5-Fluoroorotic acid

别名: 5-氟乳清酸;5-Fluoroorotic Acid Monohydrate 5-氟乳清酸一水合物;5-氟乳清酸 标准品;5-氟乳清酸水合物;5-氟乳清酸一水合物
目录号: V9652 纯度: ≥98%
5-Fluoroorotic 是酵母分子遗传学中的选择剂。
5-Fluoroorotic acid CAS号: 703-95-7
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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产品描述
5-氟胞嘧啶是一种酵母分子遗传学中的选择性试剂。5-氟胞嘧啶具有与5-氟胞嘧啶相近的抗癌作用,以及中等的抗皮肤真菌作用。
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
在最小培养基中,浓度为 1 mg/ml 的 5-氟乳清酸(表 I)可完全抑制所有测试的 Ura+ 酵母菌株的生长,而 Ura- 细胞则能生长并形成抗性菌落。[1]

当浓度降低至 500 μg/ml 时,Ura+ 细胞的背景生长显著增加。[1]

在含有 1 mg/ml 5-氟乳清酸的 YPD 富营养培养基中,生长抑制效果存在差异:一些 Ura+ 菌株的生长受到抑制,而另一些则不受影响。[1]
细胞实验
酵母细胞在YPD液体培养基或YPD平板上预培养,然后在5-氟乳清酸(5-FOA)培养基上进行筛选。最多可将10⁷个细胞接种到含有5-FOA培养基的50 mm培养皿中。在30°C下,4-7天内即可出现抗性菌落。[1]

对于等位基因置换(移位),将含有整合了URA3和目的基因的质粒的Ura+转化子接种到含有5-氟乳清酸(5-FOA)的培养基上。通过同源重组丢失URA3基因的细胞获得5-FOA抗性(Ura-),而亲代Ura+细胞则不生长。 [1]

在质粒重组实验中,将携带必需基因(cdc27Δ1)染色体缺失且在URA3质粒上具有野生型拷贝的菌株,用携带相同基因的诱变LEU2质粒进行转化。将Leu+转化子在容许温度下培养,然后进行复制平板接种到5-氟乳清酸(5-FOA)培养基上。分析从背景中生长出来的Ura-乳突。如果LEU2质粒携带温度敏感等位基因,则乳突仅在容许温度(22°C)下出现,而在限制温度(36°C)下不出现。如果LEU2质粒携带无效突变,则在任何温度下都不会出现5-FOA抗性乳突。 [1]

为了引入ura3缺失,将转化了整合质粒pJEF1332(含有ura3Δ1突变和TRP1标记)的酵母细胞在SC-Trp培养基上进行筛选。然后将转化子划线接种到5-氟乳清酸(5-FOA)培养基(含有色氨酸和其他营养物质)上,以分离出丢失了野生型URA3基因、质粒序列和TRP1的5-FOA抗性分离株。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在最小培养基中,浓度为 1 mg/ml 的 5-氟乳清酸对所有测试的 Ura+ 酵母菌株均有毒性,可抑制其生长。[1]

在含有 1 mg/ml 5-氟乳清酸的 YPD 富营养培养基中,其毒性表现不一:它能抑制某些 Ura+ 菌株的生长,但对其他菌株则无影响。[1]

该化合物对 Ura- 细胞(例如 ura3 突变体)无毒性,允许其选择性生长。[1]
参考文献

[1]. 5-Fluoroorotic acid as a selective agent in yeast molecular genetics. Methods Enzymol. 1987; 154: 164-75.

[2]. Studies on the antimycotic activity of 5-fluoroorotic acid. Methods Find Exp Clin Pharmacol. 1987 Feb; 9(2): 85-9.

其他信息
5-氟乳清酸 (5-FOA) 是一种选择性试剂,能够从大量野生型 Ura+ 细胞中检测出罕见的 ura3- 细胞。其应用得益于 URA3 克隆载体的可用性、URA3 基因的体积小且序列已知,以及筛选方法的简便性和高效性。[1] 5-FOA 的筛选原理是将无毒化合物转化为对野生型 Ura+ 细胞有毒的化合物;缺乏形成这种有毒化合物能力的突变细胞在惰性前体存在的情况下仍能生长。[1] 5-FOA 筛选可用于等位基因置换(等位基因替换)以用体外生成的突变等位基因替换染色体上的野生型基因,也可用于质粒重组以分离必需克隆基因中的条件致死突变。 [1]

该方法也用于测量酵母重复序列的有丝分裂重组频率:将目标序列克隆到 Yip5 载体中并整合,然后测量 Ura 分离株(5-FOA 抗性菌落)的频率。[1]

URA3 基因的完全缺失(1.1 kb HindIII 片段)对细胞是致死的,表明 URA3 基因 5' 端存在一个必需基因。ura3-52 突变是不可回复的,但由于 Ty 元件的插入,它包含了所有野生型 URA3 序列。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C5H3FN2O4
分子量
174.0867
精确质量
174.007
CAS号
703-95-7
PubChem CID
69711
外观&性状
White to yellow solid powder
密度
1.8±0.1 g/cm3
熔点
278 °C (dec.)(lit.)
折射率
1.580
LogP
-1
tPSA
103.02
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
12
分子复杂度/Complexity
309
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C5H3FN2O4/c6-1-2(4(10)11)7-5(12)8-3(1)9/h(H,10,11)(H2,7,8,9,12)
化学名
5-fluoro-2,4-dioxo-1H-pyrimidine-6-carboxylic acid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~125 mg/mL (~718.02 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 5.7442 mL 28.7208 mL 57.4416 mL
5 mM 1.1488 mL 5.7442 mL 11.4883 mL
10 mM 0.5744 mL 2.8721 mL 5.7442 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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