| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
A 21960 targets Tn3 resolvase, a protein that catalyzes site-specific recombination between two directly repeated copies of the recombination site res. By inhibiting resolvase, it blocks the site-specific recombination reaction essential for transposon mobility and bacterial genome plasticity.
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| 体外研究 (In Vitro) |
A21960在体外抑制了resolvase介导的位点特异性重组，抑制浓度约为1 mg/ml时达到50%，5 mg/ml时完全抑制，该结果通过模型整合质粒πres^2和纯化的resolvase蛋白进行评估。[1]
A21960不抑制EcoRI切割，表明其对resolvase具有特异性。[1] 在硝酸纤维素滤膜结合实验和DNase I足迹实验中，A21960即使在完全抑制重组的浓度下，也不阻断resolvase与res位点的结合。[1] A21960抑制了resolvase-res突触复合物（α型结构）的形成，该抑制作用通过戊二醛交联和BamHI切割检测。 [1]在拓扑异构酶I松弛实验中，A21960导致解离酶保护的连接数差(ΔLk)降低：在1 mg/ml和2 mg/ml浓度下，ΔLk为-2（相比之下，在没有抑制剂的情况下为-3），在3 mg/ml浓度下，ΔLk为-1，表明突触形成被阻断，但解离酶仍能结合，DNA仍能缠绕在未形成突触的res位点上，从而保护了一个负超螺旋。[1]A21960抑制解离酶与两个直接重复的res位点之间的突触形成，从而阻断位点特异性重组反应。它不影响解离酶的结合和DNA的弯曲，但特异性地抑制突触复合物的形成。这种机制使其成为研究解离酶介导的重组的宝贵工具。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
由于A 21960主要是一种用于研究细菌重组的研究工具化合物，因此其体内活性数据有限。其在细菌感染动物模型中的潜在应用尚未得到充分表征。需要进一步的体内研究来评估其疗效和药代动力学特性。
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| 酶活实验 |
标准的重组酶重组反应在37°C下进行15分钟，反应缓冲液包含150 mM NaCl、20 mM Tris-HCl (pH 7.5)、20 mM MgCl2、1 mM 二硫苏糖醇、1% DMSO、0.4 μg πres^2 质粒DNA和2 μg重组酶。抑制剂A21960在加入DNA前于4°C下与重组酶预孵育1分钟。反应终止后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。[1] 戊二醛交联实验用于检测突触复合物：在含有150 mM NaCl、20 mM三乙醇胺-HCl (pH 7.5)和5 mM EDTA的缓冲液中，于15°C下使重组酶与res^2 DNA结合5分钟。将新鲜稀释的 8% 戊二醛加入至终浓度为 0.2%，并在 15°C 下孵育 5 分钟。复合物通过 Sepharose CL-4B 微柱过滤纯化，然后在 37°C 下用 BamHI 酶切 10 分钟。产物通过 0.8% 琼脂糖凝胶电泳进行分离。[1]
拓扑异构酶 I 松弛实验：将戊二醛固定的突触复合物与小麦胚芽拓扑异构酶 I 在 15°C 下处理 15 分钟。加入 SDS 至终体积为 0.2% 以终止反应。样品在含有 1.2 μg/ml 氯喹的 TBE 缓冲液中进行 1.2% 琼脂糖凝胶电泳。[1] A 21960 的无细胞检测涉及纯化的 Tn3 解离酶蛋白和含有两个直接重复 res 位点的 DNA 底物。在化合物浓度递增的情况下进行重组酶介导的重组反应。通过凝胶电泳或其他生化方法评估重组酶与res位点之间的突触形成情况。通过定量分析重组抑制情况来确定活性。 |
| 细胞实验 |
将表达Tn3重组酶的细菌细胞进行培养，并用不同浓度的A 21960处理。通过分析质粒DNA或使用可测量重组频率的报告系统来评估位点特异性重组的效率。监测细菌的生长和活力，以评估该化合物的任何细胞毒性作用。
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| 动物实验 |
关于A 21960的体内动物研究报道不多。作为一种研究细菌重组的工具，它有可能用于细菌感染的小鼠模型，以评估其对转座子移动性和细菌致病性的影响。然而，此类研究仍有待开展。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
A 21960 的药代动力学性质尚未得到全面表征。作为一种小分子化合物（分子量 164.59，分子式 C6H9ClO3），其具有中等亲脂性（LogP 1.66），预计具有良好的膜渗透性。该化合物可溶于 DMSO 和乙醇。详细的药代动力学参数仍有待确定。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
A 21960 的毒性数据有限。作为一种研究化合物，其开发需要进行标准的毒理学评估。该化合物需按照标准的实验室安全预防措施进行操作。其靶向细菌分解酶的作用机制表明其具有作为抗菌剂的潜在用途，但安全性仍需进一步评估。
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| 参考文献 |
J Mol Biol.1989 Mar 20;206(2):295-304.
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| 其他信息 |
A21960是雅培实验室慷慨赠送的。[1] 它的作用机制是阻断res位点之间的突触形成，而不影响重组酶的结合或DNA弯曲。[1]
A21960（分子式C6H9ClO3，分子量164.59）也称为2-氯乙酰乙酸乙酯。它是一种Tn3重组酶抑制剂，可抑制重组酶与两个直接重复的res位点之间的突触形成，从而阻断位点特异性重组。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于治疗用途。 |
| 分子式 |
C6H9CLO3
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|---|---|---|
| 分子量 |
164.5869
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| 精确质量 |
164.024
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| CAS号 |
609-15-4
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
11858
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| 外观&性状 |
Colorless to light yellow liquid（Density：1.172 g/cm³）
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
225.5±0.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
-80 °C
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| 闪点 |
50.0±0.0 °C
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| 蒸汽压 |
0.1±0.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.434
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| LogP |
1.66
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| tPSA |
43.37
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
10
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| 分子复杂度/Complexity |
144
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC([H])(C(C([H])([H])[H])=O)C(=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H]
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| InChi Key |
RDULEYWUGKOCMR-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C6H9ClO3/c1-3-10-6(9)5(7)4(2)8/h5H,3H2,1-2H3
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| 化学名 |
ethyl 2-chloro-3-oxobutanoate
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 6.0757 mL | 30.3785 mL | 60.7570 mL | |
| 5 mM | 1.2151 mL | 6.0757 mL | 12.1514 mL | |
| 10 mM | 0.6076 mL | 3.0379 mL | 6.0757 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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