| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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描述： 3-甲基毒黄素是一种新型的Hsp90抑制剂。3-甲基毒黄素可降低Hsp90依赖性底物蛋白HER2的水平，并导致细胞死亡。
| 靶点 |
Protein disulfide isomerase (PDI) – IC₅₀ = 0.17 ± 0.01 μM in insulin turbidity assay [1]
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
3-甲基毒素黄素的IC50值为170 nM，是一种强效的蛋白二硫键异构酶（PDI）抑制剂。3. 人类胶质母细胞瘤细胞系对甲基毒素的毒性敏感。筛选结果表明，3-甲基毒素是细胞毒性最强的PDI抑制剂。利用新生RNA的溴尿苷标记测序（bru-seq）技术，证实了3-甲基毒素黄素能够诱导Nrf2抗氧化反应、内质网应激反应和自噬。更具体地说，3-甲基毒素黄素抑制PDI靶基因（如TXNIP和EGR1）的表达，同时上调血红素加氧酶1和SLC7A11的转录和蛋白表达。值得注意的是，3-甲基毒素诱导的细胞死亡过程是由自噬和铁死亡的结合驱动的，而非细胞凋亡或坏死[1]。
35G8（1,3,6-三甲基嘧啶并[5,4-e][1,2,4]三嗪-5,7(1H,6H)-二酮）在胰岛素浊度测定中以0.17 ± 0.01 μM的IC₅₀值抑制重组人PDI活性。[1] 在热变性测定中，35G8以剂量依赖的方式使PDI不稳定：在1 μM、10 μM和100 μM浓度下，熔解温度(Tₘ)分别降低-1.43°C、-2.94°C和-3.64°C，表明其与PDI结合于一个独特的位点。 [1] 在细胞热位移分析 (CETSA) 中，35G8 也使 U87MG 细胞中的 PDI 不稳定，对相关的分子伴侣 GRP78 的影响很小，但似乎能稳定 GSTO1。[1] 在使用 U87MG 细胞裂解液进行的药物亲和力响应靶点稳定性 (DARTS) 分析中，35G8 (100 μM) 能保护 PDI 免受蛋白酶降解，与 PACMA31 类似。[1] 35G8 诱导 U87MG 细胞中活性氧 (ROS) 的生成。在 5 μM 浓度下，处理后 4 小时即可观察到显著的 ROS 诱导，24 小时后，5 μM 35G8 达到的最大 ROS 诱导水平与 100 μM 过氧化氢相当。 [1] 35G8在多种人胶质母细胞瘤细胞系中表现出强效的细胞毒性：在U87MG细胞中IC₅₀值为1.1 ± 0.2 μM，在U118MG、A172和NU04细胞中IC₅₀值均低于10 μM。[1] N-乙酰半胱氨酸（NAC）对35G8在U87MG细胞中的细胞毒性没有显著影响。[1] 用caspase抑制剂Z-VAD-FMK（阻断细胞凋亡）或坏死抑制剂-1（阻断坏死性凋亡）预处理并不能保护U87MG细胞免受35G8诱导的细胞死亡。 [1] 在铁螯合剂去铁胺 (DFO) 存在的情况下，U87MG 细胞中 35G8 的 IC₅₀ 值从 2.2 ± 0.7 μM（无 DFO）增加到 5.8 ± 1.0 μM（有 DFO），表明铁死亡参与其中。[1] 35G8（2 μM，处理 24 小时）上调了 U87MG 细胞中血红素加氧酶 1 (HMOX1)、SLC7A11、GRP78 和 DDIT3 (CHOP) 的蛋白表达，并增加了 cleaved LC3B 的表达，而 ATG3、ATG5、ATG7 和 beclin 1 的水平没有变化。 [1] 对用 1 μM 35G8 处理 4 小时的 U87MG 细胞进行新生 RNA 的溴尿苷标记测序 (Bru-seq) 显示，498 个基因表达上调 ≥2 倍，238 个基因表达下调 ≥2 倍。上调基因包括 HMOX1 (19 倍)、SLC7A11 (63 倍)、AKR1C1 (59 倍)、CHAC1 (46 倍)、TRIB3 (23 倍)、TMEM74 (28 倍) 和 IRS2 (12 倍)。下调基因包括 TXNIP (-7.40 倍)、EGR1 (-5.65 倍) 和 ITGA3 (-3.89 倍)。[1] |
| 酶活实验 |
采用基于PDI催化胰岛素还原反应的胰岛素浊度测定法测定PDI活性。将重组人PDI蛋白（0.4 μM）与待测化合物在磷酸钠缓冲液（100 mM磷酸钠，2 mM EDTA，8 μM DTT，pH 7.0）中于37°C预孵育1小时。然后加入磷酸钠缓冲液、DTT（500 μM）和牛胰岛素（130 μM）的混合物。在室温下，PDI催化还原反应，并在620 nm处测定还原的胰岛素B链的聚集情况。 PDI活性(%)的计算公式为：[(ODT80(PDI+DTT+化合物) - ODT0(PDI+DTT+化合物)) - (ODT80(DTT) - ODT0(DTT))] / [(ODT80(PDI+DTT) - ODT0(PDI+DTT)) - (ODT80(DTT) - ODT0(DTT))] × 100。35G8的IC₅₀测定值为0.17 ± 0.01 μM。[1]
热位移测定：将纯化的PDI（0.3 mg/mL，溶于100 mM NaPO₄，pH 7.0）与蛋白质染料（1,8-ANS，0.3 mM）和待测化合物溶液混合。加入硅油以防止蒸发。将反应板置于 ThermoFluor 仪器中，以 1°C/min 的速率从 25°C 加热至 90°C。使用 CCD 相机检测荧光发射。以 2% DMSO（溶于缓冲液）作为对照。计算熔解温度偏移 (ΔTₘ)。35G8 引起负向热偏移：1 μM 时为 -1.43°C，10 μM 时为 -2.94°C，100 μM 时为 -3.64°C。[1] 细胞热偏移分析 (CETSA)：将 U87MG 细胞（每 100 mm 培养皿 2×10⁶ 个）用 0.5、1.0 或 2.0 μM 35G8 或 DMSO 在 37°C 下处理 2 小时。细胞经胰蛋白酶消化、洗涤后，悬浮于DPBS中，分装，在指定温度下加热3分钟，然后速冻两次并离心。取上清液进行Western blot分析，检测PDI、GRP78、GSTO1和肌动蛋白的表达。[1] 药物亲和力响应靶标稳定性 (DARTS)：将U87MG细胞裂解液（5 mg/mL蛋白）与100 μM 35G8、100 μM PACMA31或DMSO在室温下振荡孵育30分钟。加入浓度分别为0、1:1000 (0.005 μg/μL)、1:500 (0.01 μg/μL)或1:250 (0.02 μg/μL)的蛋白酶，孵育30分钟。用蛋白酶抑制剂混合物终止消化反应。采用蛋白质印迹法分析样品中 PDI、GRP78 和 GSTO1 的表达。[1] 氧化还原循环实验：在 384 孔板中，加入 HBSS 缓冲液、过氧化氢酶 (100 U)、H₂O₂ (100 μM)、DTT (500 μM) 和 10 μM 的 35G8（含或不含 DTT 和过氧化氢酶），最终体积为 60 μL。室温孵育 30 分钟后，加入酚红-HRP 检测试剂（终浓度：酚红 100 μg/mL，HRP 60 μg/mL）。1 小时后，加入 10 μL 1 N NaOH，并在 610 nm 波长处测定吸光度。[1] |
| 细胞实验 |
采用 MTT 法评估细胞生长抑制情况。将细胞（U87MG、U118MG、A172、NU04 或 HCT116）以 7000–10000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中。过夜培养后，将细胞置于 37°C、5% CO₂ 的培养箱中，用指定化合物处理 72 小时。然后加入 20 μL MTT 溶液（3 mg/mL），孵育 4 小时，移除上清液，加入 100 μL DMSO，振荡 15 分钟，并在 570 nm 波长处测定吸光度。细胞生长抑制率 (%) = [1 - (At - Ab)/(Ac - Ab)] × 100。对于 35G8 化合物，其在 U87MG 细胞中的 IC₅₀ 值为 1.1 ± 0.2 μM。在联合用药研究中，NAC 与 35G8 同时加入；Z-VAD-FMK 和坏死抑制剂-1 在加入 35G8 前 1 小时加入。[1]
铁死亡拯救实验：将 U87MG 细胞以 5000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中。从 400 μM 开始，以 5 个浓度点进行三倍稀释，加入去铁胺。随后立即加入 35G8，同样以 100 μM 开始进行五倍稀释，加入 35G8。细胞孵育 12 小时后，进行 MTT 实验。35G8 的 IC₅₀ 值从 2.2 ± 0.7 μM（未加入去铁胺）增加到 5.8 ± 1.0 μM（加入去铁胺）。 [1] ROS 检测：将 U87MG 细胞消化、重悬，用 20 μM H₂DCFDA 在 37°C 下处理 30 分钟，洗涤后，以 20,000 个细胞/孔的密度接种于黑色壁 384 孔板中。30 分钟后，用化合物处理细胞。分别在 4、6 和 24 小时于 493/523 nm 处读取荧光值。5 μM 的 35G8 在 4、6 和 24 小时均能显著诱导 ROS 的产生。[1] Western blot：将 U87MG 细胞用 DMSO 或 2 μM 的 35G8 处理 1、3、6、12 或 24 小时。细胞在裂解缓冲液（25 mM Tris、150 mM NaCl、17 mM Triton X-100、3.5 mM SDS，pH 7.4）中裂解，超声处理后离心。采用 BCA 法测定蛋白浓度。取 50 μg 蛋白上样至 10% 或 12% 丙烯酰胺凝胶，电转印至 PVDF 膜，封闭后，与一抗（P4HB、GRP78、GSTO1、HMOX1、CHAC1、CHOP、LC3B、SLC7A11、GAPDH）于 4°C 孵育过夜，再与二抗孵育，最后成像。35G8（2 μM，24 h）上调 HMOX1、SLC7A11、GRP78、DDIT3 和 cleaved LC3B 的表达。 [1] Bru-seq：将 U87MG 细胞用 DMSO 或 1 μM 35G8 处理 4 小时。在最后 30 分钟加入溴尿苷（终浓度 2 mM）以标记新生 RNA。提取总 RNA，提取溴尿苷标记的 RNA 并进行测序。498 个基因上调 ≥2 倍，238 个基因下调 ≥2 倍。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
使用 ADMET 预测器（版本 7.0）定性模型，预测化合物 35G8 具有较高的血脑屏障 (BBB) 渗透性。AlogP 值介于 -1.1 和 1.1 之间。极性表面积小于 90 Ų（预测中枢神经系统渗透的阈值）。分子量为 207 Da。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1,3,6-三甲基嘧啶并[5,4-e][1,2,4]三嗪-5,7-二酮是一种嘧啶并三嗪类化合物。
35G8（1,3,6-三甲基嘧啶并[5,4-e][1,2,4]三嗪-5,7(1H,6H)-二酮）是一种新型纳摩尔级PDI抑制剂，它是在HCT116结肠癌细胞中筛选20,000种不同化合物后发现的。它是筛选出的细胞毒性最强的PDI抑制剂。35G8可诱导胶质母细胞瘤细胞中的Nrf2抗氧化反应、内质网应激反应和自噬。它上调HMOX1和SLC7A11的表达，并抑制PDI靶基因，例如TXNIP和EGR1。 35G8诱导的细胞死亡并非通过凋亡或坏死，而是通过自噬和铁死亡的混合途径。该化合物有望穿过血脑屏障，使其成为胶质母细胞瘤的潜在治疗药物。[1] |
| 分子式 |
C8H9N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
207.193
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| 精确质量 |
207.076
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| CAS号 |
32502-62-8
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| 相关CAS号 |
32502-62-8
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| PubChem CID |
460747
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
-0.7
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| tPSA |
82.67
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
0
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| 重原子数目 |
15
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| 分子复杂度/Complexity |
448
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
CPXHNWKHOFNPDO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C8H9N5O2/c1-4-9-5-6(13(3)11-4)10-8(15)12(2)7(5)14/h1-3H3 S
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| 化学名 |
1,3,6-Trimethyl-pyrimido[5,4-e]-1,2,4-triazine-5,7(1H,6H)-dione
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| 别名 |
3-Methyltoxoflavin 3 Methyltoxoflavin 3Methyltoxoflavin GNF-Pf-2272.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~241.32 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (24.13 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 5 mg/mL (24.13 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.8265 mL | 24.1324 mL | 48.2649 mL | |
| 5 mM | 0.9653 mL | 4.8265 mL | 9.6530 mL | |
| 10 mM | 0.4826 mL | 2.4132 mL | 4.8265 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
PDIA1-IN-1
PROTAC PDIA1 degrader 1
3-N-Propylphenol
PDI-IN-2
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