| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
A-385358 binds to Bcl-XL (Ki = 0.8 ± 0.17 nmol/L) and Bcl-2 (Ki = 67 ± 7 nmol/L) [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
在荧光偏振测试中，A-385358 是一种选择性 Bcl-XL 抑制剂，其对 Bcl-XL 和 Bcl-2 的 Ki 值分别为 0.80 nM 和 67 nM。将 A-385358 处理 IL-3 缺陷的 FL5.12/Bcl-XL 细胞一整天后，细胞死亡，EC50 值为 0.47±0.05 μM (n=68)。caspase-3 活性的增加与此效应相一致。结果表明，Bcl-XL 比 Bcl-2 疏水沟槽具有更强的亲和力，这体现在 IL-3 耗竭的 FL5.12/Bcl-2 细胞中 A-385358 的 EC50 值（1.9±0.1 μM；n=55）比细胞因子缺乏的 FL5.12/Bcl-XL 细胞高出 4 倍。此外，与 Bcl-2 细胞相比，A-385358 能更有效地诱导 FL5.12/Bcl-XL 分离的线粒体释放细胞色素 c [1]。
A-385358 能有效进入 FL5.12 细胞，在 10 μmol/L 浓度下孵育 1 小时后，[细胞]/[细胞外] 比为 51.1 ± 2.7。细胞裂解后释放出 30% 的细胞相关化合物，表明大部分化合物与细胞膜结合 [1]。 在 NCI-H460 细胞中，A-385358 的荧光类似物（化合物 1）与线粒体标记物 MitoTracker Green FM 共定位，这可通过共聚焦显微镜观察到 [1]。 在缺乏 IL-3 的 FL5.12/Bcl-XL 细胞中，A-385358 可诱导细胞死亡，EC50 为 0.47 ± 0.05 μmol/L。在缺乏IL-3的FL5.12/Bcl-2细胞中，EC50为1.9 ± 0.1 μmol/L [1]。 在A549非小细胞肺癌细胞中，A-385358（10 μmol/L）可增强紫杉醇的活性。当在加入A-385358前24小时给予紫杉醇时，共孵育48小时后，增强倍数（EC50偏移）为15倍；共孵育72小时后，增强倍数为26倍。在同时孵育 48 小时后，增强因子为 3.5 倍 [1]。 A-385358 不会改变 A549 细胞中 [3H]紫杉醇的摄取或释放的动力学或程度 [1]。 A-385358 可将 UV-C 照射对 A549 细胞的杀伤作用增强约 2 倍。在 1.25 μmol/L A-385358 浓度下，经 16 mJ/cm² UV-C 照射后，A549 细胞的存活率降低至 <10% [1]。 在多种人类肿瘤细胞系中，A-385358 可增强多种化疗药物的细胞杀伤活性：在 A549 细胞中，紫杉醇和阿霉素的增强因子分别为 13 ± 1 和 3.6 ± 0.7；在 A549、SN12C 和 786-O 细胞中，依托泊苷的增强因子分别为 13 ± 1、2.3 ± 0.1 和 2.3 ± 0.1。在SN12C、MiaPaCa-2、NCI-H226和NCI-H322M细胞中，A-385358与顺铂的相互作用增强了细胞活性（增强因子分别为3.3 ± 0.1、2.6、2.4 ± 0.7和2.0 ± 0）[1]。 在H146小细胞肺癌细胞中，A-385358在无血清条件下的EC50为0.35 ± 0.03 μmol/L，在含10%人血清的条件下为31 ± 6 μmol/L [1]。 在Molt-4细胞中，A-385358在无血清条件下的EC50为0.74 ± 0.23 μmol/L，在含10%人血清的条件下为32.8 ± 10.3 μmol/L [1]。 在CCRF-CEM细胞中在A549细胞中，A-385358的EC50值为0.21 ± 0.12 μmol/L（无血清）和>30 μmol/L（10%人血清）[1]。在A549细胞中，A-385358的EC50值为16 ± 1 μmol/L（无血清）和>100 μmol/L（10%人血清）[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
与紫杉醇单药治疗相比，A-385358（100 mg/kg/d）联合较低剂量紫杉醇可显著降低肿瘤生长率（%T/C）。此外，与安慰剂对照组相比，该联合用药方案使肿瘤体积达到 900 mm³ 所需的时间缩短了 100% 以上（%ILS）。A-385358 给药期间疗效达到最大值，停药后肿瘤生长逐渐但稳定地增加。此外，30 mg/kg/d 紫杉醇联合 75 mg/kg/d A-385358 方案耐受性良好，且可使肿瘤生长减少 80% 以上。剂量低至 50 mg/kg/d 时，与紫杉醇单药治疗相比，对肿瘤发展产生了显著影响 [1]。
在早期治疗的 A549 异种移植模型中，单独使用 A-385358（100 mg/kg/d，腹腔注射，第 7-27 天）并未显著抑制肿瘤生长，但显著增强了紫杉醇（15 或 30 mg/kg/d，腹腔注射，每 4 天一次，共 3 次）的活性，导致肿瘤生长（%T/C）显著减少，并且与紫杉醇单药治疗相比，肿瘤达到 900 mm³ 的时间（%ILS）增加了 100% 以上。 A-385358 75 mg/kg/d 与紫杉醇 30 mg/kg/d 联合用药可抑制肿瘤生长速率近 80% [1]。 在分期（已建立肿瘤）A549 异种移植模型（肿瘤体积约 240 mm³）中，A-385358（100 mg/kg/d，腹腔注射）与紫杉醇（15 mg/kg/d，腹腔注射）联合用药可在治疗期间几乎完全抑制肿瘤生长。紫杉醇（30 mg/kg/d）联合A-385358（75 mg/kg/d）可使已形成的肿瘤消退（平均肿瘤体积从400 mm³缩小至约200 mm³）[1]。 在LX-1鳞状细胞肺癌模型中，A-385358（100 mg/kg/d）显著提高了紫杉醇（5 mg/kg/d）的疗效，使肿瘤生长速率抑制率达65%，肿瘤生长延迟率达30%[1]。 在H146小细胞肺癌异种移植模型中，腹腔注射A-385358（100 mg/kg/d），连续21天，仅显示出轻微的肿瘤生长抑制（肿瘤生长抑制率为29%）[1]。 对A549肿瘤的免疫组织化学分析显示：与单独使用紫杉醇相比，在紫杉醇中添加 A-385358 可使 MPM-2 阳性细胞（有丝分裂阻滞）的百分比增加约 2 倍，并将凋亡反应（caspase-3 阳性细胞）的持续时间从治疗后 30 小时延长至至少 36 小时 [1]。 |
| 酶活实验 |
采用荧光偏振法测定了化合物A-385358与Bcl-XL和Bcl-2的结合亲和力。该方法测定化合物从Bcl-2家族蛋白上置换荧光素标记的BH3肽的能力。Ki值由竞争曲线计算得出。在无血清条件下，A-385358对Bcl-XL的Ki值为0.8 ± 0.17 nmol/L (n=5)，对Bcl-2的Ki值为67 ± 7 nmol/L (n=6) [1]。
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| 细胞实验 |
采用比色法MTS检测细胞活力。在化合物处理前24小时，将细胞以每孔5000个的密度接种于96孔板中。经过不同孵育时间后，加入MTS试剂并测定细胞活力[1]。
对于UV-C检测，将A549细胞以每孔5000个的密度接种。次日，使用Stratalinker进行不同剂量的UV-C照射，随后立即加入A-385358[1]。 使用稳定转染Bcl-xL或Bcl-2基因的FL5.12细胞。为确定化合物特异性杀伤作用，将转染细胞在不含WEHI 3B培养基（IL-3来源）的培养基中培养24小时。将细胞以每孔 1×10⁵ 个的密度接种，并加入系列稀释的 A-385358。孵育 24 小时后，采用 MTS 法检测细胞活力 [1]。对于蛋白质印迹分析，取 20 μg 总蛋白进行 4% 至 12% Bis/Tris 梯度凝胶电泳，并将蛋白转移至 PVDF 膜。使用 Bcl-XL 或 Bcl-2 的一抗检测特异性信号 [1]。为了分析紫杉醇的摄取和外排，将 A549 细胞 (1×10⁵) 接种于 96 孔板中。向所有孔中加入 [³H] 紫杉醇 (5 μmol/L；终浓度 0.5 μCi/mL)，部分孔中加入 50 μmol/L A-385358，并孵育不同时间。在洗脱实验中，细胞首先暴露于[3H]紫杉醇中2小时，洗涤后，再用含或不含50 μmol/L A-385358的新鲜培养基进行孵育[1]。 |
| 动物实验 |
所有动物实验均按照机构动物护理和使用委员会（IACUC）的内部指南进行[1]。
对于A549异种移植瘤实验，将5×10⁶个细胞与50% Matrigel混合，皮下注射到雄性SCID小鼠的侧腹部。早期治疗实验于第7天开始。已形成肿瘤实验中，肿瘤生长至约240 mm³后进行治疗[1]。 A-385358溶于含有5% Tween 80、20%丙二醇和75% PBS（pH 3.8）的载体中。紫杉醇的配制按照制造商的建议进行。联合治疗中，两种药物均采用腹腔注射给药，紫杉醇在A-385358治疗前数小时给药（免疫组化研究除外，该研究中两种药物同时给药）[1]。 在早期治疗的A549模型中，A-385358于第7天至第27天每日一次腹腔注射给药，剂量为100 mg/kg/d。紫杉醇以15或30 mg/kg/d的剂量，每4天给药一次，连续给药3天（第7、11和15天）[1]。 在分期治疗的A549模型中，A-385358于第16天至第36天每日一次腹腔注射给药，剂量为100或75 mg/kg/d。紫杉醇于第16、20和24天以15或30 mg/kg/d的剂量腹腔注射给药。 [1]. 在LX-1模型中，将雄性CD-1裸鼠接种1:5稀释的肿瘤细胞悬液（溶于50% Matrigel）。A-385358（100 mg/kg/d）于第1-21天给药，紫杉醇（5 mg/kg/d）于第1、5和9天给药[1]。 在H146异种移植瘤研究中，A-385358以100 mg/kg/d的剂量腹腔注射给药，持续21天[1]。 免疫组织化学方面，药物处理后，将A549肿瘤收集于Streck组织固定液中固定24小时，然后进行组织处理、石蜡包埋和切片。使用MPM-2抗体（1:350）分析G2/M期阻滞，使用抗活化caspase-3抗体（1:400）分析细胞凋亡。二抗稀释度为1:250 [1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在SCID小鼠中，与单独使用紫杉醇相比，A-385358与紫杉醇联合给药并未改变紫杉醇的Cmax（3.0 μg/mL）或AUC（13 μg·h/mL）[1]。
A-385358也不影响A549细胞对紫杉醇的摄取或外排[1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
A-385358每日一次，腹腔注射，剂量为100 mg/kg/d，从第7天到第27天，耐受性良好（体重减轻<5%）[1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
A-385358是一种小分子，对Bcl-X与Bcl-2的结合具有相对选择性（Ki分别为0.80和67 nmol/L）。该化合物能有效进入细胞并与线粒体膜共定位[1]。
ABT-737 是一种强效的 Bcl-2、Bcl-XL 和 Bcl-w 抑制剂，具有广谱活性，而A-385358 是一种 Bcl-XL 选择性抑制剂，用于研究抑制该特定靶点的生物学后果[1]。 在 A549 肿瘤中，与紫杉醇单药治疗相比，紫杉醇与A-385358 联合用药显著增加了有丝分裂阻滞，随后诱导细胞凋亡[1]。 A-385358 的对映体，其二甲氨基乙基的构型相反，对 Bcl-XL 和 Bcl-2 的活性分别降低了 20 倍和 300 倍，因此在细胞实验中用作阴性对照[1]。 |
| 分子式 |
C32H41N5O5S2
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|---|---|
| 分子量 |
639.83
|
| 精确质量 |
639.254
|
| CAS号 |
406228-55-5
|
| PubChem CID |
11556440
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.649
|
| LogP |
7.6
|
| tPSA |
161
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
12
|
| 重原子数目 |
44
|
| 分子复杂度/Complexity |
1020
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
CC1(CCN(CC1)C2=CC=C(C=C2)C(=O)NS(=O)(=O)C3=CC(=C(C=C3)N[C@H](CCN(C)C)CSC4=CC=CC=C4)[N+](=O)[O-])C
|
| InChi Key |
DWEHITNKTMMZBR-RUZDIDTESA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C32H41N5O5S2/c1-32(2)17-20-36(21-18-32)26-12-10-24(11-13-26)31(38)34-44(41,42)28-14-15-29(30(22-28)37(39)40)33-25(16-19-35(3)4)23-43-27-8-6-5-7-9-27/h5-15,22,25,33H,16-21,23H2,1-4H3,(H,34,38)/t25-/m1/s1
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| 化学名 |
N-[4-[[(2R)-4-(Dimethylamino)-1-phenylsulfanylbutan-2-yl]amino]-3-nitrophenyl]sulfonyl-4-(4,4-dimethylpiperidin-1-yl)benzamide
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| 别名 |
A 385358 A385358A-385358
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~78.15 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.91 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5629 mL | 7.8146 mL | 15.6292 mL | |
| 5 mM | 0.3126 mL | 1.5629 mL | 3.1258 mL | |
| 10 mM | 0.1563 mL | 0.7815 mL | 1.5629 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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