| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Immunology; class I MHC-restricted T-cell epitope
LLO (91-99) targets the H-2Kd class I MHC molecule, where it serves as a T-cell epitope. It is an essential antigen for induction of T-cell mediated immunity in vivo. As a class I MHC-restricted epitope, LLO (91-99) is recognized by CD8+ T cells, which then eliminate Listeria-infected cells. The peptide binds to the H-2Kd class I molecule with specific affinity, and single residue changes can affect peptide binding. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
我们利用沙门氏菌疫苗-李斯特菌感染的胞内感染模型，研究了携带单核细胞增生李斯特菌溶血素（LLO）T细胞表位的减毒沙门氏菌菌株诱导表位特异性T细胞应答的能力。我们将LLO的II类（LLO 215-226）或I类（LLO 91-99）MHC限制性T细胞表位插入到减毒的delta aroA都柏林沙门氏菌菌株鞭毛蛋白的中央高变区内。用表达LLO 215-226表位的沙门氏菌构建体的裂解物或热灭活制剂激活了李斯特菌免疫小鼠的T细胞，表明当LLO 215-226作为鞭毛蛋白-表位融合蛋白的一部分呈递给抗原呈递细胞时，该表位能够被加工并呈递给T细胞。将嵌合鞭毛蛋白基因整合到鞭毛蛋白阴性的都柏林沙门氏菌菌株的染色体中，以获得表位的稳定表达。用携带 LLO 215-226 表位的活体染色体整合沙门氏菌构建体进行免疫，该构建体作为鞭毛蛋白的一部分，可产生对相应 LLO 肽段具有反应性的 T 细胞，表明该嵌合体可在体外刺激类别特异性免疫应答。利用表达含有三种不同 LLO 91-99 插入片段之一的嵌合鞭毛蛋白的沙门氏菌疫苗株，研究了侧翼残基对 MHC I 类 LLO 91-99 表位加工和呈递的影响：91-99（侧翼残基为正常鞭毛蛋白氨基酸）；KK91-99KK（侧翼残基为赖氨酸-赖氨酸）；以及 AAA91-99AAA（Ala-Ala-Ala 侧翼残基）[1]。
在体外，LLO (91-99) 作为一种 I 类 MHC 限制性 T 细胞表位，能够刺激抗原特异性 T 细胞。它可用于 ELISPOT、细胞内细胞因子染色 (ICS)、细胞毒性或增殖试验等 T 细胞检测。该肽段是李斯特菌溶血素 (LLO) 的一种外毒素和 I 类 MHC 限制性 T 细胞表位。研究表明，当由适当的抗原呈递细胞呈递时，该肽段可在体外诱导 CTL 反应。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
用KK91–99KK鞭毛蛋白嵌合沙门氏菌菌株免疫的小鼠脾细胞显示出更强的CTL反应，表明赖氨酸-赖氨酸侧翼残基与增强的免疫原性相关，这可能是通过促进抗原呈递细胞内体区室中表位的蛋白水解切除实现的。用表达MHC II类LLO 215–226或I类LLO KK91–99KK鞭毛蛋白嵌合体的沙门氏菌构建体免疫的小鼠，在李斯特菌攻击后，肝脏和/或脾脏中的细菌数量显著减少，表明这些构建体的免疫原性与表位特异性增强的抗感染能力相关[1]。
在体内，LLO(91-99)是诱导T细胞介导免疫的必需抗原。它能诱导CTL反应并有效清除感染细胞中的李斯特菌。该肽可用于李斯特菌感染（例如李斯特菌病）的研究。在免疫研究中，可通过IFN-γ ELISPOT检测测定表位特异性CD8+ T细胞的数量。该肽已被用于以减毒沙门氏菌为递送载体的疫苗研发研究。 |
| 酶活实验 |
DNA 技术[1]
重组 DNA 的常规方法如 Maniatis 等人所述。质粒采用Birnboim和Daly的碱裂解法纯化。细菌菌株采用Dower等人18开发的电穿孔法转化。DNA测序采用Sanger等人19的双脱氧链终止法进行。为了将编码T细胞表位的寡核苷酸插入克隆的鞭毛蛋白基因中，将互补寡核苷酸退火、激酶处理，并与经磷酸酶处理和EcoRV酶切的pLS40819 DNA进行平末端连接。质粒pLS408在S. muendren的friC (HI-d)基因鞭毛蛋白编码序列的中心高变区存在48 bp缺失（EcoRV片段）。pLS408独特的EcoRV位点允许寡核苷酸的平末端插入。连接产物用于转化细菌。在含氨苄青霉素的平板上筛选鞭毛蛋白缺陷型大肠杆菌CL447'菌株及其转化子。使用位于插入点上游78 bp和下游69 bp处的18 bp引物对携带嵌合鞭毛蛋白基因的重组质粒进行测序。 在T细胞刺激试验中，使用LLO(91-99)刺激各种体外试验中的抗原特异性T细胞。通常将该肽溶解于合适的缓冲液中，并以0.1-10 μg/mL的浓度添加到T细胞培养物中。通过ELISPOT（IFN-γ斑点形成细胞）、细胞内细胞因子染色（ICS，检测IFN-γ和TNF-α等细胞因子）、针对肽脉冲靶细胞的细胞毒性试验或使用[3H]-胸苷掺入或CFSE稀释的增殖试验来检测T细胞反应。 |
| 细胞实验 |
本报告中使用的细菌菌株见表1。菌株在添加了适当抗生素的Luria-Bertani肉汤（Difco Laboratories）中于37°C培养。最小培养基的配制参照Mil1er15。对于全菌悬液，对数生长期培养物经离心沉淀后，用无菌PBS洗涤两次。细菌悬液使用Sonifier 250超声波细胞破碎仪进行超声破碎，每次约10秒，持续1分钟。蛋白质浓度采用Bradford蛋白测定试剂盒测定。对于热灭活菌悬液，对数生长期培养物经离心沉淀后，用无菌PBS洗涤两次。通过测定吸光度将细胞密度调整至1×10⁹/ml。将细菌悬液在 80°C 加热 1 小时，然后取等分试样涂布于 LB 琼脂平板上检测其活力[1]。
对于细胞学研究，将抗原呈递细胞（例如树突状细胞或脾细胞）用 LLO (91-99) 肽脉冲处理，并与 CD8+ T 细胞共培养。使用 ELISA 或流式细胞术检测细胞因子（IFN-γ、TNF-α）的产生来评估 T 细胞活化。使用标准铬释放试验或基于流式细胞术的杀伤试验评估肽脉冲靶细胞的细胞毒性。通过 [3H]-胸苷掺入或 CFSE 稀释法测量细胞增殖。将肽溶解于合适的溶剂中，并按照制造商的建议储存。 |
| 动物实验 |
小鼠和免疫方案[1]
6-8周龄的Balb/cByJ和C3Heb/Hej雌性小鼠购自Jackson Laboratories。小鼠腹腔注射单剂量1×10⁶菌落形成单位（CFU）的重组沙门氏菌菌株进行免疫。注射8周后，取出免疫小鼠的脾脏。每组取3-4只小鼠的脾脏混合，用于IL-2和CTL检测。 体内保护试验[1] Balb/cByJ小鼠腹腔注射1×10⁶ CFU的重组沙门氏菌菌株进行免疫。8周后，免疫小鼠腹腔注射2×10⁴ CFU的单核细胞增生李斯特菌（ATCC43251）进行攻击。该菌株的L. nronoeytogenes对Balb/cByJ小鼠的LD50为<5×10⁶ CFU/只。感染72小时后，收集小鼠肝脏和脾脏，并在含0.5% NP40的无菌PBS中匀浆。将匀浆液进行系列稀释，并涂布于BHI琼脂平板上。平板于37℃培养24小时，并测定各器官的总菌落形成单位数。采用Mann-Whitney U检验分析结果。在体内免疫研究中，将LLO（91-99）单独或与佐剂联合注射给小鼠，或使用表达表位的减毒沙门氏菌载体进行递送。免疫通常通过皮下、腹腔或口服途径进行。末次免疫接种后2周，采用肽刺激脾细胞，通过IFN-γ ELISPOT试验测定表位特异性CD8+ T细胞的数量。感染后，通过检测脾脏和肝脏中的细菌载量来评估对李斯特菌攻击的保护效果。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
现有文献尚未充分阐明LLO (91-99)的药代动力学特性。作为一种肽类药物，预计其口服生物利用度有限，且易被生物体液中的蛋白酶快速降解。该肽类药物通常用于研究，而非开发为治疗药物。其在溶液中的稳定性鲜有报道。该化合物以冻干粉末的形式储存于-20℃或-80℃以进行长期保存。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
LLO (91-99) 是一种仅供实验室使用的研究肽，尚未获准用于人体治疗。作为一种外毒素和李斯特菌溶血素的 I 类 MHC 限制性 T 细胞表位，它能诱导 CTL 反应并有效清除感染细胞中的李斯特菌。该肽可用于李斯特菌感染的研究。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。
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| 参考文献 |
[1]. N K Verma, et al. Delivery of class I and class II MHC-restricted T-cell epitopes of listeriolysin of Listeria monocytogenes by attenuated Salmonella. Vaccine. 1995 Feb;13(2):142-50.
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| 其他信息 |
LLO (91-99) 是一种合成肽，对应于李斯特菌溶血素 O 的第 91-99 位氨基酸，分子式为 C47H67N11O17，分子量为 1058.10。它是一种 I 类 MHC 限制性 T 细胞表位，可诱导 CTL 反应并清除感染细胞中的李斯特菌。该肽可用于 ELISPOT、ICS、细胞毒性或增殖试验等 T 细胞检测。它仅供研究使用，尚未获准用于临床应用。
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| 分子式 |
C47H67N11O17
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|---|---|
| 分子量 |
1058.09839177132
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| 精确质量 |
1057.471
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| CAS号 |
137856-41-8
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| PubChem CID |
25103379
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| 序列 |
Gly-Tyr-Lys-Asp-Gly-Asn-Glu-Tyr-Ile
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| 短序列 |
GYKDGNEYI
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
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| LogP |
-7.5
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| tPSA |
480Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
16
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| 氢键受体(HBA)数目 |
19
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| 可旋转键数目(RBC) |
34
|
| 重原子数目 |
75
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| 分子复杂度/Complexity |
1980
|
| 定义原子立体中心数目 |
8
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| SMILES |
CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)CN
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| InChi Key |
YDTMLXJRXDDANX-YTJLKFQJSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C47H67N11O17/c1-3-24(2)40(47(74)75)58-46(73)32(19-26-9-13-28(60)14-10-26)56-43(70)30(15-16-38(64)65)55-45(72)33(20-35(50)61)53-37(63)23-51-41(68)34(21-39(66)67)57-42(69)29(6-4-5-17-48)54-44(71)31(52-36(62)22-49)18-25-7-11-27(59)12-8-25/h7-14,24,29-34,40,59-60H,3-6,15-23,48-49H2,1-2H3,(H2,50,61)(H,51,68)(H,52,62)(H,53,63)(H,54,71)(H,55,72)(H,56,70)(H,57,69)(H,58,73)(H,64,65)(H,66,67)(H,74,75)/t24-,29-,30-,31-,32-,33-,34-,40-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoic acid ;
glycyl-L-tyrosyl-L-lysyl-L-alpha-aspartyl-glycyl-L-asparagyl-L-alpha-glutamyl-L-tyrosyl-L-isoleucine
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| 别名 |
LLO (91-99); 137856-41-8; AKOS-040756703; MS-31906; AKOS040756703; MS31906
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 100 mg/mL (94.51 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9451 mL | 4.7255 mL | 9.4509 mL | |
| 5 mM | 0.1890 mL | 0.9451 mL | 1.8902 mL | |
| 10 mM | 0.0945 mL | 0.4725 mL | 0.9451 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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