AB-423

HBV capsid
Hepatitis B Virus (HBV) core protein dimer-dimer interface (EC₅₀ = 0.08–0.27 μM; EC₉₀ = 0.33–1.32 μM) [1]

体外活性：AB-423 是 HBV 衣壳组装的有效抑制剂，对 AML12-HBV10 和 HepDE19 细胞中的 rcDNA 产生具有抑制作用，EC50 约为 0.260 μM。 AB-423 还在 HepBHAe82 测定中抑制 cccDNA 形成依赖性 HBeAg 产生，EC50 为 0.267 μM，并抑制 HepG 2.2.15 细胞培养上清液中的 HBV DNA 水平，EC50 为 0.134 μM。然而，AB-423 在这三种细胞系中均没有细胞毒性。激酶测定：细胞测定：将 HepBHAe82（50,000 个细胞/孔）铺在 96 孔组织培养处理的微量滴定板中，加入 DMEM/F12 培养基，补充有 10% 胎牛血清、1% 青霉素-链霉素和四环素 (1 μg/mL) ），并在 37°C 和 5% CO2 的加湿培养箱中培养过夜。第二天，将细胞转移到新鲜培养基中，并用抑制剂 A 和抑制剂 B 处理，浓度范围在各自的 EC50 值附近。抑制剂在 100% DMSO（ETV、TDF 和 AB-423）或生长培养基（ARB-1467 和 ARB-1740）中稀释，测定中的最终 DMSO 浓度≤0.5%。对这两种抑制剂进行了单独和组合测试，以确定它们对 rcDNA 产生的抑制作用。测定中的最终 DMSO 浓度为 0.5%。将板在 37°C 和 5% CO2 的加湿培养箱中孵育 9 天。孵育 9 天后，除去培养基，对细胞进行 RNA 提取，以测量 cccDNA 依赖性前核心 mRNA 水平

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AB-423在细胞培养模型中强效抑制HBV复制，EC₅₀为0.08–0.27 μM，EC₉₀为0.33–1.32 μM；未观察到明显细胞毒性（半数细胞毒性浓度>10 μM）[1]
加入40%人血清后，AB-423的EC₅₀升高5倍[1]
AB-423在体外可有效抑制HBV A至D基因型及核苷（酸）类似物耐药变异株[1]
用AB-423（3 μM）处理HepDES19细胞6天，产生的衣壳颗粒中不含封装的前基因组RNA（pgRNA）和松弛环状DNA（rcDNA），证实其为II类衣壳抑制剂[1]
在C3Aᵏᴺᵀᶜᴾ细胞（新发感染模型）中，感染前24小时开始至感染后第6天持续给予AB-423（3 μM），可抑制封装的rcDNA向共价闭合环状DNA（cccDNA）转化；与DMSO处理组相比，cccDNA拷贝数和pgRNA水平均降低[1]
在生化HBV衣壳组装实验中，AB-423以剂量依赖性方式调节衣壳组装，采用8点稀释系列（起始浓度30 μM，1/2对数级连续稀释），每组设3个复孔[1]
体外双重联合实验显示，AB-423与抗HBV药物（核苷（酸）类似物：恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯；RNA干扰药物：ARB-1467、ARB-1740；α干扰素）在多种细胞实验（AML12-HBV10、HepDES19、HepBHAe82细胞）中均表现出相加至协同的抗病毒活性[1]

AB-423（30 和 100 mg/kg，每日两次）可抑制 HBV 小鼠模型中的 HBV 复制。 AB-423（100 mg/kg，每日两次）与恩替卡韦（ETV，100 ng/mg，每日一次，口服）或 0.1 mg/kg 剂量的 ARB-1467 联用可有效抑制免疫缺陷 NOD 中 HBV HDI 模型中的血清 HBV DNA -SCID小鼠。

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在CD-1小鼠中，单次静脉注射（i.v.）或口服（p.o.）给予AB-423后，药物具有显著的全身暴露量，且在肝脏中积累水平更高[1]
在 hydrodynamic injection（HDI）HBV感染小鼠模型中，AB-423每日两次给药，连续7天，可剂量依赖性降低血清HBV DNA水平[1]
在HDI小鼠模型中，AB-423与恩替卡韦或ARB-1467联合使用时，抗病毒活性呈优于单一药物的趋势，与体外联合实验结果一致[1]

将AB-423分子对接至杂芳基二氢嘧啶类和磺酰胺苯甲酰胺类（SBA）的晶体结构中，预测其与HBV核心蛋白二聚体-二聚体界面的结合模式[1]
开展生化HBV衣壳组装实验，AB-423采用8点剂量范围（起始浓度30 μM，1/2对数级连续稀释），每组设3个复孔；通过检测衣壳组装调节情况评估剂量-效应活性[1]

HepBHAe82（50,000 个细胞/孔）接种于 96 孔组织培养处理的微量滴定板中，培养基中含有 1% 青霉素-链霉素、1% 胎牛血清和 1% 四环素 (1 μg/mL)。然后将细胞在 37°C 和 5% CO2 的加湿培养箱中培养一整夜。这样做是为了测试化合物组合。第二天，将细胞转移至新鲜培养基后，用抑制剂 A 和 B 进行处理，浓度范围接近各自的 EC50 值。抑制剂在生长培养基（ARB-1467 和 ARB-1740）或 100 % DMSO（ETV、TDF 和 AB-423）。该测定的最终 DMSO 浓度≤0.5%。单独和组合评估两种抑制剂对 rcDNA 产生的抑制作用。在测定中，最终DMSO浓度为0.5%。将板在 5% CO2 和 37°C 的加湿培养箱中保存 9 天。孵育 9 天后，除去培养基，并对细胞进行 RNA 提取，以量化依赖于 cccDNA 的前核心 mRNA 水平[1]。

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用AB-423（3 μM）、DMSO（溶媒）、GLS-4或3TC处理HepDES19细胞6天；提取并分析细胞内病毒RNA（采用HBV特异性³²P标记核糖探针的Northern印迹法）、封装的pgRNA（Northern印迹法）、细胞内HBV核心蛋白（Western印迹法）、总核衣壳（颗粒凝胶实验）及HBV DNA复制中间体（rcDNA、ssDNA；Southern印迹法）；以18S和28S rRNA作为内参[1]
用AB-423（3 μM）、DMSO、myrcludex B（100 nM）或IFN-α（1000 IU/ml）处理C3Aᵏᴺᵀᶜᴾ细胞，感染前24小时开始至感染后第6天持续给药；收集细胞并通过qPCR定量cccDNA、定量RT-PCR定量pgRNA[1]
在AML12-HBV10、HepDES19或HepBHAe82细胞中，将AB-423与核苷（酸）类似物、RNAi药物或IFN-α联合处理；采用棋盘格协同图（MacSynergy II分析）和抗病毒剂量-效应曲线评估相加/协同效应，每组设4个复孔[1]

Mice
NOD receives 10 micrograms of the plasmid pHBV1.3 prior to the start of treatment.hydrodynamic injection (HDI; fast, high-volume injection into the tail vein; n = 6–8 animals per group) of CB17-Prkdcscid/J mice. Hepatitis B virus particles and other HBV products are produced when the 1.3-fold overlength copy of the HBV genotype D genome contained in this plasmid is expressed. Beginning on Day 0, AB-423 is given orally twice a day for seven days at a dose of 30 or 100 mg/kg. Beginning on Day 0, entecavir (ETV) at 100 ng/kg once daily for seven days in a row. On Day 0, a single intravenous bolus tail vein injection of ARB-1467 at a dose of 0.1 mg/kg is given. Days 0 (pre-dose), 4, and 7 are when blood is drawn for HBV biomarker analysis. Through the use of primer/probe sequences in a quantitative PCR assay, the amount of HBV DNA present in mouse serum is determined from the total extracted DNA[1].

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Conduct pharmacokinetic studies in CD-1 mice by administering a single i.v. or p.o. dose of AB-423; collect plasma samples at different time points to measure drug concentrations (mean ± SD, n=3 per group) [1]
Establish the HDI mouse model of HBV infection; administer AB-423 twice daily via oral gavage for 7 days (starting on day 0) at different doses; measure serum HBV DNA levels to assess dose-dependent antiviral activity (n=5–6 per group) [1]
For combination studies in the HDI mouse model: administer AB-423 twice daily via oral gavage for 7 days, entecavir once daily via oral gavage for 7 days (both starting on day 0), or ARB-1467 as a single i.v. bolus tail vein injection on day 0; measure serum HBV DNA and HBsAg levels relative to predose (day 0) values (n=4–8 per group) [1]

AB-423 exhibits significant systemic exposure in CD-1 mice after single i.v. or p.o. administration [1]
AB-423 shows higher accumulation levels in the liver of CD-1 mice compared to systemic circulation [1]

AB-423 has no significant cytotoxicity in vitro, with a 50% cytotoxic concentration greater than 10 μM [1]

[1]. Preclinical profile of AB-423, an inhibitor of Hepatitis B virus pgRNA encapsidation. Antimicrob Agents Chemother. 2018 May 25;62(6):e00082-18.

AB-423 is a member of the sulfamoylbenzamide (SBA) class of HBV capsid inhibitors, with the chemical structure (R)-5-[N-(sec-butyl)sulfamoyl]-N-(3,4-difluorophenyl)-2-fluorobenzamide [1]
It acts as a class II capsid inhibitor by interfering with HBV pgRNA encapsidation and capsid uncoating, preventing the formation of functional capsids and the conversion of rcDNA to cccDNA [1]
Biochemical studies and molecular docking suggest AB-423 binds to the dimer-dimer interface of the HBV core protein [1]
AB-423 is in phase 1 clinical trials for the treatment of chronic hepatitis B, with a preclinical profile supporting further evaluation of safety, pharmacokinetics, and antiviral activity in patients [1]

C17H17F3N2O3S

386.39

386.09

C, 52.84; H, 4.43; F, 14.75; N, 7.25; O, 12.42; S, 8.30

1572510-80-5

90259477

White to off-white solid powder

3.4

83.6

2

7

6

26

584

1

CC[C@@H](C)NS(=O)(=O)C1=CC(=C(C=C1)F)C(=O)NC2=CC(=C(C=C2)F)F

BBLXLHYPDOMJMO-SNVBAGLBSA-N

InChI=1S/C17H17F3N2O3S/c1-3-10(2)22-26(24,25)12-5-7-14(18)13(9-12)17(23)21-11-4-6-15(19)16(20)8-11/h4-10,22H,3H2,1-2H3,(H,21,23)/t10-/m1/s1

(R)-5-(N-(sec-Butyl)sulfamoyl)-N-(3,4-difluorophenyl)-2-fluorobenzamide

AB-423; AB 423; AB423

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 77~100 mg/mL ( 199.28~258.81 mM )
Ethanol : ~77 mg/mL
Water : ˂1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 10% DMSO+90% Corn Oil: ≥ 2.5 mg/mL (6.47 mM)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。