Broad-spectrum antiviral

严重急性呼吸综合征冠状病毒2的RNA依赖性RNA聚合酶是当前治疗2019冠状病毒病药物开发工作的重要靶点。莫努匹拉韦是一种广谱抗病毒药物，是核苷类似物β-D-N4-羟基胞苷（NHC）的口服生物可利用前药。Molnupiravir或NHC可以增加复制冠状病毒的G到A和C到U过渡突变。突变频率的增加可能与抗病毒作用的增加有关；然而，莫努匹拉韦诱导突变的生化数据尚未报道。在这里，我们研究了活性化合物NHC5'-三磷酸（NHC-TP）对纯化的严重急性呼吸综合征冠状病毒2 RNA依赖性RNA聚合酶复合物的作用。天然核苷酸的掺入效率高于NHC-TP掺入模型RNA底物的效率，其顺序为GTP（12841）>ATP（424）>UTP（171）>CTP（30），表明NHC-TP主要与CTP竞争掺入。由于在RNA引物链中掺入一磷酸，没有观察到对RNA合成的显著抑制。当嵌入模板链中时，一磷酸NHC以相似的效率支持NHC:G和NHC:A碱基对的形成。NHC:G产物的延伸受到适度抑制，但较高的核苷酸浓度可以克服这种阻碍。相反，NHC:A碱基对导致观察到的G到A（G:NHC:A）或C到U（C:G:NHC:A:U）突变。总之，这些生物化学数据支持莫努匹拉韦的作用机制，该机制主要基于通过模板链介导的RNA诱变[3]。

Molnupiravir 具有很强的抗病毒特性，可以阻止 SARS-CoV 的增殖和疾病 [1]。每 12 小时口服一次，持续三天，剂量为 50-500 mg/kg。每天口服两次莫努匹拉韦 (molnupiravir) (7 mg/kg)，持续 3.5 天，可显着减少发烧持续时间和病毒载量 [2]。

NTP掺入和包埋引物或模板的NHC-MP对病毒RNA合成的影响[3] 根据我们的报告，通过严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型RdRp掺入NTP，并进行数据采集和定量。单核苷酸和多核苷酸掺入测定的酶浓度分别为100或200 nM。RNA合成孵育时间为10分钟。使用来自单核苷酸掺入测定的数据来确定天然核苷酸相对于NHC-TP的偏好。选择性值计算为天然核苷酸与核苷酸类似物的结合效率之比。核苷酸掺入的效率由Michaelis–Menten常数Vmax与Km的比值决定。核苷酸掺入底物是通过将[α-32P]NTP掺入4-nt引物而产生的5-nt引物。5-nt引物的形成在给定的时间点是最大的；然而，它的确切浓度是未知的。因此，通过量化对应于6-nt引物产物的信号并将其除以反应中的总信号（5-nt引物和6-nt引物）来测量反应中产生的产物。这定义了产品分数。产物分数通常乘以总底物浓度，以确定Vmax的摩尔单位，这在这里是不可能的，如上所述。因此，Vmax的单位被报告为随时间变化的乘积分数。选择性值是无单位的，因为它是具有相同单位的两个Vmax/Km测量的比率。如我们所述，制备了具有嵌入NHC-MP的RNA模板。图S1中解释了与NHC相关的方案修改。

Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞（ATCC CCL-34）在补充有7.5%胎牛血清（FBS）的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）中于37°C和5%CO2下生长。来自30岁健康女性供体的正常原代人支气管气管上皮细胞（HBTECs）在支气管生命细胞培养基中生长。这些细胞由供应商在知情同意的情况下获得，并符合赫尔辛基宣言、《人体组织法》（英国）、CFR第21篇和HIPAA法规。所有监管审批均由供应商负责。本研究中使用的永生细胞系定期检查微生物污染（间隔约6个月）。2017年7月25日，LifeLine Cell Technology对HBTEC进行了微生物污染测试。本研究仅使用了通道编号为1-4的重型作战电子计算机[2]。

动物/疾病模型： C57BL/6 小鼠（鼻内感染 SARS-CoV）[1]
剂量： 50、150、500 mg/kg
给药途径： 口服；每 12 小时一次，持续 3 天
实验结果： 体重减轻显著减少或得到控制。

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动物/疾病模型： Ca/09 感染的雌性雪貂[1]
剂量： 7 mg/kg
给药途径： 口服；每日两次，持续 3.5 天
实验结果： 病毒载量和发热持续时间显著减少。

吸收、分布和排泄
每12小时口服800毫克莫努匹拉韦后，活性化合物（N4-羟基胞苷）的血药浓度峰值（Cmax）为2970 ng/mL，达峰时间（Tmax）为1.5小时，AUC0-12h为8360 hng/mL。
口服莫努匹拉韦剂量的≤3%以活性代谢物N4-羟基胞苷的形式经尿液排出。

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代谢/代谢物
莫努匹拉韦水解为[N4-羟基胞苷]，后者分布于组织中。进入细胞后，N4-羟基胞苷被磷酸化为5'-三磷酸形式。

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生物半衰期
活性代谢物N4-羟基胞苷的半衰期为3.3小时。

肝毒性
在注册前临床试验中，血清转氨酶升高并不常见且程度较轻，莫努匹拉韦组的发生率并不高于安慰剂组。此外，在上市前研究中，超过900名患者接受了莫努匹拉韦（每日两次，每次800毫克）治疗5天，未报告任何临床上明显的肝损伤事件。然而，令人困惑的是，血清转氨酶升高在有症状的SARS-CoV-2感染期间很常见，高达70%的患者会出现这种情况，并且在重症患者以及具有COVID-19重症已知风险因素（例如男性、高龄、高体重指数和糖尿病）的患者中更为常见。因此，尚未证实莫努匹拉韦会导致肝损伤，但其临床应用经验总体有限。
可能性评分：E（不太可能引起临床上明显的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用莫努匹拉韦的信息。治疗期间以及服用莫努匹拉韦末次给药后4天内不建议进行母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◈ 什么是莫努匹拉韦？
莫努匹拉韦是一种抗病毒药物，已获得美国食品药品监督管理局 (FDA) 的紧急使用授权，用于治疗某些患者的轻度至中度 COVID-19。莫努匹拉韦必须在出现 COVID-19 症状后 5 天内开始服用才能有效。莫努匹拉韦的商品名为 Lagevrio®。FDA 的莫努匹拉韦紧急使用指南建议，除非没有其他治疗方案且治疗确有必要，否则孕妇不应使用此药。这是因为目前关于莫努匹拉韦（molnupiravir）使用的信息不足，无法确定它是否以及如何影响妊娠。然而，使用莫努匹拉韦的益处可能大于潜在风险。您的医疗保健提供者可以与您讨论使用莫努匹拉韦以及最适合您的治疗方案。有关 COVID-19 的更多信息，请参阅 MotherToBaby 的情况说明书：https://mothertobaby.org/fact-sheets/covid-19/。
◈ 我正在服用莫努匹拉韦，但我想在服用后怀孕。这种药物会在我体内停留多久？
每个人清除药物的速度都不同。对于非妊娠成年人，平均而言，大部分莫努匹拉韦会在 1 天内从体内清除。美国食品药品监督管理局 (FDA) 的紧急使用指南建议，女性在服用莫努匹拉韦期间以及末次服药后 4 天内应避免尝试怀孕。
◈ 我正在服用莫努匹拉韦。它会影响我怀孕吗？
目前尚不清楚莫努匹拉韦是否会影响怀孕。FDA 的紧急使用指南建议，有生育能力的女性在服用莫努匹拉韦期间以及末次服药后 4 天内应正确且持续地使用有效的避孕措施。
◈ 服用莫努匹拉韦会增加流产的风险吗？
流产很常见，任何妊娠都可能因多种原因发生。目前尚无人体研究证实莫努匹拉韦会增加流产的风险。
◈ 服用莫努匹拉韦会增加胎儿出生缺陷的风险吗？
每次妊娠都有 3-5% 的胎儿出生缺陷风险。这被称为背景风险。尚未进行人体研究以确定莫努匹拉韦是否会增加出生缺陷的风险（高于背景风险）。
◈ 孕期服用莫努匹拉韦是否会增加其他妊娠相关问题的风险？
尚未进行人体研究以确定莫努匹拉韦是否会增加妊娠相关问题的风险，例如早产（妊娠37周前分娩）或低出生体重（出生时体重低于5磅8盎司[2500克]）。孕期感染新冠病毒会增加早产、死产和其他妊娠并发症的风险。
◈ 孕期服用莫努匹拉韦是否会影响孩子未来的行为或学习能力？
目前尚无研究证实莫努匹拉韦是否会导致孩子出现行为或学习问题。
◈ 服用莫努匹拉韦期间哺乳：
美国食品药品监督管理局 (FDA) 发布的莫努匹拉韦紧急使用指南建议，哺乳期妇女除非别无其他治疗方案且治疗确有必要，否则不应使用此药。但服用莫努匹拉韦的益处以及母乳喂养的益处可能大于潜在风险。哺乳期妇女可在服用莫努匹拉韦期间以及末次服药后 4 天内考虑吸出并丢弃母乳。您的医护人员可以与您讨论莫努匹拉韦的使用方法以及最适合您的治疗方案。请务必就所有关于母乳喂养的问题咨询您的医疗保健提供者。
◈ 如果男性服用莫努匹拉韦，是否会影响生育能力或增加出生缺陷的风险？
目前尚无研究评估莫努匹拉韦是否会影响男性生育能力（使伴侣怀孕的能力）或增加出生缺陷的风险（高于背景风险）。美国食品药品监督管理局 (FDA) 的紧急使用指南建议，男性在治疗期间以及最后一次服用莫努匹拉韦后至少 3 个月内，应正确且持续地使用可靠的避孕方法。一般来说，父亲或精子捐赠者的接触不太可能增加怀孕风险。如需了解更多信息，请参阅 MotherToBaby 的“父亲暴露”情况说明书，网址为 https://mothertobaby.org/fact-sheets/paternal-exposures-pregnancy/。

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蛋白质结合
莫努匹拉韦及其活性代谢物 N4-羟基胞苷在血浆中不与蛋白质结合。

[1]. Sheahan TP, et al. An orally bioavailable broad-spectrum antiviral inhibits SARS-CoV-2 in human airway epithelial cell cultures and multiple coronaviruses in mice. Sci Transl Med. 2020 Apr 6. pii: eabb5883.
[2]. Toots M, et al. Characterization of orally efficacious influenza drug with high resistance barrier in ferrets and human airway epithelia. Sci Transl Med. 2019 Oct 23;11(515). pii: eaax5866.
[3]. Molnupiravir promotes SARS-CoV-2 mutagenesis via the RNA template. Biol Chem. 2021 Jul; 297(1): 100770.

莫努匹拉韦是一种核苷类似物，是N(4)-羟基胞苷的衍生物，其中5'-羟基被(2-甲基丙酰基)氧基取代。它是活性抗病毒核糖核苷类似物N(4)-羟基胞苷(EIDD-1931)的前药，对多种RNA病毒具有活性，包括SARS-CoV-2、MERS-CoV以及季节性和大流行性流感病毒。目前，它正处于治疗COVID-19患者的III期临床试验阶段。它既可作为前药，也可作为抗冠状病毒药物和抗病毒药物。它是一种核苷类似物、异丙酯和酮肟。其功能与N(4)-羟基胞苷相关。
莫努匹拉韦(EIDD-2801，MK-4482)是[N4-羟基胞苷]的异丙酯前药。在非人灵长类动物中，莫努匹拉韦的口服生物利用度有所提高，它在体内水解后分布到组织中，并转化为活性5'-三磷酸酯形式。这种活性药物可整合到RNA病毒的基因组中，导致病毒突变积累，即所谓的病毒错误灾难。近期研究表明，莫努匹拉韦可抑制小鼠和人呼吸道上皮细胞中人冠状病毒和蝙蝠冠状病毒（包括SARS-CoV-2）的复制。此外，一种对瑞德西韦耐药的小鼠肝炎病毒突变株也显示出对N4-羟基胞苷的敏感性增加。2021年11月4日，英国药品和健康产品监管局（MHRA）批准莫努匹拉韦用于预防成人COVID-19引起的严重后果，例如住院和死亡。2021年12月23日，美国食品药品监督管理局（FDA）也授予莫努匹拉韦紧急使用授权。然而，它尚未获得完全批准。
莫努匹拉韦是一种核糖核苷类似物和抗病毒药物，用于治疗严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒2（CoV-2）感染，即2019新型冠状病毒病（COVID-19）的病原体。莫努匹拉韦疗法在SARS-CoV-2感染早期口服，疗程5天，尚未发现与血清转氨酶升高或临床上明显的肝损伤相关。
莫努匹拉韦是EIDD-1931的口服生物利用度较高的前药，EIDD-1931是一种合成核糖核苷衍生物N4-羟基胞苷和核糖核苷类似物，具有针对多种RNA病毒的潜在抗病毒活性。口服后，作为前药的莫努匹拉韦会代谢为其活性形式EIDD-1931，并转化为其三磷酸（TP）形式。 EIDD-1931 的 TP 形式可掺入 RNA 中，抑制病毒 RNA 依赖性 RNA 聚合酶的活性。这会导致 RNA 转录终止，从而降低病毒 RNA 的产生和复制。

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药物适应症
[N4-羟基胞苷] 及其前药莫努匹拉韦正在研究其对多种病毒感染的活性，包括流感、中东呼吸综合征冠状病毒 (MERS-CoV) 和 SARS-CoV-2。莫努匹拉韦已在英国获批用于降低轻度至中度 COVID-19 患者的住院和死亡风险，尤其适用于重症风险较高的患者（例如，肥胖、糖尿病、心脏病患者或 60 岁以上患者）。在美国，莫努匹拉韦已获准紧急用于治疗轻度至中度 COVID-19 的高危成人患者。
预防 2019 冠状病毒病 (COVID-19)
治疗 2019 冠状病毒病 (COVID-19)

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作用机制
莫努匹拉韦在体内水解为 N4-羟基胞苷，后者在组织中磷酸化为活性 5'-三磷酸形式，并整合到新病毒颗粒的基因组中，导致失活突变的积累，即病毒错误灾难。一种对瑞德西韦耐药的突变小鼠肝炎病毒也显示出对 N4-羟基胞苷的敏感性增加。

C13H19N3O7

329.3059

329.12

C, 47.42; H, 5.82; N, 12.76; O, 34.01

2492423-29-5

Molnupiravir-d7

145996610

White to off-white solid powder

-0.8

141Ų

4

7

6

23

534

4

O1[C@]([H])([C@@]([H])([C@@]([H])([C@@]1([H])C([H])([H])OC(C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)O[H])O[H])N1C(N=C(C([H])=C1[H])N([H])O[H])=O

O[C@@H]([C@H]([C@H](N1C(N/C(C=C1)=N/O)=O)O2)O)[C@H]2COC(C(C)C)=O

HTNPEHXGEKVIHG-QCNRFFRDSA-N

InChI=1S/C13H19N3O7/c1-6(2)12(19)22-5-7-9(17)10(18)11(23-7)16-4-3-8(15-21)14-13(16)20/h3-4,6-7,9-11,17-18,21H,5H2,1-2H3,(H,14,15,20)/t7-,9-,10-,11-/m1/s1

MK 4482; EIDD-2801; EIDD 2801; Molnupiravir; MK-4482; MK4482; EIDD2801; prodrug-EIDD-1931; prodrug-EIDD 1931; prodrug-EIDD1931.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 50 mg/mL (151.83 mM)

配方 1 中的溶解度: 12.05 mg/mL (36.59 mM) in 10% PEG400 2.5% Ethoxylated hydrogenated castor oil 87.5% water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，您可以将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。