| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Akt1 (Ki = 160 pM) [1]
Akt2, Akt3 (equipotent to Akt1 within cells) [1] PKA (40-fold selective vs Akt1; Ki = 6.3 nM) [1] PKCγ (150-fold selective vs Akt1; Ki = 24 nM) [1] PKCδ (200-fold selective vs Akt1; Ki = 33 nM) [1] GSK3β (260-fold selective vs Akt1; Ki = 41 nM) [1] RSK2 (68-fold selective vs Akt1; Ki = 11 nM) [1] CDK2 (150-fold selective vs Akt1; Ki = 24 nM) [1] ERK2 (2,100-fold selective vs Akt1; Ki = 340 nM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
A-443654 的效力是原先导化合物的 30,000 倍，Ki 值为 160 pM。与 PKA 相比，A-443654 对 Akt 的选择性高 40 倍。在细胞中，A-443654 对 Akt1、Akt2 和 Akt3 的抑制作用相当。在所有三种细胞系中，A-443654 均以剂量依赖的方式降低 P-GSK3 水平。在 EC50 为 0.1 μM 时，A-443654 可抑制肿瘤细胞的生长[1]。A-443654 可相对快速地（2 至 4 小时内）引起 10A 和 10CA1a 细胞的形态学改变，其中 10CA1a 细胞对 A-443654 的敏感性高于 10A 细胞。 12小时后，单独使用2 μM的A-443654可诱导10CA1a细胞从培养皿中分离，但对10A细胞无此作用。而1 μM的A-443654则可诱导10CA1a细胞从培养皿中分离。使用FACScan检测了雷帕霉素和A-443654对10A和10CA1a细胞DNA含量的影响。相反，8小时后，2 μM和5 μM的A-443654可使10CA1a细胞中Bcl-2蛋白水平降低30%至40%。然而，雷帕霉素与2 μM或5 μM的A-443654联合使用，可显著降低10A细胞中Bcl-2蛋白水平约40%至50%，以及10CA1a细胞中Bcl-2蛋白水平约70%[2]。 A-443654 对突变细胞的相对生长抑制率超过 3.5 倍，这是与野生型细胞相比，对突变细胞的最大选择性效应 [3]。在稳定转染组成型活性肉豆蔻酰化人 Akt1、Akt2 或 Akt3 的小鼠 FL5.12 细胞中，A-443654 以剂量依赖的方式降低了下游靶标 GSK3 的磷酸化水平，对所有三种 Akt 亚型均具有相同的效力。[1] 在 MiaPaCa-2 胰腺癌细胞中，通过 Western blot 检测发现，A-443654 (0-30 μM) 以剂量依赖的方式降低了 Akt 下游靶标 GSK3α/β、FOXO3、TSC2 和 mTOR 的磷酸化水平。同时观察到Akt在Thr³⁰⁸和Ser⁴⁷³位点的磷酸化水平也升高。[1]
在瞬时转染FOXO3A-hrGFP构建体的HeLa细胞中，用A-443654处理可诱导FOXO3A从细胞质转位至细胞核。[1] 在细胞增殖实验（可能是MTT或类似方法）中，A-443654以0.1 μM的EC₅₀值减缓肿瘤细胞的增殖。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在3T3-Akt1侧腹肿瘤模型中，皮下注射A-443654（7.5 mg/kg/d）可抑制肿瘤生长。A-443654（50 mg/kg，皮下注射）可诱导3T3-Akt1周围的肿瘤细胞凋亡。在MiaPaCa-2肿瘤中，A-443654（30 mg/kg，皮下注射）可提高磷酸化Akt1的水平[1]。在SCID小鼠的3T3-Akt1小鼠成纤维细胞侧腹肿瘤模型中，皮下注射A-443654（7.5 mg/kg/d，每日两次，连续14天）可显著抑制已建立肿瘤的生长（从第26天起P < 0.02）。一种无活性的类似物（2-甲基A-443654）未显示任何作用。停药后肿瘤迅速复发。[1]
在MiaPaCa-2人胰腺癌异种移植模型中，从肿瘤接种后第1天开始，使用A-443654（7.5 mg/kg/d，皮下注射，每日两次，持续14天）治疗，可显著抑制肿瘤生长（P < 0.03）。其疗效与吉西他滨（120 mg/kg/d，腹腔注射，第3、6、9、12天）相当。[1] 在已形成肿瘤的MiaPaCa-2异种移植模型中，强化给药方案A-443654（50 mg/kg/d，皮下注射，每日三次，第16、20和24天）比每日两次的给药方案更有效。从第23天起，A-443654（每日三次给药方案）与雷帕霉素（20 mg/kg/d，腹腔注射，持续15天）联合用药在统计学上优于任何一种单药治疗（P < 0.01）。[1] 在荷瘤小鼠（MiaPaCa-2）中，单次皮下注射A-443654（30 mg/kg）可在1小时内提高肿瘤中磷酸化Akt的水平，免疫组化结果显示。单次50 mg/kg剂量可在治疗8小时后增加3T3-Akt1肿瘤细胞的凋亡（活性caspase-3染色）。[1] 在口服葡萄糖耐量试验中，与载体对照组相比，空腹小鼠接受A-443654（20 mg/kg）治疗后，血浆胰岛素水平升高，而血糖水平无显著变化。 [1] |
| 酶活实验 |
使用基于放射性FlashPlate的平台进行激酶抑制实验。将重组激酶（Akt1、PKA、PKCγ、PKCδ、GSK3β、RSK2、CDK2、ERK2等）与生物素标记的肽底物、[γ-³³P]ATP和不同浓度的A-443654孵育。反应混合物被捕获在链霉亲和素包被的FlashPlate上，并测量放射性。根据抑制数据计算Ki值。[1]
通过X射线晶体衍射分析A-443654与PKA（Akt的近源同系物）的复合物，确定了其结合模式。该结构解析至2.7 Å分辨率，并精修至Rwork = 24.41%和RFree = 30.18%。研究揭示了三个关键的氢键相互作用：一个与铰链区主链相互作用，一个与保守的赖氨酸（PKA 中的 Lys⁷²）相互作用，以及一组与 Asn¹⁷¹ 和 Asp¹⁸⁴ 相互作用。[1] |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析：将细胞（例如 MiaPaCa-2）用 0-30 μM 的 A-443654 处理 2 小时。制备细胞裂解液，并通过 SDS-PAGE 分离蛋白质，转移至膜上，并用针对磷酸化 GSK3α/β、磷酸化 FOXO1A/3A、磷酸化 TSC2、磷酸化 mTOR 和磷酸化 Akt 的抗体进行检测。通过化学发光法显色并进行定量。[1] FOXO3A 转位实验：将 pFOXO3A-hrGFP 质粒瞬时转染至 HeLa 细胞。转染 40 小时后，用 A-443654 或载体处理细胞 6 小时。通过显微镜采集荧光活细胞图像，以观察 FOXO3A-GFP 的亚细胞定位。 [1]
细胞增殖实验：采用Alamar Blue法评估A-443654对细胞活力/增殖的影响。用PBS洗涤细胞后，加入稀释的Alamar Blue试剂。孵育后，测量荧光强度（激发波长544 nm，发射波长595 nm）。计算EC₅₀值。[1] |
| 动物实验 |
肿瘤疗效研究：** 将肿瘤细胞（3T3-Akt1、MiaPaCa-2 或 PC-3）皮下接种于免疫缺陷的雄性 SCID 小鼠体内，肿瘤细胞悬浮于 50% Matrigel 中。早期治疗研究于接种后次日开始治疗。已形成肿瘤的研究于肿瘤达到指定大小（约 250-270 mm³）时开始治疗。A-443654 以 0.2% HPMC 为溶剂皮下注射。给药方案不同：每日两次，每次 7.5 mg/kg，连续 14 天；或每日三次，每次 50 mg/kg，分别于第 16、20 和 24 天给药。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤大小。 [1] * **药代动力学/药效学研究：**荷瘤小鼠接受不同剂量（3.8、7.5、15 mg/kg，每日两次，连续3天）的A-443654治疗。在末次给药后的不同时间点，收集血浆和肿瘤组织。采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）或紫外高效液相色谱（UV-HPLC）测定药物浓度。采用Western blot分析肿瘤裂解液中磷酸化Akt、磷酸化S6和磷酸化GSK3的表达。[1] * **免疫组织化学：**将治疗小鼠的肿瘤组织固定、石蜡包埋并切片。采用DAB显色的标准免疫组织化学技术，用针对活性caspase-3（凋亡标志物）或磷酸化Akt的抗体对切片进行染色。 [1]
* **葡萄糖耐量试验：** 禁食小鼠在口服葡萄糖负荷试验（1 g/kg）前 30 分钟分别给予赋形剂或 A-443654（20 mg/kg）。采集血样并测定血浆胰岛素水平。[1] 肿瘤疗效研究：将肿瘤细胞（3T3-Akt1、MiaPaCa-2 或 PC-3）皮下接种于免疫缺陷雄性 SCID 小鼠体内，肿瘤细胞悬浮于 50% Matrigel 中。早期治疗研究于接种后第二天开始治疗。已形成肿瘤的研究于肿瘤达到指定大小（约 250-270 mm³）时开始治疗。A-443654 以 0.2% HPMC 为载体皮下注射。给药方案有所不同：每日两次，每次 7.5 mg/kg，连续 14 天；或每日三次，每次 50 mg/kg，分别于第 16、20 和 24 天给药。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤大小。[1] 药代动力学/药效学研究：荷瘤小鼠接受不同剂量（3.8、7.5 和 15 mg/kg，每日两次，连续 3 天）的 A-443654 治疗。在末次给药后的不同时间点，收集血浆和肿瘤组织。采用液相色谱-质谱联用 (LC-MS) 或紫外高效液相色谱 (UV-HPLC) 测定药物浓度。采用蛋白质印迹法分析肿瘤裂解液中磷酸化 Akt、磷酸化 S6 和磷酸化 GSK3 的表达。[1] 免疫组织化学：将治疗小鼠的肿瘤组织固定、石蜡包埋并切片。采用标准免疫组织化学技术，并使用DAB显色法，用抗活性caspase-3（凋亡标志物）或磷酸化Akt抗体对切片进行染色。[1] 葡萄糖耐量试验：禁食小鼠在口服葡萄糖负荷（1 g/kg）前30分钟分别给予载体或A-443654（20 mg/kg）。采集血样，并测定血浆胰岛素水平。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
A-443654 不具有口服生物利用度。所有体内研究均采用皮下注射给药。[1]
在小鼠中，皮下注射剂量分别为 3.8、7.5 和 15 mg/kg，每日两次后，A-443654 的血浆浓度在约 5 小时内保持在细胞 EC₅₀ (0.1 μM) 以上。[1] 肿瘤组织中 A-443654 的浓度显著高于血浆浓度，并在整个 12 小时给药间隔内保持在细胞 EC₅₀ 以上。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
A-443654 的治疗窗较窄。其疗效在剂量约为最大耐受剂量 (MTD) 的一半时即可达到。[1]
由于严重的注射部位刺激（局部毒性），A-443654 的给药周期限制为 14 天。[1] 在接受治疗的动物中观察到的全身毒性包括不适和体重减轻（通常在超治疗剂量下超过 10%），这与葡萄糖代谢异常相符。[1] 在葡萄糖负荷试验中，A-443654 可显著提高血浆胰岛素水平，这与维持血糖的稳态反应一致，并且与 Akt2 基因敲除动物的表型相似。[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
(2S)-1-(1H-吲哚-3-基)-3-[[5-(3-甲基-2H-吲唑-5-基)-3-吡啶基]氧基]-2-丙烷属于吲哚类化合物。
A-443654 是一种强效的、ATP竞争性的、可逆的Akt激酶抑制剂，属于吲唑-吡啶系列。它是通过高通量筛选和结构导向优化发现的。[1] 该化合物与Akt的ATP结合位点结合。与相关激酶PKA的X射线晶体学研究表明，它形成三个关键的氢键：一个与铰链区，一个与保守的赖氨酸，一个与通常配位镁离子的残基（Asn和Asp）。 [1] 在细胞中，A-443654 抑制 Akt 的多个下游效应分子（GSK3、FOXO3、TSC2、mTOR）的磷酸化，并诱导 Akt 磷酸化的代偿性增加。这种增加依赖于 PI3K 的活性。[1] A-443654 在多种异种移植瘤模型（3T3-Akt1、MiaPaCa-2、PC-3）中显示出抗肿瘤活性。其作用为细胞抑制，停药后肿瘤会复发。与紫杉醇或雷帕霉素联合使用时，疗效增强。[1] 观察到的毒性（体重减轻、不适、高胰岛素血症）与基于机制的 Akt 抑制相一致，特别是 Akt2 的抑制，Akt2 参与胰岛素信号传导。[1] |
| 精确质量 |
397.19
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|---|---|
| CAS号 |
552325-16-3
|
| PubChem CID |
10172943
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
722.0±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
390.4±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.3 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.722
|
| LogP |
3.65
|
| tPSA |
92.61
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
562
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
N[C@H](COC1=CN=CC(C2=CC3=C(NN=C3C)C=C2)=C1)CC4=CNC5=CC=CC=C54
|
| InChi Key |
YWTBGJGMTBHQTM-IBGZPJMESA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C24H23N5O/c1-15-22-10-16(6-7-24(22)29-28-15)17-9-20(13-26-11-17)30-14-19(25)8-18-12-27-23-5-3-2-4-21(18)23/h2-7,9-13,19,27H,8,14,25H2,1H3,(H,28,29)/t19-/m0/s1
|
| 化学名 |
(2S)-1-(1H-indol-3-yl)-3-[5-(3-methyl-2H-indazol-5-yl)pyridin-3-yl]oxypropan-2-amine
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| 别名 |
A443564 A 443564 A-443564
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 100 mg/mL (~251.59 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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463611831
