Tetrac (Tetraiodothyroacetic acid; 3,3',5,5'-Tetraiodothyroacetic acid)   中文名称: 四碘甲状腺乙酸

Thyrointegrin receptor
Tetrac primarily targets the integrin αvβ3, specifically the thyroid hormone receptor site on this integrin. By binding to this receptor, it antagonizes the actions of T4 and T3. This interaction is distinct from the classical nuclear thyroid hormone receptors. The compound's ability to inhibit angiogenesis and tumor growth is mediated through this cell surface receptor, making it a potential therapeutic agent for cancer.

在K-RAS状态不同的HT-29和HCT116细胞中，Tetrac（0.01-1 μM；2-6天）可抑制细胞增殖[3]。在HT-29和HCT116细胞中，Tetrac（0.1 μM；30分钟）可抑制ERK1/2的激活[3]。Tetrac（0.1 μM；24小时）可促进THBS1和CASP2的表达，同时抑制CCND1和c-Myc的表达[3]。天然存在的T4类似物Tetrac除了具有不依赖于激动剂的抗血管生成作用外，还能阻断甲状腺激素在整合素受体上的促血管生成作用。 Tetrac通过降低血管生长因子/生长因子受体、缺氧诱导因子-1α、促血管生成细胞因子以及其他多种促血管生成基因的转录，从而减少内皮细胞的增殖、迁移和管状结构形成，同时刺激内源性血管生成抑制因子的表达。此外，它还通过破坏整合素αvβ3与邻近生长因子受体之间的相互作用来调节血管生长因子的活性。Tetrac还能干扰甲状腺激素刺激的肿瘤细胞募集、分化以及肿瘤基质相关间充质干细胞的促血管生成信号传导。Tetrac通过多种机制影响肿瘤相关血管生成，并干扰其他癌细胞存活通路。由于其低毒性和高组织选择性，四氢吡啶（Tetrac）是一种很有前景的临床应用候选药物。[1]

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四氢吡啶和NDAT均能与结直肠癌细胞表面整合素αvβ3结合。四氢吡啶和NDAT均能抑制不同K-RAS状态的结直肠癌细胞增殖。NDAT和四氢吡啶还能调节结直肠癌细胞中不同基因的表达。[3]
我们利用灌注式波纹管细胞培养系统，研究了四氢吡啶和NDAT在结直肠癌细胞中的可能作用机制。该系统能够高效、大规模地筛选药物对肿瘤细胞的作用机制。尽管K-RAS野生型结直肠癌HT-29细胞中整合素αvβ3的表达远低于K-RAS突变型HCT116细胞，但HT-29细胞对四氢吡啶和NDAT均更为敏感。结果还表明，Tetrac 和 NDAT 均能与肿瘤细胞表面整合素 αvβ3 结合，且这两种药物在结直肠癌细胞中可能具有不同的抗增殖机制。K-RAS 状态似乎在使用该联合药物治疗时可能遇到的耐药性中起着重要作用。[3]
体外实验表明，Tetrac 作为整合素 αvβ3 甲状腺激素受体的拮抗剂发挥作用。它能阻断 T4 和 T3 的作用，从而调节参与血管生成和细胞增殖的信号通路。研究表明，Tetrac 可在多种癌症模型中抑制肿瘤细胞增殖和血管生成。其活性归因于其干扰甲状腺激素非基因组作用的能力。

Tetrac（35 μg；口服，持续 40 天）可抑制小鼠肿瘤的生长、接种和整合素的表达[4]。
Tetrac 延缓白化小鼠眼部黑色素瘤的发生[4]
由于 B16F10 细胞高表达该特定整合素（补充图 S1A–D），因此可作为体内研究甲状腺激素-αvβ3 轴的有效平台。相比之下，B16LS9 细胞表达低水平的 αvβ3（补充图 S1E–H）。我们最近在 B16F10 眼部黑色素瘤模型中证实，甲状腺功能减退可提高接种 B16F10 细胞的小鼠的存活率，而甲状腺功能亢进则会导致小鼠存活时间缩短。我们意外地发现，当将黑色素瘤细胞眼内接种到白化小鼠体内时，小鼠不会发生转移，并且存活时间延长。基于此，我们利用这些模型研究了甲状腺激素-αvβ3抑制剂在延缓眼部黑色素瘤发生方面的潜力。Tetrac 就是这样一种抑制剂，在大量的体外和体内研究中均已被证实能够抑制甲状腺激素与αvβ3整合素的结合，因此我们选择该药物进行后续研究。
如前所述，我们采用经结膜途径，将10²个B16F10或B16LS9细胞/1 μL PBS的等分试样（接种当天或第0天）接种到BALB/c小鼠右眼的视网膜下腔。肿瘤接种后未出现细胞反流，结膜下腔内也未发现肿瘤细胞。同一天，将每种实验性肿瘤模型的小鼠分为两组：一组饮用自来水（对照组），另一组饮用含Tetrac的水。每日监测小鼠，并记录眼内肿瘤生长的最初迹象。实验设计，包括各组小鼠数量，如图4所示。对小鼠进行37-40天的随访，记录肿瘤的发生情况。
在实验开始90天后处死小鼠，摘除眼球，并进行病理学和免疫组织化学处理，包括S100（黑色素瘤标志物）分析和αvβ3表达检测。结果表明，在B16F10（图6A）和B16LS9（图6B）细胞模型中，眼内肿瘤的S100免疫染色均为阳性，证实了黑色素瘤细胞的存在。与流式细胞术结果一致，B16F10细胞（图6A）而非B16LS9细胞（图6B）可被抗整合素抗体免疫染色呈阳性。最后，在B16F10小鼠模型中，Tetrac处理显著降低了S-100和整合素的染色水平，表明其对肿瘤接种、生长和整合素表达具有抑制作用。

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将化合物以10 µg/10 µL的浓度加入到含有鼠血管生长因子的200 µL Matrigel基质胶中，并皮下注射到小鼠体内。对照组仅注射200 µL Matrigel基质胶+10 µL载体/植入物。每只小鼠皮下植入4个植入物（动物背部右侧2个，左侧2个）。在4℃下呈液态的Matrigel在37℃下固化成固体基质，用于在14天内持续释放化合物。Matrigel植入后第14天，处死所有动物，并根据Drabkin法²⁷，通过分光光度法测定Matrigel塞中血红蛋白的浓度来量化血管形成情况。简而言之，将Matrigel塞置于含有双蒸水的0.5 mL离心管中，均质化5-10分钟。将样品以1700×g离心10分钟，收集上清液。取50 μL上清液与50 μL Drabkin试剂混合，室温静置15-30分钟，然后将其转移至96孔板中，使用酶标仪在540 nm处测定吸光度。血红蛋白浓度以mg/dL表示，并根据标准曲线进行比对。如图2所示，在Matrigel胶塞实验中，Tetrac及其5种衍生物显著抑制血管生成，结果以均值±标准误(SEM)或±标准差(SD)表示，具体见图例。使用SigmaPlot 10.0软件，采用ANOVA和学生t检验对对照组和实验组进行比较和统计分析。当P < 0.01时，认为对照组和实验组终点之间的差异具有统计学意义。Tetrac类似物也以与Tetrac相似的方式阻断FGF诱导的血管生成。对Tetrac两侧或两侧进行任何修饰均未显著影响母体化合物的拮抗作用。化合物10a的抗血管生成活性可能与其结构中炔烃官能团的存在有关，我们将在后续的构效关系研究中对其进行修饰。此外，化合物 10d 和 10e 的抗血管生成活性也十分引人注目，因为它们的结构中含有邻苯二甲酰亚胺部分，这使得它们与沙利度胺（图 3）相似。沙利度胺是一种已知的抗血管生成抑制剂，能够抑制兔角膜中由碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) 等血管生成细胞因子诱导的血管生成，以及小鼠角膜中由血管内皮生长因子 (VEGF) 诱导的血管生成。[5]
体内研究表明，大鼠体内的 Tetrac 可能调节促甲状腺激素 (TSH) 的分泌。此外，动物模型也显示其具有抗血管生成和抗肿瘤活性。该化合物对肿瘤生长和血管生成的影响可能是通过与整合素 αvβ3 相互作用并随后抑制下游信号通路而实现的。需要进一步的研究来全面表征其体内疗效。

Tetrac的体外受体结合试验通常涉及研究其与整合素αvβ3的相互作用。结合亲和力可通过表面等离子共振（SPR）或放射性配体结合试验进行测定。该化合物与T4或T3竞争结合受体的能力也需进行评估。这些试验有助于证实其作为甲状腺整合素受体拮抗剂的作用机制。

细胞增殖测定[3]
细胞类型： HT-29 和 HCT116 细胞
测试浓度： 0.01、0.1、1 μM
孵育时间： 0、2、4、6 天
实验结果： 诱导 K-RAS 野生型结直肠癌细胞的抗增殖。

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蛋白质印迹分析[3]
细胞类型： HT-29 和 HCT116 细胞
测试浓度： 0.1 μM
孵育时间： 30 分钟
实验结果： 抑制组成型激活的 ERK1/2，且该抑制作用可被抗整合素 αvβ3 抗体预处理消除。

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在成熟的灌注波纹管细胞培养系统中，确定了 Tetrac 和 NDAT 的抗增殖作用。首先，将 5 × 10⁷ 个细胞接种于灌注波纹管细胞培养系统中，并在 37°C 下孵育过夜。然后收集聚合物薄片，用胰蛋白酶消化，收集细胞并计数。附着于薄片上的原始细胞数为 0.5 × 10⁷ 个细胞/瓶。细胞培养物用含 1% 脱脂胎牛血清 (FBS) 的培养基进行更换。在培养基瓶中加入 Tetrac 或 NDAT，使其最终浓度如结果部分所示。Tetrac 和 NDAT 的具体浓度是根据生理浓度 T4 (10⁻⁷ M) 选择的，如前所述。然后按指示处理含细胞的薄片样品，并在指定时间点收集细胞，用胰蛋白酶消化后进行计数。细胞培养物用含 10% 脱脂胎牛血清 (FBS) 的培养基进行更换。[3] 使用表达整合素 αvβ3 的各种癌细胞系进行 Tetrac 的细胞活性测定。用 Tetrac 处理细胞，并评估其对细胞增殖、迁移和血管生成的影响。同时评估该化合物抑制 T4 或 T3 诱导信号传导的能力。常用的标准检测方法包括 MTT 检测、伤口愈合检测和管状结构形成检测。

动物/疾病模型： 将8周龄的野生型雄性Balb/C小鼠接种102B16F10或B16LS9细胞[4]
剂量： 每日35 μg
给药途径： 每日口服（加入饮用水中），持续40天
实验结果： 延缓眼部黑色素瘤的发生。降低B16F10小鼠模型中S-100和整合素的染色水平。

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实验分组和肿瘤细胞接种[4]
为了优化C57Bl/6小鼠的模型，首先将5 × 105个B16F10细胞的等分试样接种到每只小鼠右眼的视网膜下腔（即脉络膜）（n = 8只小鼠）。接下来，将相同细胞以递减浓度（10⁴、10³ 和 10² 个细胞，共 15 只小鼠，每个浓度 n = 5）接种到小鼠眼内。为了评估 Balb/C 白化小鼠模型，采用先前描述的经结膜方法，将 10² 个 B16F10 或 B16LS9 细胞/1 μL PBS 的等分试样接种到每只小鼠右眼的视网膜下腔（每种细胞类型 n = 5），使接种的细胞留在眼内。小鼠用氯胺酮和赛拉嗪的混合物（120 mg/kg 氯胺酮，10 mg/kg 赛拉嗪）麻醉，并用一滴奥昔布卡因使实验眼脱敏。在解剖显微镜下，将一根30号针头穿过结膜和巩膜，插入角膜缘后方约1 mm处的视网膜下腔。然后，将装有32号钝头针头的10 μL玻璃注射器的针尖经针道引入视网膜下腔，并将1 μL肿瘤细胞悬液注射到动物眼内。在针尖进入眼内之前未进行细胞接种，未发生肿瘤细胞回流，且结膜下腔内未检测到肿瘤细胞。在最终的干预性研究中，将1 μL PBS稀释的102B16F10或B16LS9细胞悬液接种到每只Balb/C白化小鼠右眼的视网膜下腔内。在每个实验模型中，小鼠每天饮用含35 μg Tetrac的水（B16F10模型组n=16只，B16LS9模型组n=16只），而对照组小鼠仅饮用溶于水的聚乙二醇（B16F10模型组n=15只，B16LS9模型组n=13只）。每日更换饮用水。
Tetrac溶解于0.04 N KOH 4%丙二醇(PG)溶液中，浓度为1 mg/mL。

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为了研究构效关系，测试了化合物10a-10e抑制血管生成的能力，并与Tetrac进行比较。本研究采用体内实验方法测定了血管生成抑制情况。该方法将测试的血管生成诱导剂和抑制剂暴露于冷液态Matrigel®基质中。Matrigel®基质是一种由多种蛋白质混合而成的基质，皮下注射到小鼠体内后会凝固，从而促进新血管的形成。实验选用5-6周龄、体重20克的雌性C57/B6小鼠，饲养于特定病原体清除（SPF）条件下，每笼4只，饲养环境温度控制在20-24℃，湿度控制在60-70%，并保持12小时光照/12小时黑暗循环。小鼠可自由摄取水和食物。实验开始前，小鼠适应环境5天。小鼠被分为7组（每组3只）：对照组、Tetrac组和5种Tetrac衍生物组。
Tetrac的体内动物实验采用癌症小鼠模型进行。
研究人员用 Tetrac 治疗荷瘤小鼠，并监测肿瘤生长、血管生成和转移情况。此外，还评估了该化合物对甲状腺激素信号传导的影响及其安全性。这些研究为 Tetrac 作为抗癌药物的潜力提供了临床前证据。

Tetrac的药代动力学(PK)特性已得到一定程度的研究。它是T4的衍生物，已知比T4更稳定。体内研究表明，Tetrac可以调节TSH的分泌，表明其具有全身暴露作用。其分布、代谢和排泄特征可能与甲状腺激素相似，但仍需进一步研究。

Tetrac的毒性数据来自临床前研究。作为一种甲状腺激素类似物，它可能对甲状腺功能产生影响。然而，其作用于整合素受体的机制表明其具有独特的安全性。已开展全面的毒理学评估，以支持其作为治疗药物的开发。该化合物目前尚未获准用于临床。

[1]. Tetrac as an anti-angiogenic agent in cancer. Endocr Relat Cancer. 2019 Jun 1; 26(6):R287-R304.

[2]. Nongenomic Actions of Thyroid Hormone: the Integrin Component. Physiol Rev. 2020 Jun 25.

[3]. Tetrac and NDAT Induce Anti-proliferation via Integrin αvβ3 in Colorectal Cancers With Different K-RAS Status. Front Endocrinol (Lausanne). 2019 Mar 12; 10:130.

[4]. Tetrac Delayed the Onset of Ocular Melanoma in an Orthotopic Mouse Model. Front Endocrinol (Lausanne). 2019 Jan 8; 9:775.

[5]. Synthesis of new analogs of tetraiodothyroacetic acid (tetrac) as novel angiogenesis inhibitors for treatment of cancer. Bioorg Med Chem Lett. 2018 Apr 15;28(7):1223-1227.

3,3',5,5'-四碘甲状腺乙酸 (TETA) 是一种单羧酸，这意味着甲状腺乙酸在 3、3'、5 和 5' 位上分别连接有四个碘取代基。它是一种甲状腺激素、人体代谢产物和细胞凋亡诱导剂。它是一种碘酚、2-卤代苯酚、单羧酸和芳香醚。甲状腺激素 T3 和 T4 已被证实是促血管生成激素，在癌症治疗中发挥着重要作用。内源性循环激素水平可能促进癌症进展并限制抗癌疗法的疗效，但临床数据尚不明确。甲状腺激素调节血管生成的能力是通过一种源自细胞表面受体整合素 αvβ3 的非经典机制介导的。这种整合素主要表达于肿瘤细胞、增殖的内皮细胞和肿瘤基质相关细胞中，凸显了其在血管生成和肿瘤生物学中的潜在重要性。甲状腺激素/整合素αvβ3信号通路激活通常与血管生成相关的细胞内通路，这些通路由经典的促血管生成分子（例如血管内皮生长因子（VEGF））介导。除了其不依赖于激动剂的抗血管生成作用外，天然存在的T4类似物四氢吡啶（Tetrac）还可以阻断甲状腺激素对整合素受体的促血管生成作用。四氢吡啶通过减少血管生成因子/生长因子受体、缺氧诱导因子-1α、促血管生成细胞因子和许多其他促血管生成基因的转录，同时刺激内源性血管生成抑制因子的表达，从而减少内皮细胞的增殖、迁移和管状结构形成。四氢吡啶通过破坏整合素αvβ3与邻近生长因子受体之间的相互作用，进一步调节血管生成因子的活性。此外，四氢吡啶还能干扰甲状腺激素刺激的肿瘤募集、分化以及肿瘤基质相关间充质干细胞的促血管生成信号转导。四氢吡啶通过多种机制影响肿瘤相关血管生成，并干扰其他癌细胞存活通路。结合其低毒性和高组织选择性，四氢吡啶是一种有前景的临床应用候选药物。[1]

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质膜整合素αvβ3的胞外结构域包含一个甲状腺激素类似物的细胞表面受体。该受体在肿瘤细胞和快速分裂的内皮细胞中高表达并被激活。其主要配体是左甲状腺素（T4），通常被认为是3,5,3'-三碘左甲状腺素（T3）的前体激素。 T3 是一种激素类似物，它通过核受体在细胞核内表达甲状腺激素，该过程不依赖于整合素 αvβ3 的结构。T4 与甲状腺激素整合素受体结合后，调节癌细胞和内皮细胞的分裂、肿瘤细胞防御通路（例如抗凋亡）和血管生成，并促进肿瘤转移、放射抗性和化疗抗性。其分子机制涉及通过丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇 3-激酶进行信号转导、与这些细胞过程相关的多个基因的差异表达，以及调节其他细胞表面蛋白（例如血管生成因子受体）的活性。四碘甲状腺乙酸 (Tetrac) 是 T4 的衍生物，可与整合素竞争性结合。在缺乏 T4 的情况下，四碘甲状腺乙酸 (Tetrac) 及其化学修饰衍生物也表现出抗癌活性，最终导致基因转录的改变。未修饰和化学修饰的Tetrac均能抑制异种移植瘤的生长。该受体对非恶性细胞（如血小板和吞噬细胞）的作用机制尚需进一步研究。甲状腺激素的整合素αvβ3受体具有多种与癌症生物学相关的细胞活性，这些活性可能受Tetrac衍生物的调控。[2]

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结直肠癌是台湾地区一个严重的医学难题。迫切需要新的有效疗法。筛选有前景的抗癌药物以及从临床前研究过渡到临床试验往往充满挑战。脱氨基甲状腺激素类似物（四碘甲状腺乙酸，Tetrac）及其纳米颗粒类似物（NDAT）已被证明在体外和多种肿瘤（包括结直肠癌）的异种移植模型中具有抗增殖活性。然而，四氢吡啶（terac）和尼达替尼（NDAT）抑制结直肠癌细胞增殖的机制尚未完全阐明。我们利用灌注式波纹细胞培养系统研究了四氢吡啶和尼达替尼在结直肠癌细胞中的作用机制。该系统能够高效、大规模地筛选药物对肿瘤细胞的作用机制。尽管K-RAS野生型结直肠癌HT-29细胞中整合素αvβ3的表达远低于K-RAS突变型HCT116细胞，但HT-29细胞对四氢吡啶和尼达替尼均更为敏感。结果还表明，四氢吡啶和尼达替尼均能与肿瘤细胞表面的整合素αvβ3结合，并且这两种药物在结直肠癌细胞中可能具有不同的抗增殖机制。 K-RAS状态似乎在使用该联合疗法时可能遇到的耐药性中起着重要作用。[3]

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眼部黑色素瘤是成人最常见的原发性眼内恶性肿瘤，但由于体内模型数量有限，其研究一直受到阻碍。我们通过一系列将黑色素瘤细胞眼内注射到小鼠眼内的实验，建立了一种眼部黑色素瘤模型。接种5 × 10⁵个B16F10细胞导致肿瘤快速生长、广泛的肺转移和动物生存期缩短，而接种10²个细胞足以诱导眼内肿瘤生长并延长动物生存期。为了提高肿瘤的可视化效果，我们将10²个黑色素瘤细胞（B16F10或B16LS9）接种到Balb/C白化小鼠的眼内。这些小鼠发生了眼内肿瘤，但没有发生转移，并且生存期延长。接下来，我们研究了甲状腺激素-αvβ3整合素信号通路抑制剂在治疗眼部黑色素瘤中的潜力。使用甲状腺激素衍生物四碘甲状腺原氨酸（Tetrac）后，与未治疗组相比，B16F10（整合素阳性）细胞组的肿瘤发展被延缓；而在B16LS9（整合素阴性）细胞组中，实验组和对照组的肿瘤发生率相似。总之，经过优化，我们建立了眼部黑色素瘤小鼠模型。该模型具有较宽的治疗窗口，可作为研究各种药物和其他治疗方法的平台。[4]

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在血管生成过程中，整合素作为细胞表面跨膜受体家族的成员，在血管生成和血管生成因子的局部释放中发挥着至关重要的作用。甲状腺激素，例如左旋甲状腺素 (T4) 和 3,5,3'-三碘甲状腺原氨酸 (T3)，可通过整合素 αvβ3 受体促进血管生成和肿瘤细胞增殖。四碘甲状腺原氨酸 (TET，T4 的脱氨衍生物) 位于整合素 αvβ3 结合口袋的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 (RGD) 识别位点或其附近，是一种甲状腺整合素受体拮抗剂，可阻断 T3 和 T4 的作用以及多种生长因子介导的血管生成。本研究通过修饰 TTE 的酚羟基合成了一系列新型 TTE 类似物，并使用小鼠 Matrigel 血管生成模型测试了它们的抗血管生成活性。药理活性结果表明，TTE 可通过多种方式进行修饰，同时保持其抗血管生成活性。总之，为了寻找新的血管生成抑制剂，我们通过修饰四碘甲状腺素的酚羟基，合成了一系列新型四碘甲状腺素类似物。我们分析了它们的构效关系，并利用小鼠Matrigel血管生成模型测试了它们的抗血管生成活性。新型血管生成抑制剂的设计和开发已被证明是多种肿瘤的治疗靶点。我们的结果表明，邻苯二甲酰亚胺修饰的四乙酰基类似物10d和10e比其他合成的类似物具有更高的抗血管生成活性，这可能是由于其结构中存在邻苯二甲酰亚胺基团，类似于沙利度胺。后续研究需要进行进一步的生物分析（LC/MS/MS），以确定邻苯二甲酰亚胺基团对四乙酰基组合体内活性的确切贡献。为了提高这些新型材料的水溶性，我们还计划将这些抗血管生成分子与PLGA基纳米颗粒偶联。[5]
Tetrac是左旋甲状腺素（T4）的脱氨类似物，可作为甲状腺整合素受体拮抗剂。它具有显著的抗血管生成和抗肿瘤活性。该化合物已被研究用于癌症治疗以及作为研究甲状腺激素信号传导的工具。目前它尚未获准用于临床，仅供研究用途。

C14H8I4O4

747.8288

747.66

67-30-1

65552

White to off-white solid powder

2.727g/cm3

544.8ºC at 760 mmHg

230 °C

283.3ºC

1.801

5.23

66.76

2

4

4

22

373

0

IC1C([H])=C(C([H])=C(C=1OC1C([H])=C(C(=C(C=1[H])I)O[H])I)I)C([H])([H])C(=O)O[H]

PPJYSSNKSXAVDB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C14H8I4O4/c15-8-4-7(5-9(16)13(8)21)22-14-10(17)1-6(2-11(14)18)3-12(19)20/h1-2,4-5,21H,3H2,(H,19,20)

2-[4-(4-hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodophenyl]acetic acid

Tetrac; 67-30-1; Tetraiodothyroacetic acid; 3,3',5,5'-TETRAIODOTHYROACETIC ACID; UNII-PA7UX1FFYQ; T4-acetic acid; 2-(4-(4-hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodophenyl)acetic acid; Benzeneacetic acid, 4-(4-hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodo-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 100 mg/mL (133.72 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.34 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。