| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
5-Demethylnobiletin inhibits 5-lipoxygenase (5-LOX) in rat peritoneal neutrophils (IC50 = 0.35 μM for LTB4 production from endogenous arachidonic acid). [1]
In PC12 cells, 5-Demethylnobiletin activates the MAPK/ERK, PKA, and PKC signaling pathways, leading to the phosphorylation of cAMP response element-binding protein (CREB) at Ser-133. This activation is independent of the TrkA receptor. [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
5-O-去甲基诺比列汀（5-去甲基诺比列汀）可刺激依赖于 PKC、PKA 和 MAPK/ERK 的信号通路，从而促进神经突生成[2]。在大鼠腹腔中性粒细胞中，5-去甲基诺比列汀以 0.35 μM 的 IC50 值抑制白三烯 B4 (LTB4) 的生成。在裂解细胞制备物中，0.25 μM 的浓度可抑制 LTB4 合成达 57%[1]。在 10 μM 的浓度下，5-去甲基诺比列汀可抑制人中性粒细胞中弹性蛋白酶的释放达 48%，但并不影响弹性蛋白酶本身的活性。 [1]在LPS刺激的RAW 264.7巨噬细胞中，5-去甲基诺比列汀对环氧合酶-2 (COX-2) 的表达几乎没有影响，在10、5和2.5 μM浓度下抑制率仅为≤20%。[1]在PC12细胞中，5-去甲基诺比列汀（10-20 μM）能有效诱导神经突生长，48小时后，10 μM浓度下神经突阳性细胞的比例达到49.1±2.2%，20 μM浓度下达到53.5±2.5%。同时，神经元分化和突触形成标志蛋白，如生长相关蛋白43 (GAP-43) 和突触素的表达也增加。 [2] 5-去甲基诺比列汀诱导PC12细胞神经突生长不受TrkA拮抗剂K252a (100 nM)的影响，表明其作用机制不依赖于TrkA。[2] 5-去甲基诺比列汀 (10 μM) 显著诱导PC12细胞中CREB的磷酸化，120分钟后磷酸化水平升高1.7倍。它还能使cAMP反应元件 (CRE) 介导的转录增加约10倍。[2] CREB拮抗剂KG-501 (10 μM) 或CREB siRNA转染显著减弱了5-去甲基诺比列汀对神经突生长的促进作用。 [2] 5-去甲基诺比列汀 (10 μM) 可激活 PC12 细胞中的 ERK1/2 磷酸化，磷酸化水平在 15 分钟时显著升高，在 60 分钟时达到峰值，并持续升高至 120 分钟。它还能增加 PKC 和 PKA 的活性，在 30 分钟时达到峰值，并持续升高至 120 分钟。[2] MEK1/2 抑制剂（U0126、PD98059）、PKC 抑制剂（BIM）和 PKA 抑制剂（H-89、Rp-cAMPS）均可阻断 5-去甲基诺比列汀诱导的 PC12 细胞中的 CRE 转录活性和神经突生长。CaMK II 抑制剂（KN-62）和 PI3-K 抑制剂（LY294002）对神经突生长没有影响。[2]
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| 体内研究 (In Vivo) |
在角叉菜胶诱导的小鼠足爪水肿模型中，口服100 mg/kg的5-去甲基诺比列汀，在激发后3小时显著降低了47%的水肿。该作用呈剂量依赖性（25 mg/kg时降低4%，50 mg/kg时降低20%）。[1] 在磷脂酶A2 (PLA2) 诱导的小鼠足爪水肿模型中，口服100 mg/kg的5-去甲基诺比列汀，在激发后1小时显著降低了65%的水肿。该作用呈剂量依赖性（25 mg/kg时降低30%，50 mg/kg时降低40%），半数抑制剂量 (ID50) 为69 mg/kg。 [1]
在重复应用TPA诱导的小鼠耳部炎症模型中，局部应用0.25 mg/耳的5-去甲基诺比列汀可显著降低亚慢性炎症达41%（以耳重增加衡量）。此外，它还能抑制中性粒细胞浸润达78%（以组织中髓过氧化物酶(MPO)活性间接衡量）。[1] 对TPA处理的小鼠耳部进行组织学分析表明，5-去甲基诺比列汀治疗可减轻水肿，减少炎症细胞浸润，并减轻上皮增厚、乳头状瘤样增生、棘层增厚、角化过度和海绵水肿。[1] |
| 酶活实验 |
为了评估 5-脂氧合酶 (5-LOX) 的活性，将大鼠腹腔中性粒细胞超声破碎，并进行连续离心。将上清液（含有酶）与 5-去甲基诺比列汀 (5-Demethylnobiletin) 孵育 5 分钟。然后加入花生四烯酸至终浓度为 20 μM 以启动反应。5 分钟后，使用特异性酶免疫测定试剂盒定量 5-LOX 产物，特别是 LTB4。[1]
对于弹性蛋白酶活性测定，用细胞松弛素和 fMLP 刺激人中性粒细胞。然后将上清液与 BOC 底物混合，并在 37°C 下孵育 30 分钟。在 414 nm 处测量吸光度以确定弹性蛋白酶活性，并评估 5-去甲基诺比列汀对该活性的影响。[1] |
| 细胞实验 |
采用 MTT 法测定细胞毒性。将中性粒细胞或 RAW 264.7 巨噬细胞暴露于 5-去甲基诺比列汀（浓度最高达 10 μM）30 分钟。然后加入 MTT 溶液并孵育至形成蓝色沉淀。将有色代谢物溶解于 DMSO 中，并在 490 nm 处测量吸光度以评估细胞活力。[1] 在完整细胞中 LTB4 生成测定中，将大鼠腹腔中性粒细胞与 5-去甲基诺比列汀（0.01 至 10 μM）预孵育。刺激 LTB4 生成，并使用特异性酶联免疫测定试剂盒分析 LTB4 的含量。 [1]
对于 COX-2 的蛋白质印迹分析，RAW 264.7 巨噬细胞先用 5-去甲基诺比列汀（2.5、5、10 μM）或溶剂预处理 1 小时，然后用 LPS 孵育 18 小时。将膜与抗 COX-2 多克隆抗血清和抗 β-肌动蛋白抗体孵育。随后，印迹膜与辣根过氧化物酶标记的二抗孵育，并使用增强化学发光系统显色。[1] 对于弹性蛋白酶释放实验，人中性粒细胞先用 5-去甲基诺比列汀（10 μM）预孵育 5 分钟。加入细胞松弛素刺激弹性蛋白酶释放，然后加入 fMLP。离心后，将上清液与BOC底物混合，并在414 nm处测量吸光度以定量弹性蛋白酶的释放。[1] 对于PC12细胞神经突生长，将细胞接种于聚赖氨酸包被的培养板上，24小时后，将培养基更换为低血清培养基。加入5-去甲基诺比列汀（2-20 μM）培养48小时。至少有一条长度等于细胞体直径的神经突的细胞被计数为神经突阳性。[2] 对于GAP-43的RT-qPCR分析，用5-去甲基诺比列汀（10 μM）处理PC12细胞48小时。提取总RNA，进行逆转录，并使用GAP-43和β-肌动蛋白的特异性引物进行定量实时PCR。 [2] 为了进行 GAP-43、突触素、CREB 和 ERK1/2 的蛋白质印迹分析，将 PC12 细胞用 5-去甲基诺比列汀 (10 μM) 处理不同时间点。细胞裂解液经 SDS-PAGE 电泳分离后，转移至 PVDF 膜，并用特异性一抗和 HRP 标记的二抗进行孵育。使用化学发光试剂检测信号。[2] 为了进行 GAP-43 的免疫荧光染色，将 PC12 细胞用 5-去甲基诺比列汀处理 48 小时，用甲醛固定，进行透化处理，并与抗 GAP-43 抗体孵育。随后与 Alexa Fluor 488 标记的二抗和 DAPI 进行核染色。 [2] 对于 CRE 介导的转录活性检测，将 PC12 细胞与 pCRE-Luc 报告质粒和 Renilla 荧光素酶载体共转染。24 小时后，用 5-去甲基诺比列汀 (10 μM) 处理细胞 8 小时。测定荧光素酶活性并以 Renilla 荧光素酶活性进行标准化。[2] 对于 siRNA 转染，将 PC12 细胞用 CREB 特异性 siRNA 或阴性对照转染 24 小时，然后用 5-去甲基诺比列汀处理。[2] 对于 PKC 和 PKA 活性检测，用 5-去甲基诺比列汀 (10 μM) 处理 PC12 细胞。将细胞裂解液加入 PKC 或 PKA 底物微孔板中，并通过加入 ATP 启动反应。孵育后，加入磷酸化特异性底物抗体和HRP标记的二抗。然后加入TMB底物溶液，并在450 nm处读取吸光度值。[2] |
| 动物实验 |
角叉菜胶诱导小鼠后爪水肿：将角叉菜胶（3% w/v 生理盐水，25 μL）皮下注射到雌性瑞士小鼠的右后爪，诱导水肿。将 5-去甲基川陈皮素（25、50 和 100 mg/kg）悬浮于生理盐水缓冲液（0.9% NaCl，0.1% NaHCO3，pH 7.4）中，并在注射角叉菜胶前 1 小时口服给药。分别在注射后 1、3 和 5 小时，采用体积描记法测量爪体积。[1]
PLA2 诱导小鼠后爪水肿：将来自莫桑比克眼镜蛇的 PLA2（1.18 单位，溶于 25 μL 生理盐水）皮下注射到小鼠的右后爪。在PLA2注射前1小时，口服给予小鼠5-去甲基诺比列汀（25、50和100 mg/kg）。分别在激发后30、60和90分钟测量爪体积。[1] TPA多次应用诱导小鼠耳部炎症：隔日（第1、3、5、8和10天）重复局部应用TPA（2 μg溶于20 μL丙酮）诱导小鼠耳部亚慢性炎症。在4天（第8-11天）中，每天两次局部应用5-去甲基诺比列汀（0.25 mg/耳溶于20 μL丙酮），早上与TPA同时应用，6小时后不应用TPA。最后一天（第11天），仅在早上应用。最后一次应用后6小时处死小鼠。通过称重评估耳廓肿胀程度，并测量髓过氧化物酶（MPO）活性作为中性粒细胞浸润的指标。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
经 MTT 法测定，在所测试的剂量（10 μM 及以下）下，5-去甲基诺比列汀对大鼠和人中性粒细胞以及小鼠 RAW 264.7 巨噬细胞均无毒性。[1]
在 PC12 细胞中，经 MTT 法测定，在低血清培养基中，浓度高达 20 μM 的 5-去甲基诺比列汀孵育 48 小时后，未观察到明显的细胞毒性。[2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
去甲基诺比列汀是一种属于黄酮类化合物的醚类化合物。据报道，它存在于柑橘（Citrus reticulata）、百里香叶山楂（Clinopodium thymifolium）以及其他具有相关数据的生物体中。另见：橙皮（部分）；酸橙（Citrus aurantium）皮（部分）。
5-去甲基诺比列汀（5-羟基-6,7,8,3',4'-五甲氧基黄酮）是柑橘属植物中常见的黄酮类化合物，也曾从铁线莲（Sideritis mugronensis）中分离得到。[1] 5-去甲基诺比列汀的抗炎活性被认为与直接抑制5-脂氧合酶（5-LOX）有关，而不影响环氧合酶-2（COX-2）的表达。其减少白细胞浸润的作用归因于其直接抑制LTB4生成的能力，而非通过抗氧化机制。[1] 5-去甲基诺比列汀在PC12细胞中的神经营养作用是通过MAPK/ERK、PKC和PKA依赖性但TrkA非依赖性的CREB信号通路介导的。PMFs 5位上的甲氧基被羟基取代可能增强其神经营养活性。[2] |
| 分子式 |
C20H20O8
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|---|---|
| 分子量 |
388.37
|
| 精确质量 |
388.115
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| CAS号 |
2174-59-6
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| PubChem CID |
358832
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| 外观&性状 |
Light yellow to green yellow solid powder
|
| 密度 |
1.304±0.06 g/cm3
|
| 沸点 |
601.4±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
145-146 ºC
|
| 闪点 |
213.9±25.0 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.583
|
| LogP |
2.1
|
| tPSA |
96.59
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
579
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| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
DOFJNFPSMUCECH-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H20O8/c1-23-12-7-6-10(8-14(12)24-2)13-9-11(21)15-16(22)18(25-3)20(27-5)19(26-4)17(15)28-13/h6-9,22H,1-5H3
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| 化学名 |
2-(3,4-Dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-6,7,8-trimethoxychromen-4-one
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| 别名 |
5 Demethylnobiletin 5-Demethylnobiletin
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~64.37 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5749 mL | 12.8743 mL | 25.7486 mL | |
| 5 mM | 0.5150 mL | 2.5749 mL | 5.1497 mL | |
| 10 mM | 0.2575 mL | 1.2874 mL | 2.5749 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
LOX-IN-5
Leukotriene A 3 methyl ester
Sigmoidin B
15(S)-HEDE
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