| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MEK (IC50 = 5.7 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 A549、MDCK 细胞和人 PBMC 中，zapnometinib (0.1 nM-1 μM) 抑制 MEK，IC50 分别为 30.96 nM、357 nM 和 15 nM[1]。在人 PBMC 中，zapnometinib（100 μM；4 小时）可抑制离子霉素 (PMA/I) 引起的 ERK1/2 磷酸化 [1]。 zapnometinib (1-100 μM) 可降低 H3N2 和 IV H1N1pdm09 病毒滴度 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
Zapnometinib（8.4–75 mg/kg/天；每天口服 3 次）可降低致命 H1N1pdm09 感染后的肺部病毒滴度并提高小鼠的存活率 [1]。 Zapnometinib (150 mg/kg) 静脉内或口服给予小鼠的 AUC 值分别为 860.02 和 1953.68 μg?h/mL [1]。
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| 酶活实验 |
无细胞激酶活性测定：[1]
用单克隆抗ERK（细胞外信号调节激酶）抗体在TBST（50 mM Tris-HCl，0.9%NaCl，0.05%吐温20）中以1:1000（100μl/孔）的稀释液涂覆96孔微量滴定板过夜。用100μl/孔TBST洗涤（3×5分钟）后，在室温下用100μl/min的1%BSA PBS溶液封闭孔60分钟。在加入激酶反应样品（见下文）之前，再次洗涤板。为了确定抑制剂的IC50值，制备了最终的测试浓度（DMSO中的1μM、500 nM、100 nM、50 nM、10 nM、5 nM、1 nM、0.5 nM和0.1 nM）。活性GST c-Raf1-DD在杆状病毒感染的SF9细胞中表达，而GST-MEK1和His-ERK2在大肠杆菌中表达。通过与谷胱甘肽琼脂糖珠结合纯化GST标记的蛋白质，并在镍螯合柱上纯化His标记的ERK2。将三种纯化的重组激酶以3:2:3的比例在激酶缓冲液（10 mM MgCl2，25 mMβ-甘油磷酸，25 mM HEPES；pH 7.5，5 mM苯甲脒，0.5 mM二硫苏糖醇，1 mM钒酸钠）和DMSO/抑制剂中混合，并在室温下在黑暗中预孵育，然后加入10 mM ATP并进一步孵育30分钟。为了停止激酶反应，在50°C下加入20%SDS溶液10分钟，并用阻断缓冲液（TBST中1%BSA）进一步稀释。接下来，将100μl的每个样品加入到抗ERK涂层的96孔微量滴定板中。将激酶反应样品在室温下在用BSA封闭的抗ERK包被的96孔微量滴定板中孵育60分钟。为了检测磷酸化ERK，将样品在4°C下用抗磷酸ERK（p44/p42）抗体孵育过夜，然后用稀释在TBST缓冲液中的辣根过氧化物酶抗小鼠IgG特异性抗体在室温下孵育60 min。然后，洗涤平板并用ABTS底物溶液孵育30 min。用20%SDS溶液终止反应，然后用ELISA阅读器测量405nm处的光密度。 A549、MDCK细胞和人外周血单个核细胞中的激酶活性测定：[1] A549和MDCK II细胞在含有10%FBS、100U/mL青霉素、100µl/mL链霉素和1%l-谷氨酰胺的IMDM中培养。接下来，将4×105 A549或MDCK II细胞接种在24孔板中过夜，然后在含有0%FBS的IMDM中饥饿24小时。饥饿后，用20 ng/ml肿瘤坏死因子（TNF）刺激细胞30分钟，然后用溶解在DMSO中的不同浓度的CI-1040或Zapnometinib（PD0184264；ATR-002) 5μM至3 nM；Zapnometinib（PD0184264；ATR-002）：25μM至12 nM。为了确定CI-1040和Zapnometinib（PD0184264；ATR-002）对A549细胞的IC50值，在两倍稀释步骤中制备了12个测试浓度（CI-1040:3.07μM至1.5 nM；Zapnometinib（PD0184274；ATR-2002）:30.72μM至15 nM）。孵育时间结束后，用冰冷的PBS洗涤细胞两次，立即停止治疗。细胞在冰冷的改良RIPA缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.4；1%NP-40；0.25%脱氧胆酸钠；150 mM NaCl）中在冰上裂解，补充有完全蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物。裂解物被短暂超声处理，并在4°C下以18000×g离心5分钟。通过Ficoll密度梯度分离法从新鲜血液中分离出人外周血单核细胞（PBMCs），然后在含有10%自体血清、100 U/mL青霉素、100µg/mL链霉素和1%L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中培养。然后，将5x106的培养的PBMC接种在24孔板中，用100 ng/mL的佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯（PMA）和1µg/mL的离子霉素（I）刺激4小时。为了确定CI-1040和Zapnometinib/扎诺替尼（PD0184264；ATR-002）对人PBMC的IC50值，制备了12个两倍稀释步骤的测试浓度（CI-1040:200 nM至0.097 nM；Zapnometinib（PD0184244；ATR-2002）:780 nM至0.38 nM）。停止治疗，按照A549/MDCK细胞的描述继续手术。所有样本均留作蛋白质印迹分析。 |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： 人 PBMC 测试浓度： 100 μM 孵育时间： 4 h 实验结果：抑制离子霉素(PMA/I)增加的pERK1/2。 后代病毒抑制试验[1] 在37°C和5%CO2下，用上述IAV菌株在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中制备的相应MOI接种A549细胞，该PBS补充了0.2%（w/v）牛血清白蛋白、1 mM MgCl2、0.5 mM CaCl2、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素，持续45分钟。移除接种物，用PBS冲洗细胞，并补充1 mL IV感染培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium；DMEM补充了0.2%BSA、1 mM MgCl2、0.5 mM CaCl2、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和2μg/mL TPCK处理的胰蛋白酶，含有不同浓度的CI-1040或ATR-002（100μM、50μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM和0.1μM，DMSO终浓度为1%，在37°C、5%CO2中24小时）。 细胞活力测定（WST测定）[1] 将A549细胞、MDCK细胞和人PBMC接种在96孔平底组织板中并如第2.2节所述生长过夜。此后，用不同浓度的ATR-002（100μM、50μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM和0.1μM）处理细胞，ATR-002溶解在100μl IMDM中，IMDM补充了5%FBS，DMSO终浓度为1%（v/v）。将细胞在37°C和5%CO2中培养24小时。此后，将10μl WST-1试剂加入培养基中并孵育4小时。之后，在405 nm的ELISA平板读数器上定量形成的甲赞染料。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雌性C57BL/6小鼠（8周龄；21-24克）感染H1N1pdm09[1]
剂量：8.4、25、75毫克/公斤/天（2.8、8.4、25毫克/公斤） 给药途径：口服，每日三次 实验结果：75毫克/公斤/天或25毫克/公斤/天的剂量均显著降低了病毒滴度。 用于药代动力学分析的化合物制备[1] 静脉给药时，将30.65毫克CI-1040溶解于0.075毫升DMSO中，并用0.225毫升Cremophor EL和2.7毫升PBS进一步稀释。接下来，将34.88 mg ATR-002溶解于0.075 mL DMSO中，并用0.225 mL Cremophor EL和2.7 mL PBS进一步稀释。对于口服给药，将202.5 mg CI-1040溶解于0.5 mL DMSO、1.5 mL Cremophor EL和8.0 mL PBS中。因此，将 81.0 mg 的 Zapnometinib (PD0184264; ATR-002) 溶解于 0.2 mL DMSO、0.6 mL Cremophor EL 和 3.2 mL PBS 中。 制备化合物以研究小鼠肺部病毒滴度的降低[1] 对于 25 mg Zapnometinib (PD0184264; ATR-002)/kg 体重的口服给药，将 10 mg ATR-002 溶解于 50 μl DMSO 中，并用 0.15 mL Cremophor EL 和 0.8 mL PBS 进一步稀释。对于 8.4 mg/kg 和 2.8 mg/kg 的应用剂量，将 3.36 mg 或 1.12 mg ATR-002 溶解于 50 μl DMSO 中，并用 0.15 mL Cremophor EL 和 0.8 mL PBS 进一步稀释。此外，将 202.5 mg CI-1040 溶解于 0.5 mL DMSO、0.15 mL Cremophor EL 和 0.8 mL PBS 中。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
扎普诺替尼是一种口服生物利用度高的丝裂原活化蛋白激酶激酶（MAP2K；MAPK/ERK激酶；MEK）小分子抑制剂，具有潜在的抗病毒和抗炎活性。口服后，扎普诺替尼选择性地结合并抑制MEK的活性。这可能阻止病毒基因组蛋白复合物从细胞核输出到细胞质，从而抑制新病毒颗粒的形成和多种RNA病毒（包括流感病毒、汉坦病毒、呼吸道合胞病毒（RSV）和严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2））的复制。此外，抑制MEK活性还可能降低基因表达，并抑制促炎细胞因子和趋化因子的产生，包括肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素 (IL)-1β、IL-8、CXC基序趋化因子10（干扰素γ诱导蛋白10；IP-10）、CC基序趋化因子2（单核细胞趋化蛋白-1；MCP-1）和CC基序趋化因子3（巨噬细胞炎症蛋白1-α；MIP-1α），从而减轻炎症。MEK是一种双特异性苏氨酸/酪氨酸激酶家族成员，在RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的激活中发挥关键作用。许多RNA病毒依赖于该通路在人体细胞内进行复制。
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| 分子式 |
C13H7CLF2INO2
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|---|---|
| 分子量 |
409.55
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| 精确质量 |
408.918
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| 元素分析 |
C, 38.13; H, 1.72; Cl, 8.66; F, 9.28; I, 30.99; N, 3.42; O, 7.81
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| CAS号 |
303175-44-2
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| PubChem CID |
10112191
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| 外观&性状 |
Off-white to gray solid powder
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| LogP |
4.737
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| tPSA |
49.33
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
363
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
XCNBGWKQXRQKSA-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H7ClF2INO2/c14-8-5-6(17)1-4-10(8)18-12-7(13(19)20)2-3-9(15)11(12)16/h1-5,18H,(H,19,20)
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| 化学名 |
2-(2-chloro-4-iodoanilino)-3,4-difluorobenzoic acid
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| 别名 |
zapnometinib; 2-(2-chloro-4-iodophenylamino)-3,4-difluorobenzoic acid; ATR-002; Zapnometinib [INN]; PD-0184264; Benzoic acid, 2-[(2-chloro-4-iodophenyl)amino]-3,4-difluoro-; 4RZD8LK83V;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 62.5 mg/mL (152.61 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4417 mL | 12.2085 mL | 24.4170 mL | |
| 5 mM | 0.4883 mL | 2.4417 mL | 4.8834 mL | |
| 10 mM | 0.2442 mL | 1.2209 mL | 2.4417 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Fusion Inhibitory Peptide (ZD-Phe-Phe-Gly-OH; FIP; Virus Replication Inhibitory Peptide)
ZIKV-IN-8
PAN endonuclease-IN-1
Urolithin M5 (Decarboxyellagic acid)
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