5-Hydroxy-6,7-dimethoxylflavone   中文名称: 5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮

IC50: EV71; bacterial
For anti-EV71 activity: the compound inhibits EV71 replication, specifically viral VP2 protein expression, thereby inhibiting viral capsid protein synthesis; it affects the initial stage of virus infection but does not block viral attachment and entry (IC50 = 37.72 ± 0.78 μg/mL for EV71-induced cytopathic effect). [1][3]
For anti-Pseudomonas aeruginosa activity: the compound targets quorum sensing (QS) regulatory proteins LasR and RhlR by competitively inhibiting the binding of natural autoinducers, as evidenced from molecular dynamics simulation studies. [2]

莫斯洛黄酮以剂量依赖的方式抑制小鼠巨噬细胞系J774A上清液中的TNF-α、IL-1β和iNOS水平。它还可以作为寻找治疗炎症和免疫调节疾病的先导化合物的起始原料[2]。莫斯洛黄酮通过抑制TNF-α和IL-1β表现出良好的抗炎活性，其IC50值分别为16.4 μM和6.4 μM。

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5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮以剂量依赖的方式对Vero细胞中的EV71表现出强烈的抗EV71活性；在50 μg/mL的浓度下，它显著降低了可见细胞病变效应（CPE）的形成并提高了细胞活力（EC50 = 37.72 ± 0.78 μg/mL，CC50 > 50 μg/mL）。 [1][3]
在添加时间试验中，该化合物在病毒接种后立即添加（0 h）以及接种后早期阶段（1、2 和 4 h）均能抑制 EV71 感染，抑制率高于 80%；然而，在感染前添加（-1 h）时，抑制率下降至 ≤20%，表明该化合物影响 EV71 感染的初始阶段，但并不阻断病毒的吸附和进入。[1][3]
实时 PCR 分析显示，在 EV71 感染 48 小时后，该化合物（浓度为 50 μg/mL）对 EV71 NCR 基因的表达影响甚微。[1][3]
Western blot 分析显示，在 EV71 感染 48 小时后，浓度为 50 μg/mL 的 5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮显著降低了病毒 VP2 蛋白（34 kDa）的表达。 [1][3]
针对铜绿假单胞菌PAO1，5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮在低于最低抑菌浓度（MIC）的剂量下表现出抗群体感应活性，抑菌圈直径为16 mm。在低于MIC的浓度下，它抑制了绿脓菌素的产生59.52 ± 2.74%，LasB弹性蛋白酶活性35.90 ± 4.34%，以及几丁质酶活性61.18 ± 5.52%。[2]
该化合物还减少了生物膜的形成、胞外多糖（EPS）的产生、藻酸盐的产生和鼠李糖脂的产生。它显著降低了细菌的游动和群体运动能力。光学显微镜、共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM) 和扫描电子显微镜 (SEM) 分析表明，与对照组中厚厚的聚集生物膜相比，用 5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮 处理可形成更薄的生物膜结构。 [2]
RT-PCR 基因表达研究表明，该化合物下调了 QS 调控毒力基因的表达水平：lasI (60.64%)、lasR (91.70%)、rhl (57.30%)、chiC (90.20%)、rhlA (47.87%)、rhlR (21.55%)、lasB (37.80%)、phzM (42.40%)、toxA (61.00%)、aprA (58.4%)、exoS (78.01%)、algD (46.60%) 和 pelA (50.45%)。 [2]
分子动力学模拟研究（使用 GROMACS 5.1.2 和 GROMOS 力场）验证了 LasR-5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮和 RhlR-5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮复合物的稳定性。模拟后，使用 MM/PBSA 进行结合能计算，以评估蛋白质-配体相互作用。[2]

在秀丽隐杆线虫液体杀灭试验中，5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮显著提高了感染铜绿假单胞菌PAO1的秀丽隐杆线虫的存活率，表明其能减弱细菌毒力因子。[2] 在以GFP标记的铜绿假单胞菌PAO1和秀丽隐杆线虫（L4期）为底物的线虫生长培养基上进行的体内定植试验中，荧光显微镜观察显示，5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮处理降低了线虫体内的细菌定植。[2]

为检测抗EV71活性：将Vero细胞（非洲绿猴肾上皮细胞系）以每孔2×10⁴个细胞的密度接种于96孔培养板中。次日，移除培养基并用PBS洗涤细胞。然后加入0.09 mL稀释的EV71病毒悬液（含TCID₅₀，可在2天内产生细胞病变效应）和0.01 mL 5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮（浓度分别为0.4、2、10和50 μg/mL）。在37℃、5% CO₂条件下孵育2天后，在32×10倍显微镜下观察细胞形态，并使用磺基罗丹明B (SRB) 法评估细胞活力，以检测细胞病变效应的降低情况。 [1][3]
对于添加时间测定：将Vero细胞以每孔2×10⁴个细胞的密度接种于96孔板中，并培养1天。用PBS洗涤后，分别在EV71感染前（-1 h）、感染过程中（0 h）或感染后（1、2、4、6和8 h）加入50 μg/mL的5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮。2天后，使用SRB法检测抗病毒活性。[1][3]
对于实时PCR分析：将Vero细胞以每孔2×10⁴个细胞的密度接种于96孔板中。第二天，移除培养基并用PBS洗涤细胞。然后加入90 μL稀释的病毒悬液和10 μL含有50 μg/mL 5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮的培养基。在37°C、5% CO₂条件下孵育48小时后，提取总RNA，进行逆转录，并使用β-肌动蛋白和EV-NCR的引物进行实时PCR。[1][3]
对于Western blot分析：在EV71感染前24小时，将Vero细胞以5×10⁵个细胞/孔的密度接种于6孔板中。感染后的细胞用50 μg/mL 5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮处理48小时，以检测病毒VP2蛋白。以经 0.1% DMSO 处理的假感染细胞和经 0.1% DMSO 处理的 EV71 感染细胞作为对照。将细胞在冰冷的 RIPA 裂解缓冲液中裂解，取 30 mg 蛋白样品煮沸后进行 12% 丙烯酰胺凝胶电泳分离。将蛋白转移至硝酸纤维素膜，用 5% 脱脂奶粉封闭，然后分别与小鼠抗 EV71 单克隆抗体（1:1000）或 α-微管蛋白小鼠单克隆 IgG1 抗体（1:1000）孵育，随后与山羊抗小鼠 IgG-HRP 多克隆抗体（1:5000）孵育。采用增强化学发光法显色。[1][3]
抗铜绿假单胞菌检测：使用铜绿假单胞菌 PAO1 进行各种基于细胞的检测。绿脓菌素抑制率的测定方法为：将上清液与氯仿（3:2）混合，用0.2N HCl提取，并在520 nm处测定吸光度值（OD）。LasB弹性蛋白酶活性的测定方法为：将上清液与弹性蛋白刚果红（ECR）缓冲液在37℃下孵育3小时，然后与磷酸钠缓冲液混合，并在495 nm处测定吸光度值（OD）。几丁质酶活性的测定方法为：以几丁质天青为底物，在柠檬酸钠缓冲液中振荡7天，离心，并在570 nm处测定吸光度值（OD）。生物膜抑制率的测定方法为：使用结晶紫染色（0.4%）的微孔板法，并在590 nm处测定吸光度值（OD）。胞外多糖的定量采用总碳水化合物测定法（苯酚-硫酸法），并在490 nm处测定吸光度值（OD）。藻酸盐抑制率的定量采用咔唑法，并在530 nm处测定吸光度值（OD）。使用甲苯和 600 nm 波长处的吸光度 (OD) 评估细胞表面疏水性。鼠李糖脂的产生通过间苯二酚法测定，并在 421 nm 波长处测定吸光度 (OD)。在琼脂培养基（分别为 0.3% 和 0.5% 琼脂）上，于 37°C 培养 24 小时后评估细菌的游动性和群体运动性。使用光学显微镜、共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM)（吖啶橙染色）和扫描电子显微镜 (SEM)（戊二醛固定）观察生物膜结构。[2] RT-PCR 基因表达：使用 Trizol 试剂提取经 5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮处理的铜绿假单胞菌 PAO1 的总 RNA。使用 cDNA 合成试剂盒构建 cDNA。使用SYBR Green Master Mix在实时荧光定量PCR系统中扩增基因，引物列于表1（包括lasI、lasR、rhl、rhlR、phzM、lasB、rhlA、toxA、exoS、aprA、algD、chiC、pelA、proC）。循环条件：95℃初始变性10分钟，然后进行45个循环，每个循环包括95℃变性30秒、特定温度退火15秒、72℃延伸15分钟，最后72℃延伸5分钟。[2]

秀丽隐杆线虫存活率测定（液体杀灭试验）：将感染铜绿假单胞菌PAO1的秀丽隐杆线虫（L4期）置于24孔微孔板中，25℃孵育12小时。取15条线虫转移至含有10% LB培养基的M9缓冲液孔中，并在25℃下分别加入或不加入亚抑菌浓度（sub-MIC）的5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮（5-H-6,7-dimethoxylflavone）。以喂食大肠杆菌OP50的秀丽隐杆线虫作为对照。连续4天，每12小时计数死虫和活虫，并绘制存活曲线。 [2]
体内定殖试验：将秀丽隐杆线虫（L4期）培养于含有GFP标记的铜绿假单胞菌PAO1的线虫生长培养基上，分别进行5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮处理和不处理。孵育24小时后，用M9缓冲液洗涤线虫，并在荧光显微镜下进行分析。[2]

在 Vero 细胞中，5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮在浓度高达 50 μg/mL 时未显示出细胞毒性（CC50 > 50 μg/mL）。[1][3] 在铜绿假单胞菌 PAO1 中，最低抑菌浓度 (MIC) 测定为 250 μg/mL，所有生物活性实验均使用低于 MIC 的浓度，未观察到生长抑制。[2]

[1]. Inhibitory Effects of Norwogonin, Oroxylin A, and Mosloflavone on Enterovirus 71.Biomol Ther (Seoul). 2016 Sep 1;24(5):552-8.

[2]. Mosloflavone attenuates the quorum sensing controlled virulence phenotypes and biofilm formation in Pseudomonas aeruginosa PAO1: In vitro, in vivo and in silico approach.Microb Pathog. 2019 Jun;131:128-134.

[3]. Anti-inflammatory and immunomodulatory flavones from Actinocarya tibetica Benth.Nat Prod Res. 2013;27(23):2227-30.

莫斯洛黄酮属于黄酮类化合物，是一种醚类化合物。据报道，它存在于甜假丝酵母（Candida dulcis）、苏氏假丝酵母（Candida suans）以及其他具有相关数据的微生物中。

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5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮是从黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）地上部分分离得到的黄酮类化合物（采用甲醇提取，依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取，然后进行C18柱色谱和Sephadex LH20柱色谱分离；化学结构通过电喷雾电离质谱、¹H-NMR和¹³C-NMR鉴定）。[1][3]
它也从梭州莫斯洛（Mosla soochouensis Matsuda）的草药中提取得到。 [2]
该化合物通过抑制病毒VP2蛋白的表达而表现出抗EV71活性，并作为EV71复制或翻译的早期抑制剂，而不阻断病毒的附着和进入。[1][3]
它通过下调群体感应调控的毒力基因，并竞争性抑制自身诱导物与LasR和RhlR的结合，减弱铜绿假单胞菌PAO1的群体感应控制毒力表型和生物膜形成。[2]
该化合物在秀丽隐杆线虫体内模型系统中显示出控制细菌感染的良好潜力。[2]

C17H14O5

298.2901

298.084

740-33-0

471722

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

508.5±50.0 °C at 760 mmHg

163-164ºC (chloroform , acetone )

190.5±23.6 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.622

2.74

68.9

1

5

3

22

440

0

SIVAITYPYQQYAP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H14O5/c1-20-14-9-13-15(16(19)17(14)21-2)11(18)8-12(22-13)10-6-4-3-5-7-10/h3-9,19H,1-2H3

5-hydroxy-6,7-dimethoxy-2-phenylchromen-4-one

5-Hydroxy-6,7-dimethoxylflavone;F4DL1FN60Q;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~167.62 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (8.38 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。