HADA hydrochloride (HCC-Amino-D-alanine hydrochloride)

别名: 盐酸HADA(HCC-氨基-D-丙氨酸盐酸盐)
目录号: V35049 纯度: ≥98%
HADA HCl (HCC-氨基-D-丙氨酸 HCl) 是一种蓝色荧光 FDAA (λem~450 nm)。
HADA hydrochloride (HCC-Amino-D-alanine hydrochloride) CAS号: 2253733-10-5
产品类别: Bacterial
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
50mg
100mg
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产品描述
HADA HCl(HCC-氨基-D-丙氨酸盐酸盐)是一种蓝色荧光FDAA(发射波长λem~450 nm)。FDAA能高效结合多种细菌肽聚糖(PG)合成位点,从而实现对细菌生长的特异性共价检测,且干扰极小。
HADA盐酸盐(HCC-氨基-D-丙氨酸盐酸盐)是一种蓝色荧光D-氨基酸(FDAA),发射波长约为450 nm。该化合物的CAS号为2253733-10-5,分子量为328.71。HADA是一种荧光探针,能高效整合到多种细菌肽聚糖(PG)的PG生物合成位点。这使得我们能够以最小的干扰对细菌生长进行特异性共价探测。对于大肠杆菌等快速生长的细菌,FDAA标记可在短短30秒内完成。 HADA 适用于标记活细菌中的肽聚糖,可对各种细菌细胞群进行强烈的周边和隔膜标记,而不会影响生长速率。
生物活性&实验参考方法
靶点
HADA hydrochloride targets the peptidoglycan (PG) biosynthesis machinery of bacteria. Peptidoglycan is a polymer consisting of sugars and amino acids that forms a mesh-like layer outside the plasma membrane of most bacteria, providing structural integrity and protection. HADA is a fluorescent D-amino acid that is incorporated into the peptidoglycan at sites of active synthesis by the bacterial transpeptidase and transglycosylase enzymes. Because D-amino acids are not typically used by mammalian cells, HADA specifically labels bacterial cells without affecting eukaryotic cells. The compound's ability to label peptidoglycan makes it a valuable tool for studying bacterial growth, cell division, and antibiotic susceptibility.
体外研究 (In Vitro)
对于生长迅速的微生物(例如大肠杆菌),FDAA标记仅需30秒。HADA盐酸盐可为大多数细菌物种提供最可靠、最稳定的肽聚糖标记,并且通常无需进行显著调整,尽管其光稳定性不如FDL或TDL,且颜色更深[1]。
在体外,HADA盐酸盐用于活细菌中肽聚糖的荧光标记。该化合物能高效地掺入肽聚糖的生物合成位点,从而可以通过荧光显微镜观察细菌细胞壁。HADA标记可使多种细菌细胞群(包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌)的周边和隔膜呈现强烈的染色。标记过程快速,对于大肠杆菌等快速生长的菌种,可在30秒内观察到标记。该化合物不影响细菌的生长速率,因此适用于细菌生长和分裂的延时成像。HADA还可以与其他荧光探针联合使用,进行多重成像。
体内研究 (In Vivo)
在体内,盐酸HADA可用于标记活体生物体内的细菌,例如感染动物模型或肠道微生物群。该化合物可直接注射到动物体内,用于原位标记细菌,从而实现对组织中细菌种群及其空间分布的可视化。HADA标记已被用于研究细菌定植动态、生物膜形成以及抗生素对体内细菌生长的影响。该化合物对细菌肽聚糖的特异性使其成为研究宿主-细菌相互作用以及追踪感染模型中致病菌的宝贵工具。HADA的荧光特性使其能够对活体动物体内细菌的生长和分裂进行实时成像。
酶活实验
体外结合/掺入HADA盐酸盐的实验方法是将细菌与荧光探针孵育。细菌(例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)培养至对数生长期中期,并与浓度为1至100 μM的HADA孵育10至60分钟。洗涤去除未结合的探针后,固定细菌并用荧光显微镜观察。HADA掺入肽聚糖后,细胞壁会呈现荧光标记,其特征模式取决于细菌种类和生长阶段。标记效率可通过流式细胞术或测量荧光强度进行定量。该实验包括对照组(未与HADA孵育的细菌或与非荧光D-氨基酸孵育的细菌)。
细胞实验
体外细胞法检测盐酸HADA的活性,通常使用在液体培养基或琼脂平板上培养的细菌。根据细菌种类和生长速率,将细菌与HADA(通常为10-50 μM)孵育10-60分钟。标记后,洗涤细菌并用荧光显微镜观察。HADA标记可以用于观察细菌形态、细胞分裂以及抗生素对细胞壁合成的影响。延时显微镜可用于实时追踪细菌的生长和分裂。该化合物可与其他荧光染料(例如,膜染料、核酸染料)联合使用,进行多重成像。通过比较荧光强度与对照组,评估标记效率和特异性。
动物实验
使用盐酸HADA进行体内动物研究是在细菌感染的小鼠模型中进行的。小鼠感染细菌病原体(例如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)后,通过静脉注射、腹腔注射或口服途径给予HADA。该化合物可在体内循环并标记细菌。经过适当的标记时间后,收集组织,并通过荧光显微镜或流式细胞术观察细菌标记情况。可以评估细菌在组织中的分布以及抗生素对细菌生长的影响。该化合物对细菌肽聚糖的特异性使其能够在宿主细胞存在的情况下选择性地标记细菌。
药代性质 (ADME/PK)
盐酸HADA的药代动力学性质尚未得到充分表征。作为一种小分子荧光D-氨基酸(分子量328.71),该化合物预计具有中等的水溶性和膜渗透性。HADA在DMSO中的溶解度为125 mg/mL,可溶于水性缓冲液中用于生物学应用。该化合物在生物体液中的稳定性及其组织分布需要针对具体应用进行测定。对于体内标记,该化合物通常溶于生理盐水或其他合适的载体中。HADA的药代动力学取决于多种因素,例如给药途径、剂量以及探针可结合的细菌靶标的存在。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
盐酸HADA通常被认为毒性较低,因为它是一种荧光D-氨基酸,能够特异性标记细菌而不影响真核细胞。该化合物在标记浓度下不影响细菌生长速率,表明其对细菌生理的干扰极小。文献中尚未报道具体的毒理学研究。作为一种研究用化学品,处理盐酸HADA时应遵循标准安全预防措施,包括使用个人防护装备。该化合物应储存在-20°C并避光。盐酸HADA仅供研究使用,不得用于人类或兽医用途。
参考文献

[1]. Synthesis of fluorescent D-amino acids and their use for probing peptidoglycan synthesis and bacterial growth in situ. Nat Protoc. 2015 Jan;10(1):33-52.

其他信息
盐酸HADA属于荧光D-氨基酸(FDAAs)家族,该家族用于标记细菌中的肽聚糖。这些探针彻底改变了细菌细胞壁动力学的研究,使研究人员能够在单细胞水平上实时观察细菌的生长、分裂以及抗生素的作用。HADA是多种具有不同荧光颜色的FDAAs之一(例如,NADA为绿色,HADA为蓝色,TADA为红色),可实现细菌群体的多重成像。这些探针广泛应用于微生物学研究,用于研究细菌生理、宿主-病原体相互作用以及抗生素的作用机制。盐酸HADA仅供科研用途,可从化学品供应商处购买。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C13H13CLN2O6
分子量
328.705122709274
精确质量
328.046
CAS号
2253733-10-5
相关CAS号
1417905-41-9;2253733-10-5 (HCl);
PubChem CID
137919867
外观&性状
White to off-white solid powder
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
22
分子复杂度/Complexity
489
定义原子立体中心数目
1
SMILES
Cl.O1C(C(C(NC[C@H](C(=O)O)N)=O)=CC2C=CC(=CC1=2)O)=O
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : 125 mg/mL (380.27 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (6.33 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.0422 mL 15.2110 mL 30.4220 mL
5 mM 0.6084 mL 3.0422 mL 6.0844 mL
10 mM 0.3042 mL 1.5211 mL 3.0422 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们