| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
AKT1 and AKT2 (allosteric inhibitor, ATP non-competitive)
Molecular docking score with AKT1: -2.03 Kcal/mol; with AKT2: -2.25 Kcal/mol [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
3CAI 具有抑制 AKT 的能力。基于筛选数据，我们采用体外激酶活性测定法检测了 3CAI 对 AKT1、MEK1、JNK1、ERK1 和 TOPK 激酶活性的影响。结果表明，1 μM 的 3CAI 对其他受试激酶没有影响；相反，它仅抑制 AKT1 激酶的活性。3CAI 对 AKT1 的抑制作用强于 PI3K，在 1 μM 浓度下抑制率为 60%，而在 10 μM 浓度下抑制率为 10%。3CAI 以剂量依赖的方式显著抑制 AKT1 和 AKT2 的活性。3CAI 可诱导细胞凋亡并抑制 AKT 的下游靶点。 3CAI 可显著且呈时间依赖性地降低 AKT 介导的 GSK3β (Ser9) 和 mTOR (Ser2448) 磷酸化位点。此外，经 3CAI 处理 12 或 24 小时后，促凋亡标志蛋白 p53 和 p21 的水平也升高。将 HCT116 和 HT29 结肠癌细胞接种于 6 厘米培养皿中，培养基为含 1% FBS/McCoy's 5A 的培养基（HCT116），并分别添加 3CAI (4 μM)、I3C 或 AKT 抑制剂，培养 4 天。研究结果表明，与未处理的对照细胞相比，3CAI 处理后 HCT116 和 HT29 结肠癌细胞中的凋亡细胞数量显著增加 [1]。
3CAI (1 µM) 仅抑制了所测试的激酶（MEK1、JNK1、ERK1、TOPK）中的 AKT1 激酶活性 [1] 3CAI 在 10 µM（测试的最高浓度）时抑制了 60% 的 PI3K 活性 [1] 3CAI 呈剂量依赖性地抑制 AKT1 和 AKT2 活性（I3C 未显示任何作用）； AKT 抑制剂 VIII 用作对照 [1] 3CAI 以 ATP 非竞争性方式直接与重组 AKT1 和 AKT2 以及 HCT116 细胞裂解液中的内源性 AKT1/2 结合；I3C 显示无结合 [1] 3CAI 以时间依赖性方式降低 AKT 下游靶点 mTOR (Ser2448) 和 GSK3β (Ser9) 的磷酸化； AKT (Thr308) 的磷酸化水平未发生改变 [1] 3CAI 处理 12 或 24 小时后，上调了 p53 和 p21（促凋亡标志物），同时降低了抗凋亡标志物 Bcl2 和 AKT 介导的 ASK1 (Ser83) 的磷酸化水平 [1] 3CAI 与未处理的对照组相比，显著增加了 HCT116 和 HT29 结肠癌细胞的凋亡（通过 Annexin V/PI 染色和流式细胞术评估）[1] 3CAI 抑制了 HCT116 细胞的非锚定依赖性生长（在 0.3% 琼脂中形成克隆）[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
为了研究3CAI的体内抗癌活性，将HCT116癌细胞注射到无胸腺裸鼠的右侧腹部。在为期21天的实验中，小鼠每周口服5次载体、I3C（100 mg/kg）或3CAI（20或30 mg/kg）。与载体组相比，30 mg/kg 3CAI治疗组小鼠的HCT116肿瘤生长显著减少了50%（p<0.05）。值得注意的是，与载体组相比，接受这些剂量3CAI治疗的小鼠未表现出明显的毒性反应或体重减轻。在肿瘤组织中，3CAI（30 mg/kg）可显著抑制AKT靶蛋白的表达[1]。口服3CAI（30 mg/kg体重，每周5次，持续21天）可显著抑制HCT116结肠肿瘤异种移植瘤的生长，与载体对照组相比，抑制率达50%（p < 0.05）[1]。免疫组化结果显示，3CAI治疗组小鼠肿瘤组织中Ki67的表达显著降低[1]。Western blot分析显示，3CAI（30 mg/kg）治疗组小鼠肿瘤组织中AKT下游靶蛋白p-mTOR（Ser2448）和p-GSK3β（Ser9）的表达受到强烈抑制[1]。
|
| 酶活实验 |
体外激酶活性测定：在含有 20 mM HEPES (pH 7.4)、10 mM MgCl2、10 mM MnCl2 和 1 mM 二硫苏糖醇的反应缓冲液中，以 [γ-32P]ATP 为底物，对各化合物进行反应。室温孵育 30 分钟后，加入蛋白上样缓冲液终止反应，并通过 SDS-PAGE 电泳分离混合物。采用放射自显影法测定放射性掺入的相对量。AKT1 活性测定：使用活性 AKT1 (100 ng) 和组蛋白 H2B (500 ng)。PI3K 活性测定：采用放射自显影法测定 PIP4 向 PIP3 的转化率 [1]
高通量底物竞争性激酶筛选：筛选了 85 种激酶与 3CAI 的活性；研究结果表明，3CAI 是一种潜在的 AKT 抑制剂 [1] 下拉实验：将重组人 AKT (200 ng) 或 HCT116 细胞裂解液 (500 μg) 与 3CAI 偶联的 Sepharose 4B 珠（或仅 Sepharose 4B 作为对照）在反应缓冲液（50 mM Tris pH 7.5、5 mM EDTA、150 mM NaCl、1 mM DTT、0.01% NP40、2 μg/mL 牛血清白蛋白）中孵育。4°C 下轻柔摇晃过夜后，用缓冲液洗涤珠子 5 次，并通过 Western 印迹法检测结合情况 [1] |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验（MTS）：将细胞（每孔 1×10³ 个）接种于 96 孔板中，培养 24 小时后，用不同剂量的各化合物处理。培养 48 小时后，加入 20 µL CellTiter96 Aqueous One Solution，并在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 1 小时。在 492 nm 处测量吸光度 [1]。
非锚定依赖性细胞生长实验：将悬浮于完全培养基中的细胞（每孔 8×10³ 个）加入到含有不同剂量各化合物的 0.6% 琼脂糖底层和 0.3% 琼脂糖顶层中。细胞在37°C、5% CO₂条件下培养3周，然后使用Image-Pro Plus软件在显微镜下计数菌落[1]。 细胞凋亡检测：将结肠癌细胞（HCT116或HT29）接种于60 mm培养皿中（1×10⁵个细胞/皿），并在含10% FBS的培养基中培养1天。之后更换为含1%血清的培养基，并分别加入3CAI、I3C或商业AKT抑制剂培养4天。用胰蛋白酶消化收集细胞，用PBS洗涤，重悬于结合缓冲液中，并用Annexin V和碘化丙啶染色。采用荧光显微镜和流式细胞仪进行分析[1]。 蛋白质印迹分析：用RIPA裂解缓冲液制备细胞裂解液。通过BCA法测定蛋白质含量。蛋白质经SDS-PAGE分离后，转移至PVDF膜，用5%脱脂奶粉封闭，4℃下与一抗孵育过夜，再与HRP标记的二抗（1:5000稀释）孵育，最后用化学发光试剂检测信号[1] |
| 动物实验 |
异种移植小鼠模型：采用无胸腺裸鼠（Cr:NIH(S)，NIH Swiss nude，6-9周龄）。小鼠分为五组：（1）未处理的载体组（n=15）；（2）3CAI 20 mg/kg体重组（n=15）；（3）3CAI 30 mg/kg体重组（n=15）；（4）I3C 100 mg/kg体重组（n=15）；（5）不注射细胞且仅注射3CAI 30 mg/kg体重组（n=15）。将悬浮于无血清McCoy's 5A培养基中的HCT116细胞（3×10⁶个细胞/100 µL）皮下注射到每只小鼠的右侧腹部。3CAI、I3C或载体每周口服5次，持续21天。肿瘤体积计算公式为：肿瘤体积 (mm³) = (长 × 宽 × 高 × 0.52)。监测小鼠直至肿瘤总体积达到 1 cm³，然后处死小鼠并取出肿瘤[1]。
苏木精-伊红染色和免疫组织化学：将小鼠肿瘤组织包埋于石蜡块中，脱蜡，水化，用 0.5% Triton X-100/1× PBS 透化 10 分钟，以 Ki-67 (1:500) 为一抗，HRP 标记的羊抗兔或鼠 IgG 为二抗进行杂交。经 3,3'-二氨基联苯胺显色后，切片用苏木精-伊红染色复染，并在显微镜下观察[1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
与载体对照组相比，接受3CAI（20或30 mg/kg）治疗的小鼠未表现出明显的毒性症状或明显的体重下降[1]
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
3CAI是吲哚-3-甲醇 (I3C) 的合成衍生物，I3C 是一种天然产物，存在于十字花科蔬菜（西兰花、卷心菜）中。I3C 抑制细胞增殖的 IC₅₀ 为 200-300 µM，而 3CAI 的效力更强 [1]
3CAI 是一种特异性的变构 AKT 抑制剂，它与 AKT1 和 AKT2 的 PH 结构域结合，而非 ATP 结合口袋。它与 AKT1 PH 结构域中的 Glu17 形成氢键，并与 AKT2 PH 结构域中的 Lys14、Leu52 和 Arg86 形成三个氢键 [1] 3CAI 可诱导结肠癌细胞凋亡，并在体外和体内抑制结肠癌的生长，使其成为开发 AKT 靶向癌症疗法的潜在先导化合物 [1] |
| 分子式 |
C10H8NOCL
|
|---|---|
| 分子量 |
193.62962
|
| 精确质量 |
193.029
|
| CAS号 |
28755-03-5
|
| PubChem CID |
152961
|
| 外观&性状 |
Off-white to pink solid powder
|
| 密度 |
1.337g/cm3
|
| 沸点 |
379.1ºC at 760 mmHg
|
| 闪点 |
183ºC
|
| 蒸汽压 |
6.02E-06mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.659
|
| LogP |
2.589
|
| tPSA |
32.86
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
1
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
13
|
| 分子复杂度/Complexity |
207
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
LLZQFAXTCYDVTR-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C10H8ClNO/c11-5-10(13)8-6-12-9-4-2-1-3-7(8)9/h1-4,6,12H,5H2
|
| 化学名 |
2-chloro-1-(1H-indol-3-yl)ethanone
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~1291.12 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (10.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (10.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 5.1645 mL | 25.8224 mL | 51.6449 mL | |
| 5 mM | 1.0329 mL | 5.1645 mL | 10.3290 mL | |
| 10 mM | 0.5164 mL | 2.5822 mL | 5.1645 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|
|
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
