0141946.

β-环糊精的衍生物，用作类固醇药物的赋形剂和脂质螯合剂。

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HPβCD 是一种经 FDA 批准的赋形剂，用于提高药物的稳定性和生物利用度[1]
它可以通过在其疏水核心中捕获胆固醇，从而从生物膜中提取胆固醇[1]
该研究提出了一种模型，其中细胞摄取 HPβCD 导致 TFEB 激活，进而上调溶酶体和自噬基因，增强溶酶体贮积症模型中类脂色素等贮积物质的清除[1]
在所研究的条件下，HPβCD 介导的自噬激活与细胞凋亡诱导无关，表明其是一种促生存反应[1]
HP-β-CyD 是一种经 FDA 批准的药用赋形剂，用于改善药物的稳定性和生物利用度。 HP-β-环糊精具有良好的溶解性和生物利用度，目前已用于治疗尼曼-匹克C型疾病[2]。
研究表明，HP-β-环糊精通过破坏癌细胞的胆固醇稳态发挥抗癌作用，导致细胞凋亡和细胞周期阻滞[2]。
HP-β-环糊精对TKI耐药的白血病细胞（包括T315I突变体）和缺氧适应的干细胞样白血病细胞均显示出疗效[2]。
体内发挥疗效所需的HP-β-环糊精浓度（约2 g/kg）与尼曼-匹克C型疾病临床试验中使用的剂量相当[2]。

C63H12O42

1541.54

1540.662

128446-35-5

128446-35-5 ;107745-73-3;

4363642

Typically exists as White to off-white solids at room temperature

1.4±0.1 g/cm3

1521.9±60.0 °C at 760 mmHg

278ºC (dec.)

874.2±32.9 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.545

-6.23

618.66

21

42

28

105

2010

0

CO[C@@H]1[C@H](O[R])[C@@H](O)[C@H](C)[C@@H](CO[R])O1.[C;D2]CC(O)C.[R].[7].[R=H or]

ODLHGICHYURWBS-FOSILIAISA-N

InChI=1S/C63H112O42/c1-22(64)8-85-15-29-50-36(71)43(78)57(92-29)100-51-30(16-86-9-23(2)65)94-59(45(80)38(51)73)102-53-32(18-88-11-25(4)67)96-61(47(82)40(53)75)104-55-34(20-90-13-27(6)69)98-63(49(84)42(55)77)105-56-35(21-91-14-28(7)70)97-62(48(83)41(56)76)103-54-33(19-89-12-26(5)68)95-60(46(81)39(54)74)101-52-31(17-87-10-24(3)66)93-58(99-50)44(79)37(52)72/h22-84H,8-21H2,1-7H3/t22?,23?,24?,25?,26?,27?,28?,29-,30-,31-,32-,33-,34-,35-,36-,37-,38-,39-,40-,41-,42-,43-,44-,45-,46-,47-,48-,49-,50-,51-,52-,53-,54-,55-,56-,57-,58-,59-,60-,61-,62-,63-/m0/s1

(1R,3S,5S,6R,8S,10S,11R,13S,15S,16R,18S,20S,21R,23S,25S,26R,28S,30S,31R,33S,35S,36S,37S,38S,39S,40S,41S,42S,43S,44S,45S,46S,47S,48S,49S)-5,10,15,20,25,30,35-heptakis(2-hydroxypropoxymethyl)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29,32,34-tetradecaoxaoctacyclo[31.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26.228,31]nonatetracontane-36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49-tetradecol

Hydroxypropyl betadex (2-Hydroxypropyl)-β-cyclodextrinHydroxypropyl-β-cyclodextrin; HP-β-CD; (2-Hydroxypropyl)-; A-cyclodextrin; MFCD00069372; HP-??cyclodextrin; ODLHGICHYURWBS-FOSILIAISA-N; HMS3885J22; s4760;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL
H2O : ~50 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (Infinity mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

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配方 5 中的溶解度: 200 mg/mL (Infinity mM) in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。