A77-01

别名: A77-01 A-77-01 A 77-01 4-[3-(6-甲基-2-吡啶)-1H-吡唑]-喹啉;4-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-1H-吡唑-4-基]喹啉;A 77-01

目录号: V7118 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

A 77-01 是 TGF-β I 型受体家族 ALK5 的有效抑制剂，IC50 为 25 nM。

A77-01 CAS号: 607737-87-1
产品类别: TGF-β Receptor

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
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产品描述

化合物 77-01 是 TGF-β I 型受体家族 ALK5 的强效抑制剂，IC50 为 25 nM。

生物活性&实验参考方法

靶点	Activin receptor-like kinase 5 (ALK-5), TGF-β type I receptor (IC₅₀ = 25 nM in cell-based transcriptional reporter assay) [1] Activin receptor-like kinase 4 (ALK-4), activin type IB receptor [1] Activin receptor-like kinase 7 (ALK-7), nodal type I receptor [1]
体外研究 (In Vitro)	用 A-77-01（0.01-10 µM；25 小时；Mv1Lu 细胞）处理可有效抑制 TGF-β 诱导的浓度依赖性转录激活 [1]。当用 A-77-01（1 µM）处理 Mv1Lu 细胞 24-72 小时时，可成功阻止 TGF-β 的生长抑制作用 [1]。当用 A-77-01 (1 µM) 处理 HaCaT 细胞 30 分钟时，TGF-β 诱导的 Smad2 磷酸化受到抑制 [1]。在用 9xCAGA-荧光素酶构建体转染的 Mv1Lu 细胞进行的基于细胞的荧光素酶报告基因检测中，A-77-01 以浓度依赖的方式抑制 TGF-β 诱导的转录激活，IC₅₀ 为 25 nM [1]。在 9xCAGA-荧光素酶报告基因检测中，浓度为 1 μM 的 A-77-01 几乎完全抑制了组成型活性 ALK-5 (ALK5-TD) 诱导的转录激活 [1]。 A-77-01 (1 μM) 对 C2C12 细胞中 BMP 诱导的转录活性没有影响。 (BRE)₂-荧光素酶报告基因构建体[1]。在HaCaT细胞中，A-77-01 (1 μM) 完全抑制了TGF-β诱导的Smad2磷酸化，这通过抗磷酸化Smad2抗体的免疫印迹检测得到[1]。在Mv1Lu细胞增殖实验中，A-77-01 (1 μM) 在72小时内有效阻止了TGF-β (1 ng/mL) 的生长抑制作用[1]。 A-77-01 (1 μM) 完全抑制了TGF-β诱导的NMuMG细胞上皮-间质转化(EMT)，阻止了细胞形态从立方上皮向成纤维细胞形态的转变[1]。 NMuMG细胞的RT-PCR和免疫印迹分析表明： A-77-01 (1 μM) 可恢复 TGF-β 诱导的 E-钙黏蛋白下调，并抑制纤连蛋白和 N-钙黏蛋白在 mRNA 和蛋白水平的上调 [1]。 A-77-01 在浓度高达 10 μM 时，对 FBS 诱导的 HaCaT 细胞中 ERK1/2 的激活没有显著影响，如磷酸化 ERK1/2 的免疫印迹分析所示 [1]。 A-77-01 仅在高浓度（高于 3 μM）下对渗透休克诱导的 p38 MAPK 激活有微弱的抑制作用，而在 TGF-β 信号被强效抑制的低浓度（0.3-1 μM）下则无作用 [1]。
细胞实验	RT-PCR[1] 细胞类型： Mv1Lu 细胞测试浓度： 0.01 µM、0.03 µM、0.1 µM、0.3 µM、1 µM、3 µM、10 µM 孵育时间： 25 小时实验结果： TGF-β 诱导的荧光素酶活性呈浓度依赖性抑制。细胞活力检测[1] 细胞类型：Mv1Lu细胞测试浓度：1 µM 孵育时间：24小时，48小时，72小时实验结果：有效抑制TGF-β的生长抑制作用。蛋白质印迹分析[1] 细胞类型：HaCaT细胞测试浓度：1 µM 孵育时间：30分钟实验结果：抑制TGF-β诱导的Smad2磷酸化。 TGF-β诱导的转录激活（荧光素酶报告基因）检测：将Mv1Lu细胞接种于12孔板中，并使用转染试剂瞬时转染9xCAGA-荧光素酶报告基因构建体。转染8小时后，用不同浓度的A-77-01或DMSO对照预处理细胞1小时。然后用TGF-β（1 ng/mL）刺激细胞24小时。使用双荧光素酶报告系统测定荧光素酶活性，并以TK-Renilla活性进行标准化。IC₅₀值由剂量反应曲线计算得出[1]。 BMP诱导的转录激活实验：将(BRE)₂-荧光素酶报告基因构建体转染至C2C12细胞。转染8小时后，用不同浓度的A-77-01或1 μM SB-431542预处理细胞1小时，然后用BMP4（20 ng/mL）刺激24小时。荧光素酶活性测定方法如上所述[1]。细胞增殖实验：将Mv1Lu细胞以2.5 × 10⁴个细胞/孔的密度接种于24孔板中。次日，细胞用 1 μM A-77-01 预处理 1 小时，然后在 TGF-β (1 ng/mL) 中培养 24、48 或 72 小时。用胰蛋白酶消化细胞，并使用库尔特计数器进行计数 [1]。蛋白质印迹分析（Smad2 磷酸化）：HaCaT 细胞用 1 μM A-77-01 预处理 30 分钟，然后在 TGF-β (1 ng/mL) 中处理 1 小时。制备细胞裂解液，通过 SDS-PAGE 电泳分离，然后转移至膜上。用抗磷酸化 Smad2 抗体和抗 Smad2/3 抗体对膜进行探针检测。蛋白质条带被可视化并进行分析[1]。蛋白质印迹分析（MAPK通路）：对于ERK1/2分析，将血清饥饿的HaCaT细胞用不同浓度的A-77-01或10 μM U0126预处理30分钟，然后用20% FBS刺激30分钟。对于p38分析，将HaCaT细胞用不同浓度的A-77-01或10 μM SB-203580预处理30分钟，然后用0.5 M NaCl进行5分钟的渗透冲击。细胞裂解液用抗磷酸化ERK1/2、抗ERK1/2、抗磷酸化p38和抗p38抗体进行免疫印迹分析[1]。上皮间质转化（EMT）实验 - 形态学：将NMuMG细胞以6 × 10⁴个细胞/孔的密度接种于6孔板中。次日，在有或无1 μM A-77-01的情况下，用TGF-β（3 ng/mL）刺激细胞。48小时后，在显微镜下观察并拍摄细胞形态[1]。 EMT实验 - RT-PCR分析：将NMuMG细胞用TGF-β（3 ng/mL）处理24小时，在有或无1 μM A-77-01的情况下进行。提取总RNA并反转录为cDNA。使用针对 E-钙黏蛋白、纤连蛋白、N-钙黏蛋白和 GAPDH 的特异性引物进行 PCR。PCR 产物经琼脂糖凝胶电泳分离，并用溴化乙锭染色显影 [1]。 EMT 检测 - Western Blot 分析：将 NMuMG 细胞用 TGF-β (3 ng/mL) 处理 48 小时，处理组加入或不加入 1 μM A-77-01。制备细胞裂解液，并用针对 E-钙黏蛋白、纤连蛋白、N-钙黏蛋白和微管蛋白（内参）的抗体进行免疫印迹分析 [1]。
参考文献	[1]. The ALK-5 inhibitor A-83-01 inhibits Smad signaling and epithelial-to-mesenchymal transition by transforming growth factor-beta. Cancer Sci. 2005 Nov;96(11):791-800.
其他信息	A-77-01（化合物 11）是一种小分子抑制剂，其结构与 Sawyer 等人先前报道的 ALK-5 抑制剂相似。本研究合成并表征了该化合物，作为TGF-β信号通路抑制剂筛选的一部分[1]。 A-77-01抑制I型丝氨酸/苏氨酸激酶受体ALK-5（TGF-β I型受体）、ALK-4（激活素IB型受体）和ALK-7（结节I型受体）的信号传导，这些受体的激酶结构域在结构上高度相关[1]。该化合物可阻止Smad2/3磷酸化和TGF-β诱导的生长抑制，同时在有效阻断TGF-β信号通路的浓度下，对BMP I型受体、p38 MAPK或ERK几乎没有影响[1]。 A-77-01抑制TGF-β诱导的NMuMG细胞上皮-间质转化（EMT），恢复E-钙黏蛋白的表达并抑制……纤连蛋白和N-钙黏蛋白的表达。这表明其在预防癌症进展和转移方面具有潜在应用价值[1]。 A-77-01抑制TGF-β诱导的转录激活的效力是先前报道的ALK-5抑制剂SB-431542的5到10倍[1]。

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C18H14N4
分子量	286.33
精确质量	286.122
CAS号	607737-87-1
PubChem CID	10469233
外观&性状	Off-white to light yellow solid powder
密度	1.254g/cm3
沸点	481.63ºC at 760 mmHg
闪点	256.391ºC
折射率	1.685
LogP	3.995
tPSA	54.46
氢键供体(HBD)数目	1
氢键受体(HBA)数目	3
可旋转键数目(RBC)	2
重原子数目	22
分子复杂度/Complexity	374
定义原子立体中心数目	0
InChi Key	KJTYZDORHCDZPS-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C18H14N4/c1-12-5-4-8-17(21-12)18-15(11-20-22-18)13-9-10-19-16-7-3-2-6-14(13)16/h2-11H,1H3,(H,20,22)
化学名	4-[5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-pyrazol-4-yl]quinoline
别名	A77-01 A-77-01 A 77-01
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO : ~25 mg/mL (~87.31 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.5 mg/mL (8.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More* 配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO : ~25 mg/mL (~87.31 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	3.4925 mL	17.4624 mL	34.9247 mL
	5 mM	0.6985 mL	3.4925 mL	6.9849 mL
	10 mM	0.3492 mL	1.7462 mL	3.4925 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

A‐77‐01 (11) and A‐83‐01 (15) effectively inhibited TGF‐β‐induced transcriptional activation in concentration‐dependent fashion. (a, b) Mv1Lu cells were transfected with 9xCAGA‐luciferase reporter gene. Eight hours after transfection, cells were pretreated for 1 h with various concentrations of A‐77‐01 (11) (a) or A‐83‐01 (15) (b), or 0.3 µM SB‐431542, then cultured with TGF‐β 1 ng/mL) for 24 h. (c) C2C12 cells were transfected with (BRE)2‐luciferase reporter gene. Eight hours after transfection, cells were pretreated for 1 h with various concentrations of A‐77‐01 (11) (a) or A‐83‐01 (15) (b), or 1 µM SB‐431542, then cultured with BMP 20 ng/mL) for 24 h. Smad7 (0.15 µg) was transfected into Mv1Lu cells and used as a control (lane 10). Luciferase activities (% of control) are the means of results of duplicate assays, with error bars representing standard deviation.[1].Tojo M, et al. The ALK-5 inhibitor A-83-01 inhibits Smad signaling and epithelial-to-mesenchymal transition by transforming growth factor-beta. Cancer Sci. 2005 Nov;96(11):791-800.

A‐83‐01 (15) prevented the growth‐inhibitory effects of TGF‐β. (a) Mv1Lu cells were pretreated for 1 h with 1 µM of A‐77‐01 (11), A‐83‐01 (15), or SB‐431542, cultured with TGF‐β 1 ng/mL) for 24 h, 48 h or 72 h, and cell numbers were counted. (b) Mv1Lu cells were pretreated for 1 h with various concentrations of A‐83‐01 (15) or SB‐431542, cultured with TGF‐β 1 ng/mL) for 48 h, and cell numbers were counted.[1].Tojo M, et al. The ALK-5 inhibitor A-83-01 inhibits Smad signaling and epithelial-to-mesenchymal transition by transforming growth factor-beta. Cancer Sci. 2005 Nov;96(11):791-800.

Effects of A‐83‐01 (15) and A‐77‐01 (11) on Smad2 phosphorylation and MAPK activities. (a) A‐77‐01 (11) and A‐83‐01 (15) inhibited TGF‐β‐induced phosphorylation of Smad2. HaCaT cells were pretreated for 30 min with 1 µM of A‐77‐01 (11), A‐83‐01 (15), or SB‐431542, and then treated for 1 h with TGF‐β 1 ng/mL). Cell lysates were subjected to immunoblotting with an antiphospho‐Smad2 antibody (top panel) or anti‐Smad2/3 antibody (lower panel). (b) A‐77‐01 (11) and A‐83‐01 (15) had no significant effect on fetal bovine serum (FBS)‐induced activation of ERK1 and ERK2. HaCaT cells were serum‐starved for 24 h and pretreated for 30 min with various concentrations of A‐77‐01 (11) or A‐83‐01 (15), or 10 µM MEK1/2 inhibitor U0126, followed by treatment with 20% FBS for 30 min. Cell lysates were subjected to immunoblotting with antiphospho‐ERK1/2 antibody (upper panel) or anti‐ERK1/2 antibody (lower panel). [1].Tojo M, et al. The ALK-5 inhibitor A-83-01 inhibits Smad signaling and epithelial-to-mesenchymal transition by transforming growth factor-beta. Cancer Sci. 2005 Nov;96(11):791-800.