| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mpro (IC50 = 53 nM)[1]
FB2001 (also known as compound 11a) is a drug candidate that targets the main protease (Mpro, also called 3CL protease) of SARS-CoV-2. It inhibits Mpro by covalently binding to cysteine 145 (Cys145). The IC50 value of FB2001 against SARS-CoV-2 Mpro is 0.053 ± 0.005 μM. [2] Bofutrelvir targets the SARS-CoV-2 main protease (Mpro, also known as 3CL protease), an essential enzyme for viral replication that cleaves viral polyproteins into functional proteins. The compound inhibits Mpro with an IC50 of 53 nM. By inhibiting Mpro, Bofutrelvir blocks viral replication. The compound exhibits potent antiviral efficacy against several SARS-CoV-2 variants. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，博福瑞韦（24小时）对SARS-CoV-2及其变种具有活性，其对SARS-CoV-2、SARS-CoV-2（α）、SARS-CoV-2（β）、SARS-CoV-2（δ）和SARS-CoV-2（ω）的EC50值分别为0.42、0.39、0.28、0.27和0.26 μM[2]。在Vero E6细胞中，即使在人血存在的情况下，博福瑞韦在EC50值（1.1–2.4 μM）下也能抑制SARS-CoV-2的复制[2]。体外实验表明，博福瑞韦与瑞德西韦联合治疗对SARS-CoV-2具有叠加效应[2]。
FB2001在Vero E6细胞中对多种SARS-CoV-2变种表现出强效的抗病毒活性，病毒拷贝数减少证实了这一点。其EC50值分别为：B.1.1.7 (Alpha) 0.39 ± 0.01 μM，B.1.351 (Beta) 0.28 ± 0.11 μM，B.1.617.2 (Delta) 0.27 ± 0.05 μM，以及B.1.1.529 (Omicron) 0.26 ± 0.06 μM。相应的EC90值分别为：Alpha 0.75 ± 0.01 μM，Beta 0.57 ± 0.21 μM，Delta 0.81 ± 0.20 μM，并报告了Omicron的EC50值。选择性指数 (SI50) 值分别为 704、980、1016 和 933。[2] 在 P-糖蛋白 (P-gp) 抑制剂 (CP-100356) 存在下，FB2001 对 Omicron 变体的抑制活性显著增强，EC50 为 0.042 ± 0.007 μM，CC50 为 142.4 μM，表明 FB2001 可能是 P-gp 的底物。 [2] 添加时间实验表明，FB2001（2 μM、10 μM 和 1 μM + P-gp 抑制剂）在所有测试条件下均表现出强效的抗病毒活性，尤其是在病毒进入后（2-24 小时）和全程（-2 至 24 小时）给药时，这与其作为主要蛋白酶抑制剂的作用机制相符。它还显示出对病毒进入过程的抑制作用。[2] 可逆性研究表明，FB2001是一种可逆的 Mpro 抑制剂。将 SARS-CoV-2 Mpro (2 mM) 与 2 μM 的 FB2001 孵育 60 分钟后，分别进行 50 倍和 200 倍稀释，Mpro 活性得以恢复，与可逆抑制剂 PF-07321332 类似，但与不可逆抑制剂 N3 不同。与PF-07321332相比，FB2001更难从Mpro中解离。[2] 野生型及其变体（Alpha、Beta、Delta、Omicron）的Mpro序列比对显示存在两个突变：Beta中的K90R和Omicron中的P132H。X射线晶体结构分析表明，这些突变位于远离FB2001配体结合位点的位置，表明它们不会影响其抑制活性。[2] 在高浓度人血清存在下，FB2001仍保持有效的抗SARS-CoV-2活性。EC50值从1.10 μM（10%血清）增加到2.40 μM（50%血清），表明人血清对其体外抑制活性没有显著影响。 [2] 与瑞德西韦联合用药研究显示，其对SARS-CoV-2具有叠加效应。采用零相互作用效价（ZIP）模型计算的协同作用评分为6.947，表明存在叠加效应（评分介于-10和10之间）。[2] 体外研究表明，博福瑞韦（24小时）对SARS-CoV-2及其变异株具有活性，EC50值为0.26-0.42 μM。该化合物抑制Mpro的IC50值为53 nM。它对包括α、β和δ在内的几种SARS-CoV-2变异株均显示出抗病毒活性。该化合物的作用机制涉及抑制主要蛋白酶Mpro。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在用SARS-CoV-2 Delta变异株攻击的K18-hACE2小鼠中，腹腔注射FB2001（剂量分别为100 mg/kg和200 mg/kg，每日两次，持续4天）可显著降低病毒载量和滴度，且呈剂量依赖性。[2]
感染后第2天，与对照组相比，200 mg/kg组肺部病毒滴度降低了3.57 log10 PFU/g。第4天，200 mg/kg组肺部和脑组织中的病毒滴度均低于检测限。[2] 感染后第2天，100 mg/kg组肺部病毒RNA载量降低了1.02和1.60 log10 copies/g；感染后第4天，200 mg/kg组肺部病毒RNA载量降低了0.67和1.14 log10 copies/g。在脑组织中，100 mg/kg 和 200 mg/kg 组在第 4 天病毒 RNA 载量分别显著降低了 2.37 和 5.26 log10 拷贝/克。[2]组织病理学分析显示，FB2001 治疗显著改善了肺部和脑组织的病理改变。在肺部，FB2001 减少了间质炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚和血管周围浸润。在脑组织中，FB2001 减少了神经元变性和细胞浸润，并保护脑组织免受病毒引起的损伤。病毒 NP 的免疫组织化学染色证实，肺组织和脑组织中的病毒抗原均呈剂量依赖性降低。 [2] 博福瑞韦（100 和 200 mg/kg；第 0 天每日一次腹腔注射，第 1、2 和 3 天每日两次，连续 4 天）对体内 SARS-CoV-2 δ 变异株感染有效[2]。 目前尚未发表博福瑞韦的详细体内活性数据。该化合物主要在体外作为 COVID-19 研究的抗病毒药物进行表征。其对 SARS-CoV-2 变异株的强效体外活性（EC50 值为 0.26-0.42 μM）表明其可能具有体内应用潜力。需要进一步研究以评估其在 SARS-CoV-2 感染动物模型中的疗效。 |
| 酶活实验 |
Mpro酶活性测定：将SARS-CoV-2 Mpro（2 mM）与2 μM的FB2001、可逆抑制剂PF-07321332或不可逆抑制剂N3孵育60分钟。然后将孵育混合物稀释50倍和200倍，并监测Mpro活性。与N3孵育后抑制活性未恢复，但与FB2001和PF-07321332孵育后抑制活性恢复，表明FB2001是可逆的Mpro抑制剂。 [2] X射线晶体衍射：SARS-CoV-2 Mpro与FB2001复合物的晶体结构分析（PDB：6LZE）表明，FB2001的醛基与Mpro的Cys145形成共价键。该结构还显示，在变异株中发现的K90R和P132H突变位点远离配体结合位点。[2] 博福瑞韦对Mpro的抑制活性可通过体外酶活性测定进行评估。在一个典型的测定中，将重组SARS-CoV-2 Mpro与荧光底物和不同浓度的博福瑞韦一起孵育。底物裂解释放出荧光产物，对其进行测量并计算IC50值。Mpro抑制的IC50值为53 nM。抗病毒活性则使用SARS-CoV-2感染的细胞进行评估。
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| 细胞实验 |
Vero E6细胞抗病毒活性测定：将Vero E6细胞接种于48孔板（50,000个细胞/孔）。次日，将细胞与系列稀释的FB2001预孵育1小时，然后以0.01或0.005的MOI感染SARS-CoV-2变异株1小时。感染后，洗涤细胞，并加入新鲜配制的化合物（含或不含P-gp抑制剂CP-100356）。感染后24小时收集上清液，提取病毒RNA，并通过实时定量PCR测定病毒拷贝数。EC50值由抑制曲线计算得出。[2]
细胞毒性测定：将Vero E6细胞接种于96孔板，并与系列稀释的FB2001孵育24小时。采用CCK8试剂盒测定细胞活力，并计算CC50值。[2] 人血清蛋白结合效应测定：将Vero E6细胞以SARS-CoV-2（MOI 0.01）感染1小时，然后洗涤，并在含有10%、20%、30%、40%或50%人血清的培养基中加入不同浓度的FB2001进行孵育。24小时后，收集上清液，提取病毒RNA，并通过RT-qPCR测定拷贝数。计算每种血清浓度的EC50值。[2] 联合用药研究的免疫荧光分析（IFA）：将Vero E6细胞接种于96孔板（20,000个细胞/孔）。细胞先用FB2001和瑞德西韦的组合预孵育1小时，然后用SARS-CoV-2（MOI 0.01）感染。感染24小时后，固定细胞，进行透化处理，并用针对SARS-CoV-2 NP的一抗和二抗进行染色。测量荧光强度并计算抑制率。使用ZIP模型确定协同作用评分。[2] 使用SARS-CoV-2感染的细胞系评估博福瑞韦的抗病毒活性。用不同浓度的博福瑞韦处理细胞。通过qRT-PCR定量病毒RNA或通过噬斑试验测量病毒复制。根据剂量反应曲线计算SARS-CoV-2及其变体的EC50值（0.26-0.42 μM）。使用 MTT 检测法评估未感染细胞的细胞毒性。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：感染SARS-CoV-2 delta变异株的K18-hACE2小鼠[2]
剂量：100和200 mg/kg 给药途径：腹腔注射；第0天每天一次，每次100和200 mg/kg；第1、2和3天每天两次，持续4天 实验结果：显示出对肺部病毒滴度的剂量依赖性疗效。有效降低肺部病毒载量。对SARS-CoV-2 delta变异株表现出剂量依赖性的抗病毒活性，并显著降低小鼠肺部和脑部的病毒载量。 动物：使用7-8周龄的K18-hACE2转基因小鼠。 [2] 病毒攻击：小鼠于第0天经鼻内滴注感染1 × 10³ PFU的SARS-CoV-2 Delta变异株。[2] 药物制备：注射用FB2001的制备方法为：将FB2001溶于0.9%无菌生理盐水中，摇匀至完全溶解，并用0.22 μm滤膜过滤。浓度分别为11.5 mg/mL（100 mg/kg剂量）和23 mg/mL（200 mg/kg剂量）。溶剂对照组为0.9%无菌生理盐水。[2] 给药方案：小鼠分为三组（每组n=7）：溶剂对照组、FB2001 100 mg/kg组和FB2001 200 mg/kg组。给药方式为腹腔注射，每只小鼠注射0.2 mL，注射量根据平均体重（23 g）计算。第0天（感染后2小时）给药一次，第1、2、3天每天给药两次（间隔9小时）。[2] 样本采集：每组4只小鼠于第2天处死，每组3只小鼠于第4天处死。采集肺和脑组织。右肺组织在DMEM培养基中匀浆，用于病毒RNA提取和滴度测定。左肺组织用4%多聚甲醛固定，用于组织病理学检查和免疫组织化学染色。[2] 病毒载量测定：提取肺和脑组织中的病毒RNA，进行逆转录，并通过实时定量PCR定量病毒RNA的绝对拷贝数。病毒滴度通过噬斑试验（PFU/g）测定。 [2] 组织病理学和免疫组织化学：将固定的肺和脑组织包埋于石蜡中，切片，并用苏木精-伊红染色进行组织病理学分析。采用针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的抗体进行免疫组织化学染色，以检测病毒抗原。[2] 目前尚未发表关于博福瑞韦的详细体内动物模型数据。该化合物主要在体外作为COVID-19研究的抗病毒药物进行表征。未来的研究可能涉及使用SARS-CoV-2感染的小鼠模型来评估博福瑞韦的体内疗效。此类研究对于在生理环境下确认该化合物的抗病毒活性至关重要。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
本研究利用SD大鼠和比格犬的血浆和肺浓度数据，建立并验证了一个基于生理的药代动力学（PBPK）模型，用于预测人体肺部FB2001浓度。[2]
模拟人体给药方案为每日两次（BID）连续5天服用200 mg FB2001，观察到的稳态血浆谷浓度（Ctrough,ss）为0.163 μg/mL，预测的肺部总Ctrough,ss为2.5 μg/mL。[2] 与P-gp抑制剂存在下FB2001对Omicron变体的EC50（0.019 μg/mL）相比，血浆Ctrough,ss高约9倍，预测的肺部Ctrough,ss高约132倍。 [2] 该模型预测了其他给药方案（150 mg BID、300 mg QD 和 400 mg QD）的肺部药物浓度，相应的谷浓度（Ctrough,ss）值分别为 1.8、1.7 和 2.2 μg/mL。[2] 目前尚未发表博福瑞韦的详细药代动力学数据。该化合物的分子量约为 519.6 g/mol，分子式为 C28H37N5O5，纯度≥98%。需要进一步研究以表征其吸收、分布、代谢和排泄特性，包括口服生物利用度、血浆蛋白结合率、清除率和半衰期。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在K18-hACE2小鼠疗效研究中，无论是载体对照组还是FB2001治疗组（100 mg/kg和200 mg/kg），均未观察到体重的显著变化，表明在测试剂量下具有良好的耐受性。[2]
该研究未报告具体的毒理学数据（例如，LD50、器官毒性）。研究指出，FB2001在临床试验（NCT05197179和NCT04766931）中已显示出对健康受试者良好的安全性和耐受性。[2] 目前尚未公布Bofutrelvir的详细毒性数据。作为一种Mpro抑制剂，它可能对宿主蛋白酶产生靶向作用。需要进行全面的毒理学研究来评估其安全性，以用于潜在的治疗开发。该化合物仅供研究使用。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
N-[(2S)-3-环己基-1-氧代-1-({(2S)-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷酮-3-基]丙基-2-基}氨基)丙基-2-基]-1H-吲哚-2-甲酰胺是一种仲甲酰胺，由1H-吲哚-2-羧酸的羧基与3-环己基-N-{(2S)-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷酮-3-基]丙基-2-基}-L-丙氨酰胺的伯氨基缩合而成。它是SARS冠状病毒主蛋白酶的抑制剂，并能抑制SARS-CoV-2在细胞培养中的复制（EC50 = 0.53 μM）。它是一种EC 3.4.22.69（SARS冠状病毒主蛋白酶）抑制剂，也是一种抗冠状病毒药物。它是一种吲哚甲酰胺类化合物，属于吡咯烷-2-酮类，同时也是一种醛、仲甲酰胺和寡肽化合物。博维瑞韦是一种小分子抑制剂，可抑制严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2) 的主蛋白酶（Mpro；3C样蛋白酶；3CL蛋白酶；3CLpro；nsp5蛋白酶），具有潜在的抗SARS-CoV-2病毒活性。静脉注射或吸入肺部后，博维瑞韦可选择性地靶向、结合并抑制SARS-CoV-2 Mpro的活性。该药物抑制病毒多聚蛋白的蛋白水解，从而抑制多种病毒蛋白的形成，包括解旋酶、单链RNA结合蛋白、RNA依赖性RNA聚合酶、20-O-核糖甲基转移酶、核糖核酸酶和核酸外切酶。这可阻止病毒的转录和复制。博夫瑞韦可能具有脑部抗病毒活性。
博夫瑞韦（FB2001，CAS号：2103278-86-8）是一种SARS-CoV-2主蛋白酶Mpro抑制剂，IC50为53 nM，EC50为0.53 μM。它对SARS-CoV-2变异株具有强效抗病毒活性，EC50值为0.26-0.42 μM。该化合物用于COVID-19感染的研究。分子式为 C28H37N5O5。博福瑞韦还有其他 CAS 编号，也称为 DC-402234 和 FB-2001。 |
| 分子式 |
C25H32N4O4
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|---|---|
| 分子量 |
452.55
|
| 精确质量 |
452.242
|
| 元素分析 |
C, 66.35; H, 7.13; N, 12.38; O, 14.14
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| CAS号 |
2103278-86-8
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| PubChem CID |
145343771
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
836.8±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
459.9±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±3.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.592
|
| LogP |
2.7
|
| tPSA |
120
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
|
| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
723
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
|
| SMILES |
C1CCC(CC1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2CCNC2=O)C=O)NC(=O)C3=CC4=CC=CC=C4N3
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| InChi Key |
HPKJGHVHQWJOOT-ZJOUEHCJSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C25H32N4O4/c30-15-19(13-18-10-11-26-23(18)31)27-24(32)21(12-16-6-2-1-3-7-16)29-25(33)22-14-17-8-4-5-9-20(17)28-22/h4-5,8-9,14-16,18-19,21,28H,1-3,6-7,10-13H2,(H,26,31)(H,27,32)(H,29,33)/t18-,19-,21-/m0/s1
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| 化学名 |
N-[(2S)-3-cyclohexyl-1-oxo-1-[[(2S)-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopyrrolidin-3-yl]propan-2-yl]amino]propan-2-yl]-1H-indole-2-carboxamide
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| 别名 |
Bofutrelvir; 2103278-86-8; Mpro inhibitor 11A; T5UX5SKK2S; MPI-10;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 100 mg/mL (220.97 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.52 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2097 mL | 11.0485 mL | 22.0970 mL | |
| 5 mM | 0.4419 mL | 2.2097 mL | 4.4194 mL | |
| 10 mM | 0.2210 mL | 1.1049 mL | 2.2097 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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