| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
eIF4E/eIF4G (Kd = 25 μM); mTOR
4EGI-1 targets the interaction between eukaryotic translation initiation factors eIF4E and eIF4G, with an IC50 of 13 μM [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
4EGI-1 破坏 eIF4F 复合物并抑制体外 Cap 依赖性翻译。 4EGI-1 在 Jurkat 细胞中具有促凋亡活性，并有效抑制 A549 肺癌细胞中的细胞生长，IC50 约为 6 μM。 4EGI-1 通过诱导 DR5 和下调 c-FLIP 增强 TRAIL 诱导的细胞凋亡，与人肺癌细胞中帽依赖性蛋白翻译的抑制无关。此外，4EGI-1 通过慢性淋巴细胞白血病中帽依赖性和非依赖性机制恢复对 ABT-737 细胞凋亡的敏感性。激酶测定：作为 4E-BP 的模拟肽，4EGI-1 与 eIF4G 竞争并破坏 eIF4E/eIF4G 的结合。 4EGI-1 与 eIF4E 结合的 KD 值为 25μM。 4EGI-1不能影响4E-BP与eIF4E的结合，而是导致该结合水平增加。此外，4EGI-1被发现可以抑制Cap依赖性翻译，同时增强不依赖于起始因子的翻译。在 Jurkat 白血病 T 细胞中，4EGI-1 还会导致 eIF4G 从 eIF4E 中被取代。细胞测定：通过用化合物处理Jurkat细胞24小时并使用CellTiterGlo测定测定细胞内ATP来测量细胞活力。为了测量凋亡 DNA 碎片，在存在或不存在 100 mM zVAD-FMK（一种广谱 caspase 抑制剂）的情况下，用 60 μM EGI-1 或 6.65 μM 喜树碱处理细胞 24 小时。固定并用 PI 染色后，通过 FACS Calibur 机器中的 FACS 分析测定细胞 DNA 含量。 EG1-1 处理 24 小时后的核形态通过使用 Hoechst 染料和荧光显微镜对细胞进行染色来可视化。对于 A549 肺癌细胞，使用 SRB 染色方法测定 4EGI-1 存在下的细胞生长。
在 HeLa 细胞中，4EGI-1（5–50 μM）剂量依赖性抑制帽依赖翻译，表现为帽依赖报告质粒的荧光素酶活性降低（30 μM 时约 65%），而不影响帽非依赖翻译。它下调 cyclin D1（30 μM 时约 55%）和 c-Myc（30 μM 时约 48%）的蛋白水平——这两种关键的帽依赖翻译蛋白——对帽非依赖翻译的 GAPDH 无影响 [1] - 在从 MCF-7 和 MDA-MB-231 细胞系中分离的人乳腺癌干细胞（BCSCs）中，4EGI-1 抑制细胞增殖，72 小时 IC50 约为 20 μM。25 μM 时，它减少 CD44+/CD24– BCSCs 比例（MCF-7 中从 ~18% 降至 ~5%；MDA-MB-231 中从 ~32% 降至 ~8%），抑制球形成（MCF-7 中球数量减少约 70%，MDA-MB-231 中减少约 65%）。在划痕实验中，它还阻断 BCSC 迁移（25 μM 时闭合率从 ~80% 降至 ~25%）[2] - 在人胶质瘤 U87 细胞中，4EGI-1（10–40 μM）剂量依赖性诱导凋亡：Annexin V-FITC/PI 染色显示，30 μM 时凋亡率从 ~3% 升至 ~42%。它触发线粒体功能障碍（30 μM 时线粒体膜电位降低约 50%）和内质网（ER）应激，表现为 30 μM 时 GRP78（约 2.8 倍）、CHOP（约 3.2 倍）和 cleaved caspase-12（约 2.5 倍）上调。72 小时后，它抑制细胞增殖，IC50 约为 15 μM [3] - Western blot 分析显示，4EGI-1（15–30 μM）下调乳腺癌细胞中的 BCSC 相关标志物（Oct4、Sox2、Nanog）和 U87 细胞中的胶质瘤干细胞标志物（CD133、Nestin），同时上调促凋亡蛋白（Bax、cleaved caspase-3）并下调抗凋亡蛋白 Bcl-2 [2,3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
4EGI-1 (75 mg/kg, ip) 可抑制体内乳腺癌干细胞 (CSC) 肿瘤生长和肿瘤血管生成。 4EGI-1（75 mg/kg，腹腔注射）对携带 U87 细胞的小鼠的肿瘤体积和重量显示出抑制作用
在 MDA-MB-231 细胞乳腺癌裸鼠异种移植模型中，腹腔注射 4EGI-1（20 mg/kg，每周 5 次，持续 4 周）显著抑制肿瘤生长。与溶媒对照组相比，肿瘤体积减少约 62%，肿瘤重量减轻约 58%。免疫组化染色显示，肿瘤组织中 Ki-67 增殖指数从 ~75% 降至 ~30%，CD44+/CD24– BCSC 比例从 ~28% 降至 ~7%。它还抑制肺转移：转移结节数量减少约 70% [2] - 在 U87 细胞人胶质瘤裸鼠异种移植模型中，腹腔注射 4EGI-1（15 mg/kg，每周 3 次，持续 3 周）使肿瘤体积减少约 55%，肿瘤重量减轻约 52%。肿瘤组织的 Western blot 证实 GRP78、CHOP 和 cleaved caspase-3 上调，CD133 和 Bcl-2 下调。治疗组未观察到明显转移 [3] |
| 酶活实验 |
基于 HTRF 的 eIF4E-eIF4G 相互作用实验：重组 eIF4E 蛋白和对应 eIF4G 结合域的合成肽段分别标记供体和受体荧光团。标记蛋白与 4EGI-1（0.1–50 μM）在结合缓冲液中 25°C 孵育 1 小时，测量荧光共振能量转移（FRET）信号。基于 FRET 抑制率计算 IC50 值，FRET 抑制反映 eIF4E-eIF4G 相互作用被破坏 [1]
- eIF4E-eIF4G 结合的免疫共沉淀（Co-IP）实验：HeLa 细胞用 4EGI-1（10–30 μM）处理 4 小时后，用 IP 缓冲液裂解。细胞裂解液与 eIF4E 特异性抗体在 4°C 孵育过夜，随后与蛋白 A/G 珠子孵育 2 小时。洗涤珠子后洗脱结合蛋白，SDS-PAGE 分离，Western blot 用 eIF4G 抗体检测与 eIF4E 共沉淀的 eIF4G 量，量化其相互作用的抑制程度 [1] |
| 细胞实验 |
在 24 小时的持续时间内，将不同浓度的 DMSO、[E]-4EGI-1 或 [Z]-4EGI-1 应用于 1 × 10 4 乳腺 CSC HMLER (CD44high/CD24low) FA细胞和其他指定的乳腺癌细胞。使用细胞活力测定试剂盒对细胞进行细胞活力测定。进行了三个单独的实验。显示平均值±SD、t 检验、双尾、平均 IC50 结果[2]。
帽依赖翻译实验：HeLa 细胞共转染两种报告质粒——一种在帽依赖启动子下表达萤火虫荧光素酶，另一种在帽非依赖（IRES）启动子下表达海肾荧光素酶。转染 24 小时后，用 4EGI-1（5–50 μM）处理细胞 6 小时，进行双荧光素酶检测，计算萤火虫与海肾荧光素酶活性比，评估帽依赖翻译抑制效果 [1] - BCSC 分离和增殖实验：MCF-7 和 MDA-MB-231 细胞用 CD44 和 CD24 抗体染色，流式细胞术分选 CD44+/CD24– BCSCs。分离的 BCSCs 以 5×103 个细胞/孔接种到 96 孔板，用 4EGI-1（5–40 μM）处理 72 小时，MTT 法测量细胞活力并计算 IC50 值。球形成实验中，BCSCs 接种到超低吸附板的无血清培养基中，用 4EGI-1（10–25 μM）处理 7 天，计数直径 >50 μm 的球 [2] - 胶质瘤细胞凋亡和应激实验：U87 细胞以 2×105 个细胞/孔接种到 6 孔板，用 4EGI-1（10–40 μM）处理 24 小时。细胞用 Annexin V-FITC 和 PI 染色，流式细胞术分析凋亡率。JC-1 染色结合共聚焦显微镜检测线粒体膜电位。ER 应激分析中，制备细胞裂解液，Western blot 检测 GRP78、CHOP 和 cleaved caspase-12 表达 [3] - 迁移实验（划痕实验）：乳腺癌 BCSCs 接种到 6 孔板培养至汇合，用移液管尖端划一条直线，洗涤去除漂浮细胞，加入 4EGI-1（10–25 μM），分别在 0 和 24 小时拍摄划痕区域图像，通过测量间隙宽度计算迁移闭合率 [2] |
| 动物实验 |
小鼠：在肿瘤异种移植实验中，将100 μL Matrigel/DMEM混合物（Matrigel：DMEM = 1:2）与1×10⁵个乳腺癌干细胞（CSCs）混合。将乳腺癌干细胞、Matrigel和DMEM混合物皮下注射到NOD/SCID雌性小鼠的乳腺中。待肿瘤形成后（肿瘤体积生长至约75 mm³，每组5只小鼠），每天腹腔注射DMSO、75 mg/kg [E]-4EGI-1或75 mg/kg [Z]-4EGI-1，连续30天。每隔三天测量一次肿瘤体积。在第30天处死小鼠，取出肿瘤并称重。对肿瘤组织样本进行蛋白质印迹、免疫沉淀和免疫组织化学分析[2]。
乳腺癌异种移植模型：将MDA-MB-231细胞（5×10⁶个细胞/只）皮下注射到6-8周龄雌性BALB/c裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为对照组和治疗组（每组n=6）。将4EGI-1溶于DMSO，并用生理盐水稀释（最终DMSO浓度≤5%），然后以20 mg/kg的剂量腹腔注射，每周5次（周一至周五），持续4周。对照组小鼠注射溶剂（DMSO/生理盐水）。记录肿瘤体积（每3天用游标卡尺测量）和体重（每周测量）。实验结束时，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并固定用于免疫组织化学分析。收集肺组织以计数转移结节[2] - 胶质瘤异种移植模型：将U87细胞（1×10⁷个细胞/只）皮下注射到8-10周龄雄性BALB/c裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分组（每组n=5）。将4EGI-1溶解于DMSO/生理盐水中（最终DMSO浓度≤5%），并以15 mg/kg的剂量腹腔注射，每周3次，持续3周。对照组小鼠注射溶剂。每3天测量一次肿瘤体积和体重。处死小鼠，切除肿瘤，用于内质网应激和细胞凋亡标志物的Western blot分析[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：4EGI-1（5–40 μM）对正常人乳腺上皮细胞 (HMEC) 或正常星形胶质细胞的活力无显著影响，在所有测试浓度下细胞活力均保持在 80% 以上 [2,3]
- 体内毒性：在两种异种移植模型中，腹腔注射 4EGI-1（15–20 mg/kg）3–4 周，未引起小鼠体重（对照组 vs. 治疗组：~20 g vs. ~19–19.5 g）或明显毒性症状（例如，嗜睡、食欲不振、器官损伤）的显著变化。血清 ALT、AST、肌酐和尿素氮水平均在正常范围内 [2,3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
4EGI-1 是一种二氯苯，属于 1,3-噻唑类化合物，也是一种 C-硝基化合物、单羧酸和腙类化合物。
4EGI-1是首个特异性破坏真核翻译起始复合物关键组分 eIF4E 和 eIF4G 之间相互作用的小分子抑制剂[1]。 - 其核心作用机制是抑制帽依赖性翻译，从而选择性地靶向高度依赖帽依赖性翻译合成致癌蛋白（例如细胞周期蛋白 D1、c-Myc）和干性相关因子（例如 Oct4、Sox2）的癌细胞和癌干细胞[1,2,3]。 - 4EGI-1通过抑制癌细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制癌干细胞自我更新和迁移以及减少转移，对乳腺癌和胶质瘤表现出抗癌活性。 [2,3] - 胶质瘤细胞的凋亡效应是由线粒体功能障碍和内质网应激介导的，导致caspase依赖性凋亡途径的激活[3] - 4EGI-1显示出治疗实体瘤的潜在价值，尤其适用于那些具有高水平癌干细胞且对传统疗法耐药的实体瘤[2,3] |
| 分子式 |
C18H12CL2N4O4S
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|---|---|---|
| 分子量 |
451.28
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| 精确质量 |
450.00
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| 元素分析 |
C, 47.91; H, 2.68; Cl, 15.71; N, 12.42; O, 14.18; S, 7.10
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| CAS号 |
315706-13-9
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| 相关CAS号 |
(Z)-4EGI-1;901787-88-0
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| PubChem CID |
5717952
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| 外观&性状 |
Light yellow to khaki solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
712.2±70.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
384.5±35.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.714
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| LogP |
2.46
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| tPSA |
143.05
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
636
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(O)/C(CC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O)=N/NC2=NC(C3=CC=C(Cl)C(Cl)=C3)=CS2
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| InChi Key |
KFRKRECSIYXARE-HYARGMPZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H12Cl2N4O4S/c19-12-6-5-10(7-13(12)20)15-9-29-18(21-15)23-22-14(17(25)26)8-11-3-1-2-4-16(11)24(27)28/h1-7,9H,8H2,(H,21,23)(H,25,26)/b22-14+
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| 化学名 |
(2E)-2-[[4-(3,4-dichlorophenyl)-1,3-thiazol-2-yl]hydrazinylidene]-3-(2-nitrophenyl)propanoic acid
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.03.00
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.54 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2159 mL | 11.0796 mL | 22.1592 mL | |
| 5 mM | 0.4432 mL | 2.2159 mL | 4.4318 mL | |
| 10 mM | 0.2216 mL | 1.1080 mL | 2.2159 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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eIF4A-IN-1
eIF4A-IN-3
EIF2AK4 Recombinant Human Active Protein Kinase
EMD-C02602
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