| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在最小培养基中,浓度为 1 mg/ml 的 5-氟乳清酸(表 I)可完全抑制所有测试的 Ura+ 酵母菌株的生长,而 Ura- 细胞则能生长并形成抗性菌落。[1]
当浓度降低至 500 μg/ml 时,Ura+ 细胞的背景生长显著增加。[1] 在含有 1 mg/ml 5-氟乳清酸的 YPD 富营养培养基中,生长抑制效果存在差异:一些 Ura+ 菌株的生长受到抑制,而另一些则不受影响。[1] |
|---|---|
| 细胞实验 |
酵母细胞在YPD液体培养基或YPD平板上预培养,然后在5-氟乳清酸(5-FOA)培养基上进行筛选。最多可将10⁷个细胞接种到含有5-FOA培养基的50 mm培养皿中。在30°C下,4-7天内即可出现抗性菌落。[1]
对于等位基因置换(移位),将含有整合了URA3和目的基因的质粒的Ura+转化子接种到含有5-氟乳清酸(5-FOA)的培养基上。通过同源重组丢失URA3基因的细胞获得5-FOA抗性(Ura-),而亲代Ura+细胞则不生长。 [1] 在质粒重组实验中,将携带必需基因(cdc27Δ1)染色体缺失且在URA3质粒上具有野生型拷贝的菌株,用携带相同基因的诱变LEU2质粒进行转化。将Leu+转化子在容许温度下培养,然后进行复制平板接种到5-氟乳清酸(5-FOA)培养基上。分析从背景中生长出来的Ura-乳突。如果LEU2质粒携带温度敏感等位基因,则乳突仅在容许温度(22°C)下出现,而在限制温度(36°C)下不出现。如果LEU2质粒携带无效突变,则在任何温度下都不会出现5-FOA抗性乳突。 [1] 为了引入ura3缺失,将转化了整合质粒pJEF1332(含有ura3Δ1突变和TRP1标记)的酵母细胞在SC-Trp培养基上进行筛选。然后将转化子划线接种到5-氟乳清酸(5-FOA)培养基(含有色氨酸和其他营养物质)上,以分离出丢失了野生型URA3基因、质粒序列和TRP1的5-FOA抗性分离株。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在最小培养基中,浓度为 1 mg/ml 的 5-氟乳清酸对所有测试的 Ura+ 酵母菌株均有毒性,可抑制其生长。[1]
在含有 1 mg/ml 5-氟乳清酸的 YPD 富营养培养基中,其毒性表现不一:它能抑制某些 Ura+ 菌株的生长,但对其他菌株则无影响。[1] 该化合物对 Ura- 细胞(例如 ura3 突变体)无毒性,允许其选择性生长。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
5-氟乳清酸 (5-FOA) 是一种选择性试剂,能够从大量野生型 Ura+ 细胞中检测出罕见的 ura3- 细胞。其应用得益于 URA3 克隆载体的可用性、URA3 基因的体积小且序列已知,以及筛选方法的简便性和高效性。[1] 5-FOA 的筛选原理是将无毒化合物转化为对野生型 Ura+ 细胞有毒的化合物;缺乏形成这种有毒化合物能力的突变细胞在惰性前体存在的情况下仍能生长。[1] 5-FOA 筛选可用于等位基因置换(等位基因替换)以用体外生成的突变等位基因替换染色体上的野生型基因,也可用于质粒重组以分离必需克隆基因中的条件致死突变。 [1]
该方法也用于测量酵母重复序列的有丝分裂重组频率:将目标序列克隆到 Yip5 载体中并整合,然后测量 Ura 分离株(5-FOA 抗性菌落)的频率。[1] URA3 基因的完全缺失(1.1 kb HindIII 片段)对细胞是致死的,表明 URA3 基因 5' 端存在一个必需基因。ura3-52 突变是不可回复的,但由于 Ty 元件的插入,它包含了所有野生型 URA3 序列。[1] |
| 分子式 |
C5H3FN2O4
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|---|---|
| 分子量 |
174.0867
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| 精确质量 |
174.007
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| CAS号 |
703-95-7
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| PubChem CID |
69711
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| 密度 |
1.8±0.1 g/cm3
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| 熔点 |
278 °C (dec.)(lit.)
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| 折射率 |
1.580
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| LogP |
-1
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| tPSA |
103.02
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
12
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| 分子复杂度/Complexity |
309
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C5H3FN2O4/c6-1-2(4(10)11)7-5(12)8-3(1)9/h(H,10,11)(H2,7,8,9,12)
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| 化学名 |
5-fluoro-2,4-dioxo-1H-pyrimidine-6-carboxylic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~718.02 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.95 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 5.7442 mL | 28.7208 mL | 57.4416 mL | |
| 5 mM | 1.1488 mL | 5.7442 mL | 11.4883 mL | |
| 10 mM | 0.5744 mL | 2.8721 mL | 5.7442 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。