| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PFKFB3 (IC50 = 155 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
3PO不抑制纯化的PFK-1的活性；相反，它主要通过与Fru-6-P竞争来抑制PFKFB3同工酶。与正常人支气管上皮细胞相比，3PO选择性地抑制ras转化的人支气管上皮细胞，从而显着减弱几种人恶性造血细胞和腺癌细胞系的增殖（IC50，1.4-24μmol/L）。 3PO 可导致 G2-M 的相停滞[1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
当荷瘤小鼠腹腔注射3PO（0.07 mg/g）时，体内Fru-2,6-BP的细胞内浓度、葡萄糖的摄取和已形成肿瘤的生长均显着降低。它抑制白血病、肺腺癌和乳腺癌细胞在体内生长致瘤的能力[1]。对 C57Bl/6 小鼠静脉注射 3PO 后，研究了以下 PK 特性：清除率 CL=2312 mL/min/kg，T1/2=0.3 hr，Cmax=113 ng/ml，AUC0-inf=36 ng/hr/ml。据报道，3PO 对白血病小鼠模型表现出很强的活性，与高度相关[2]。
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| 酶活实验 |
PFKFB3酶法测定[1]
PFKFB3蛋白活性通过结合丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的酶偶联动力学测定来测量，如前所述。用于3PO抑制的对照反应包含在不添加PFKFB3的情况下增加量的3PO。SigmaPlot 9.0的酶动力学模块用于计算PFKFB3和3PO抑制的动力学变量（Vmax、Km和Ki）。所代表的数据是两个独立实验的三次测量的平均值±SD<小时> 用于哺乳动物表达的FLAG-PFKFB3构建体的产生[1] 将含有完整PFKFB3编码序列和其NH2末端的FLAG表位的FLAG-PFKFB3亚克隆到逆转录病毒Tet应答载体pRevTRE内的BamHI/HindIII限制性位点中。通过脂质体介导将pRevTRE-FLAG-PFKFB3构建体转染到PT67包装细胞系中来产生重组逆转录病毒。为了创建稳定整合并表达诱导型FLAG-PFKFB3的Jurkat细胞系，用含有FLAG-PF肯德基B3的重组逆转录病毒感染细胞，并在400μg/mL潮霉素存在下选择稳定的克隆。 |
| 细胞实验 |
在补充有 10% 胎牛血清和 50 μg/mL 硫酸庆大霉素的 RPMI 1640 中，Jurkat 细胞以 1 × 105/mL 的密度铺板。用载体或 10 μmol/L 3PO 处理细胞 0、4、8、16、24 或 36 小时。分析细胞周期。
体外3PO生长抑制[1] 所有细胞系均以1×105/mL的浓度接种在适当的培养基中。对于悬浮细胞，立即向培养基中加入3PO，而对于贴壁细胞系，第二天开始3PO处理。对于剂量依赖性实验，以递增的浓度添加3PO 36小时。对于时间依赖性试验，在时间0、4、8、16、24或36小时添加10μmol/L 3PO。对于PFKFB3过表达研究，在3PO孵育前24小时通过添加强力霉素（1μg/mL）诱导含有FLAG-PFKFK3表达载体或对照质粒的Jurkat细胞。然后在处理48小时后收集细胞，通过台盼蓝排斥法测定细胞数量和存活率。IC50被计算为50%载体处理细胞生长所需的3PO浓度。所表示的数据是三个独立实验的三次测量的平均值±标准差。 细胞周期分析和流式细胞术[1] Jurkat细胞以1×105/mL的浓度接种在添加了10%胎牛血清和50μg/mL硫酸庆大霉素的RPMI 1640中。细胞立即用载体或10μmol/L3PO处理0、4、8、16、24或36小时。根据制造商的方案，使用Vybrant DyeCycle Orange染色进行细胞周期分析。 果糖-2,6-BP和乳酸的测量[1] Jurkat细胞以1×105/mL的浓度铺板，并立即与10μmol/L3PO一起孵育0、4、8、16、24或36小时。收集培养基样本，根据制造商的说明，使用基于乳酸氧化酶的比色测定法在540 nm处读取乳酸水平，并将其归一化为蛋白质浓度。Fru-2,6-BP测定如前所述进行。 2-脱氧葡萄糖摄取量[1] Jurkat细胞以1×105/mL的浓度接种在添加了10%胎牛血清和50μg/mL硫酸庆大霉素的RPMI 1640中。细胞立即用载体或10μmol/L3PO处理指定时间，随后置于无葡萄糖RPMI 1640中30分钟。再加入14C-2-脱氧葡萄糖（0.25μCi/mL）60分钟，然后用不含葡萄糖的冰冷RPMI 1640洗涤三个细胞。在500μL 0.1%SDS中收集细胞裂解物，并在400μL裂解物上测量闪烁计数（计数/分钟）。计数标准化为蛋白质浓度，数据表示为两个独立实验的重复测量的平均值±标准差。 全细胞ATP、NAD+和NADH的测定[1] Jurkat细胞以1×105/mL的浓度铺板，并立即与10μmol/L的3PO一起孵育指定的时间。根据制造商的方案，使用ATP测定试剂盒测定ATP水平，并在所有时间点使用EnzyChrom NAD+/NDH测定试剂盒在1×106个细胞上测量载体和3PO处理样品的NAD+和NADH水平。 核磁共振代谢物提取[1] 在13C-葡萄糖存在下，用载体或10μmol/L3PO处理Jurkat细胞36小时。对细胞进行计数，将等量的细胞制成丸粒，用冷PBS洗涤两次以去除粘附的培养基，并在液氮中快速冷冻。用10%冰冷的三氯乙酸提取冷颗粒（两次），然后冻干。将干提取物重新溶解在0.35 mL D2O中，并装入5 mm Shigemi管中。 |
| 动物实验 |
荷瘤小鼠（BALB/c裸鼠或C57Bl/6雌性小鼠背景）
0.07 mg/g 腹腔注射 体内研究[1] 收集处于指数生长期的MDA-MB231和HL-60细胞，洗涤后重悬于PBS中，浓度为20 × 10⁷/mL。将细胞与Matrigel按1:1比例混合，取0.1 mL细胞悬液（1 × 10⁷个细胞）皮下注射至20 g的BALB/c雌性裸鼠体内。收集处于指数生长期的Lewis肺癌细胞，洗涤两次后重悬于PBS中（1 × 10⁷/mL）。取0.1 mL细胞悬液皮下注射至20 g的C57Bl/6雌性小鼠体内。研究期间每日监测小鼠体重和肿瘤生长情况。肿瘤质量采用游标卡尺测量，并使用以下公式计算：质量 (mg) = [宽度² (mm) × 长度 (mm)] / 2。已建立肿瘤（130 至 190 mg）的小鼠被随机分为载体对照组和 3PO 处理组。载体对照组腹腔注射 50 μL DMSO，而处理组在指定时间点腹腔注射 0.07 mg/g 的 3PO（溶于 50 μL DMSO）。所有肿瘤实验均重复三次，本文数据来自其中一次实验。 体内 Fru-2,6-BP 测量[1] 将 1 × 10⁶ 个 Lewis 肺癌细胞皮下注射到 20 g 的 C57Bl/6 雌性小鼠体内。当异种移植瘤的质量测量为 150 至 180 mg 时，将小鼠随机分组，并腹腔注射溶剂 DMSO 或 0.07 mg/g 的 3PO。注射 4 小时后，取出肿瘤，并在 1 倍体积的 0.05 mol/L NaOH 中匀浆，随后与 1 倍体积的 0.1 mol/L NaOH 混合。Fru-2,6-BP 的测定方法如前所述。 微型正电子发射断层扫描[1] 携带 Lewis 肺癌异种移植瘤的小鼠腹腔注射 50 μL DMSO 或 0.07 mg/g 的 3PO（溶于 DMSO）。 30分钟后，小鼠腹腔注射18F-2-DG（150 μCi，100 μL溶于H2O），15分钟后用2%异氟烷/氧气混合气体麻醉。然后将小鼠转移至R-4啮齿动物扫描仪微型正电子发射断层扫描仪（CTI Concorde Microsystems；n = 3）进行扫描。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
3PO 是一种吡啶类化合物，其结构为在 3 位被 3-氧代-3-(吡啶-4-基)丙-1-烯-1-基取代的吡啶。它是 PFKFB3 激酶的抑制剂，PFKFB3 激酶是糖酵解的关键酶。3PO 具有抗肿瘤、抑制血管生成、诱导自噬、诱导细胞凋亡以及抑制 EC 2.7.1.105（6-磷酸果糖-2-激酶）等活性。它属于吡啶类化合物和烯酮类化合物。
6-磷酸果糖-1-激酶是糖酵解的限速酶，在肿瘤细胞中由果糖-2,6-二磷酸（Fru-2,6-BP）激活，而Fru-2,6-BP是四种6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶同工酶（PFKFB1-4）的产物。诱导型PFKFB3同工酶在肿瘤细胞中组成型表达，并且是ras转化细胞高糖酵解速率和非锚定依赖性生长所必需的。本文报道了通过计算方法鉴定出的PFKFB3小分子抑制剂3-(3-吡啶基)-1-(4-吡啶基)-2-丙烯-1-酮（3PO），该抑制剂可抑制糖酵解通量并对肿瘤细胞具有细胞抑制作用。 3PO抑制重组PFKFB3的活性，抑制葡萄糖摄取，并降低细胞内Fru-2,6-BP、乳酸、ATP、NAD+和NADH的浓度。3PO显著抑制多种人类恶性造血细胞和腺癌细胞系的增殖（IC50为1.4-24 μmol/L），并且对ras转化的人支气管上皮细胞具有选择性细胞抑制作用，而对正常人支气管上皮细胞则无此作用。PFKFB3酶是3PO的重要分子靶点，因为PFKFB3的异位表达可使转化细胞对3PO产生耐药性，而PFKFB3的杂合基因组缺失则可使转化细胞对3PO产生敏感性。重要的是，腹腔注射3PO（0.07 mg/g）可显著降低荷瘤小鼠体内Fru-2,6-BP的细胞内浓度、葡萄糖摄取以及已建立肿瘤的生长。综上所述，这些数据支持将3PO和其他PFKFB3抑制剂作为化疗药物进行临床开发。[1]在人类癌症中，PTEN的缺失、缺氧诱导因子-1α的稳定以及Ras和AKT的激活共同导致糖酵解关键调节因子6-磷酸果糖-2-激酶（PFKFB3）活性的增加。该酶合成果糖-2,6-二磷酸（F26BP），而F26BP是6-磷酸果糖-1-激酶的激活剂，后者是糖酵解的关键步骤。此前研究发现，PFKFB3 的一种弱竞争性抑制剂 3-(3-吡啶基)-1-(4-吡啶基)-2-丙烯-1-酮 (3PO) 能够降低癌细胞的葡萄糖代谢和增殖。我们合成了 73 种 3PO 衍生物，并筛选了每种化合物对重组 PFKFB3 的活性。最终筛选出一种小分子化合物 1-(4-吡啶基)-3-(2-喹啉基)-2-丙烯-1-酮 (PFK15)，用于进一步开展体外和体内药代动力学、抗代谢和抗肿瘤特性的临床前评估。我们发现，PFK15 能快速诱导转化细胞凋亡，具有良好的药代动力学特性，能抑制同源小鼠路易斯肺癌的葡萄糖摄取和生长，并在三种无胸腺小鼠人源异种移植瘤模型中展现出与美国食品药品监督管理局（FDA）批准的化疗药物相当的抗肿瘤效果。基于这项研究，PFK15 的合成衍生物及其制剂已完成新药临床试验申请（IND）所需的毒理学和安全性研究。一项针对晚期癌症患者的 I 期临床试验将于 2013 年启动，我们预期这类新型抗代谢药物将具有可接受的治疗指数，并能与干扰肿瘤信号通路的药物产生协同作用。[2] |
| 分子式 |
C13H10N2O
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|---|---|
| 分子量 |
210.2313
|
| 精确质量 |
210.079
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| 元素分析 |
C, 74.27; H, 4.79; N, 13.33; O, 7.61
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| CAS号 |
18550-98-6
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| 相关CAS号 |
18550-98-6; 13309-08-5
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| PubChem CID |
5720233
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
387.8±42.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
191.3±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.9 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.637
|
| LogP |
1.51
|
| tPSA |
42.8Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
16
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| 分子复杂度/Complexity |
257
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(/C(/[H])=C(\[H])/C1=C([H])N=C([H])C([H])=C1[H])C1C([H])=C([H])N=C([H])C=1[H]
|
| InChi Key |
UOWGYMNWMDNSTL-ONEGZZNKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H10N2O/c16-13(12-5-8-14-9-6-12)4-3-11-2-1-7-15-10-11/h1-10H/b4-3+
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| 化学名 |
(E)-3-pyridin-3-yl-1-pyridin-4-ylprop-2-en-1-one
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| 别名 |
3PO; 3-PO; 18550-98-6; 13309-08-5; (E)-3PO; 3-(3-pyridinyl)-1-(4-pyridinyl)-2-propen-1-one; (E)-3-pyridin-3-yl-1-pyridin-4-ylprop-2-en-1-one; 2-Propen-1-one, 3-(3-pyridinyl)-1-(4-pyridinyl)-; CHEMBL3105848;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 4~60 mg/mL (199.8~285.4 mM)
Ethanol: ~11 mg/mL (52.3 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (14.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 30.0 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (14.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (14.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+40% PEG 300+2% Tween 80+ddH2O: 2mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.7567 mL | 23.7835 mL | 47.5670 mL | |
| 5 mM | 0.9513 mL | 4.7567 mL | 9.5134 mL | |
| 10 mM | 0.4757 mL | 2.3783 mL | 4.7567 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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