AC-73

CD147
CD147 (basigin, EMMPRIN) [2]

AC-73（5-10 μM；24 小时）处理可显著降低 SMMC-7721 和 Huh-7 细胞的迁移能力，且呈剂量依赖性，并抑制两种肝癌细胞的侵袭能力。这些作用在 24 小时内即可观察到。AC-73 处理可减少肝癌转移。以最高剂量 20 μM 的 AC-73 处理两种肝癌细胞，并未显著影响细胞活力。CD147 二聚体界面上的 N 端 IgC2 结构域中的 Glu64 和 Glu73 是 AC-73 在 CD147 上的潜在结合位点 [1]。在 10 μM 的剂量下，AC-73（5-10 μM；24 小时；SMMC-7721 细胞）处理可显著降低 MMP-2 和 MMP-9 的 mRNA 表达，其中 MMP-2 受影响最大，而 MMP-9 则无明显变化。 1. MMP-11、MMP-13、MMP-7 或 MMP-8。明胶酶谱分析和 RT-qPCR 分析表明，AC-73 可剂量依赖性地降低 MMP-2 mRNA 的表达和蛋白分泌 [1]。AC-73（5–20 μM；6 小时；SMMC-7721 细胞）处理可剂量依赖性地抑制 ERK1/2 和 STAT3 的磷酸化 [1]。AC-73 以时间和剂量依赖的方式抑制白血病细胞增殖。在 AML 细胞系（U937、NB4、HL-60、NB4-R4、MV4-11、Kasumi-1）中，用 2.5、5 和 10 μM 的 AC-73 处理 1–4 天可降低细胞生长。 NB4 和 NB4-R4 细胞对 AC-73 更为敏感（2.5 μM 时即可观察到显著的生长抑制），而 MV4-11 和 Kasumi-1 细胞则需要更高的浓度（5–10 μM）或更长的处理时间（3–4 天）才能观察到显著的抑制作用。[2] - AC-73 以剂量依赖的方式诱导白血病细胞凋亡，Annexin V/PI 流式细胞术检测结果显示，低剂量（2.5 μM）下 NB4 和 NB4-R4 细胞的凋亡率高于 U937 和 HL-60 细胞。[2] - AC-73 可降低 AML 细胞系的细胞活力。对于 NB4 和 NB4-R4 细胞，2.5 μM 的 AC-73 可随时间推移（第 1–3 天）降低细胞活力。而对于 U937 和 HL-60 细胞，则需要更高的剂量（5–10 μM）。 [2] AC-73 不影响白血病细胞系的细胞周期分布。[2] AC-73 不诱导白血病细胞系分化（CD11b、CD14、CD15 表达无显著变化）。[2] AC-73 (5 μM) 降低 U937 和 NB-4 细胞的体外集落形成能力，表明其抑制了克隆形成能力。[2] AC-73 诱导白血病细胞自噬。Western blot 显示 U937 和 NB-4 细胞中 LC3-II/LC3-I 比值呈剂量依赖性增加。流式细胞术结合 Cyto-ID 检测证实，在表达 CD147 的白血病细胞中，AC-73 以剂量依赖性方式诱导自噬（0、2.5、5、10 μM，处理 72 小时），但在 CHO 细胞（CD147 阴性）中未观察到此现象。 [2]
- AC-73（5 μM，处理 3 天）可降低白血病细胞系（U937、NB4、MV4-11）中磷酸化 ERK1/2 和磷酸化 STAT3 (S727) 的水平，而不影响总 ERK 和 STAT3 的水平。[2]
- AC-73（2.5 μM，处理 24 小时，随后与 Ara-C 或 ATO 联合处理 48 小时）可增强白血病细胞对化疗的敏感性。与 Ara-C (0.01–1 μM) 或 ATO (0.01–1 μM) 联合用药可显著降低所有细胞系（U937、HL-60、NB4、NB4-R4、MV4-11、Kasumi-1）中单药治疗的细胞活力。即使在对 Ara-C 敏感性较低的细胞系（MV4-11、Kasumi-1）中，AC-73 也能增强其敏感性。 [2]
- 与单药或对照组相比，AC-73 与 ATO 联用可增加 M3 (NB4) 和非 M3 (U937) 白血病细胞的自噬通量。[2]
- 在原发性 AML 原始细胞（M2、M3、M5 亚型）中，10 μM 的 AC-73 单独使用可诱导细胞凋亡，但较低剂量（2.5、5 μM）则无此作用。然而，AC-73 (2.5–5 μM) 可诱导自噬（LC3-II/LC3-I 比值升高）。低剂量 AC-73 (2.5 μM) 与 ATO 或 Ara-C (0.1–1 μM) 联用比单药更能有效地降低原始细胞的活力。[2]
- AC-73 (5 μM) 对正常 CD34+ 造血祖细胞 (HPC) 具有中等程度的生长抑制作用，但不影响细胞周期或分化。形态学分析显示粒细胞和单核细胞分化进程正常。[2] AC-73 对 CHO 细胞（CD147 阴性）的生长和凋亡无影响。[2]

AC-73治疗（25–50 mg/kg；4周；雄性BALB/c nu/nu小鼠）显著降低了裸鼠的转移发生率。AC-73以剂量依赖的方式抑制STAT3和ERK1/2的磷酸化。此外，AC-73降低了MMP-2的表达。AC-73不能抑制体内肿瘤细胞的生长[1]。在原位移植裸鼠模型（将SMMC-7721细胞注射到左肝叶）中，于移植后1周开始治疗。与载体（Cremophor EL/乙醇）相比，AC-73（25或50 mg/kg/天）显著降低了肝内转移灶的发生率，该结果通过大体病理学评估得出[1]。
- AC-73以剂量依赖的方式抑制原位肿瘤中ERK1/2和STAT3的磷酸化，Western blot和免疫组织化学（IHC）分析均证实了这一点[1]。
- AC-73还降低了组织中MMP-2的表达（IHC），而CD147的表达在各组间无显著差异[1]。
- 通过计算原位转移灶的最大肿瘤直径确定，AC-73在体内不抑制肿瘤细胞增殖[1]。

表面等离子共振 (SPR) 检测[1]
使用 ProteOn XPR36 系统和 ProteOn GLH 传感器芯片进行 SPR 测量。所有实验均使用含 0.1% DMSO 的 ProteOn PBS/Tween 运行缓冲液（磷酸盐缓冲液，pH 7.4，含 0.005% Tween 20）作为运行缓冲液，并在 25°C 下进行。将纯化的 CD147wt 或 CD147mt 固定在 GLH 芯片上。每种化合物均以相同浓度 (100 μM) 使用，并同时沿水平方向注入，同时注入运行缓冲液作为对照。监测解离情况 15 分钟。使用 ProteOn Manager 软件 2.0 版分析数据。

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非变性 SDS-PAGE 检测[1]
为了评估 AC-73 是否能抑制原核表达系统中 CD147 的二聚化，我们按照先前描述的方法，采用非变性 SDS-PAGE 和 Western blot 检测。 CD147wt 和 CD147mts 均被纯化，取 5 μg 分别加入不同浓度的 AC-73（0、0.1、0.25 或 0.5 μM）中，并与不含 SDS 的 5× Laemmli 样品缓冲液混合，然后进行 10% SDS-PAGE 电泳分离（无需煮沸），并用抗 His6 抗体进行免疫印迹分析。

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非变性 SDS-PAGE 实验：为了评估 AC-73 是否能在原核表达系统中抑制 CD147 二聚化，我们纯化了野生型 CD147 (CD147wt) 和 CD147 突变体 (CD147mts)。将 5 μg 的每种蛋白质加入到不同浓度的 AC-73（0、0.1、0.25 或 0.5 μM）中，并与非变性上样缓冲液混合，然后进行 10% SDS-PAGE 电泳分离（无需煮沸），最后用抗 His 抗体进行免疫印迹分析。观察到 CD147wt 的两条主要条带（单体位于 21 kDa，二聚体位于 42 kDa）[1]。
- 表面等离子共振 (SPR) 检测：使用配备 GLH 传感器芯片的 ProteOn XPR36 系统进行 SPR 测量。将纯化的 CD147wt 或 CD147mt 固定在 GLH 芯片上。每种化合物均以相同浓度 (100 μM) 使用，并同时进样。监测解离过程 15 分钟。 AC-73 与 CD147wt 的结合表现出较高的响应单位 (RU)，而与 CD147mts (E64A, E73A) 的结合则可忽略不计 [1]。
- 分子对接和能量计算：结合模拟显示，AC-73 与活性位点中的两个氨基酸残基（Glu64 和 Glu73）之间存在多个氢键。使用 Glide 软件计算了距离 AC-73 10 Å 范围内残基的相互作用得分，结果表明 Glu64 和 Glu73 的预测能量贡献最大（分别为 -49.4590 和 -35.8100）[1]。

RT-PCR[1]
细胞类型： SMMC-7721 细胞
测试浓度： 5 μM 或 10 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 在 10 μM 浓度下，MMP-2 和 MMP-9 的 mRNA 表达显著受到抑制。RT-qPCR 分析和明胶酶谱实验表明，MMP-2 的 mRNA 表达和蛋白分泌均呈剂量依赖性降低。

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蛋白质印迹分析[1]
细胞类型：SMMC-7721细胞
测试浓度：5 μM、10 μM 或 20 μM
孵育时间：6 小时
实验结果：ERK1/2 和 STAT3 的磷酸化呈剂量依赖性抑制。

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细胞培养和 AC-73 处理：人 AML 细胞系（U937、NB4、HL-60、NB4-R4、MV4-11、Kasumi-1）培养于含 10% FCS 的 RPMI 培养基中。AC-73 溶于 20% DMSO，并用 DMEM 稀释（最终 DMSO 浓度 ≤0.2%）。为了研究剂量反应和时间进程，将细胞用浓度分别为 1.0、2.5、5.0 和 10 μM 的 AC-73 处理 1 至 4 天，每 2 天添加一次 AC-73 以维持活性。对照组细胞接受 0.2% DMSO 处理。[2]
- 细胞生长、活力和凋亡：通过细胞计数评估细胞生长。使用台盼蓝排除法或类似方法测定细胞活力，结果以相对于对照组的活细胞百分比表示。通过 Annexin V/PI 双染和流式细胞术检测细胞凋亡。[2]
- 细胞周期分析：使用碘化丙啶染色后，通过流式细胞术分析细胞周期分布。[2]
- 分化分析：通过流式细胞术检测 AC-73 处理的白血病细胞中 CD11b、CD14 和 CD15 的表达。 [2]
- 克隆形成实验：用 5 μM AC-73 处理 U937 和 NB-4 细胞，并在半固体培养基中评估克隆形成情况。[2]
- 自噬检测：使用 Cyto-ID 自噬检测试剂盒通过流式细胞术监测自噬通量。细胞用 AC-73 处理 72 小时。此外，还进行了 LC3-I 向 LC3-II 转化的蛋白质印迹分析。[2]
- 蛋白质印迹分析：分析 CD147、pERK、ERK、pSTAT3(S727)、STAT3、LC3 和肌动蛋白的蛋白表达。细胞单独用 AC-73（5 μM，3 天）处理，或与 Ara-C（1 μM）或 ATO（1 μM）联合处理。 [2]
- 联合治疗：细胞预先用 AC-73 (2.5 μM) 处理 24 小时，然后与 Ara-C (0.01、0.1、1 μM) 或 ATO (0.01、0.1、1 μM) 共同处理 1 天（NB4、NB4-R4 细胞）或 2 天（U937、HL-60、MV4-11、Kasumi-1 细胞）。随后评估细胞活力。[2]
- 原代 AML 原始细胞培养：人原代 AML 原始细胞在添加了 10% FCS、GM-CSF (10 ng/mL)、SCF (50 ng/mL) 和 IL-3 (10 ng/mL) 的 Iscoe 培养基中培养。AC-73 处理方法类似。 [2]
- 正常造血祖细胞培养和 AC-73 处理：纯化脐带血 CD34+ 造血祖细胞，并在粒细胞或单核细胞分化条件下进行培养。每 2 天添加一次 AC-73 (5 μM)。分析细胞生长、周期、表型（CD11b、CD15、CD14）和形态（May-Grünwald-Giemsa 染色）。[2]

动物/疾病模型：雄性BALB/c nu/nu（裸鼠）（4-6周龄），SMMC-7721细胞[1]
剂量：25 mg/kg，50 mg/kg
给药途径：注射；每日一次；连续3周
实验结果：显著降低裸鼠的转移发生率。以剂量依赖的方式抑制ERK1/2和STAT3的磷酸化。 MMP-2 也减少。

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对于体内实验，AC-73 以最高剂量的 4 倍浓度溶解于 Cremophor EL/乙醇 (50:50；Cremophor EL，95% 乙醇) 中，并储存于室温。[1]
建立原位移植裸鼠肝细胞癌转移模型[1]
雄性 BALB/c nu/nu 小鼠，4 至 6 周龄，由 FMMU 实验动物研究中心提供，动物实验方案经 FMMU 动物伦理委员会审查批准。小鼠饲养于标准动物实验室，环境条件恒定，包括 12 小时光照/12 小时黑暗循环，并可自由获取水和食物。将 SMMC-7721 细胞 (1 × 10⁶) 与等体积稀释的 Matrigel 混合于 0.1 ml 培养基中，注射到裸鼠左肝叶。植入后1周开始治疗。小鼠分为三组：载体对照组（Cremophor EL/乙醇）、AC-73组（25 mg/kg/天）和AC-73组（50 mg/kg/天）。植入后4周处死小鼠。计算肝内转移灶的数量并进行统计分析。然后将肿瘤组织固定、石蜡包埋，并进行4 mm厚的连续切片。进行免疫组化染色，并由病理学家检查切片以确认肿瘤的存在。

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毒性试验[1]
将6周龄雄性裸鼠随机分为4组（n = 5）。小鼠分别注射生理盐水（对照组）、Cremophor EL/乙醇（载体）、25 mg/kg/天和50 mg/kg/天的AC-73。每日记录每只小鼠的体重。 20天后，处死小鼠，并将选定的组织用4%多聚甲醛固定。取出的心脏、肺、睾丸、脾脏、肾脏和肝脏进行连续组织切片，并用苏木精-伊红（H&E）染色。使用商业化的AST或ALT检测试剂盒，通过提取眼球血测定血清GPT/ALT和GOT/AST的浓度。采用TUNEL染色（TUNEL染色试剂盒）检测肝组织细胞凋亡。

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原位移植裸鼠HCC转移模型：使用4-6周龄的雄性BALB/c nu/nu小鼠。将SMMC-7721细胞（1 × 10^6）溶于0.1 ml培养基和Matrigel的混合物注射到左肝叶。移植后1周开始治疗。小鼠被分为三组：载体对照组（Cremophor EL/乙醇）、AC-73组（25 mg/kg/天）和AC-73组（50 mg/kg/天）。植入4周后处死小鼠。计算肝内转移灶的数量。肿瘤组织经固定、石蜡包埋、切片后进行免疫组化（IHC）检测[1]。
- 毒性试验：将6周龄雄性裸鼠分为4组（n=5），分别注射生理盐水（对照组）、Cremophor EL/乙醇（载体）、25 mg/kg/天或50 mg/kg/天的AC-73。每日记录体重。20天后处死小鼠。取组织（心脏、肺、睾丸、脾脏、肾脏、肝脏）进行固定、切片，并进行苏木精-伊红（H&E）染色。测定血清ALT和AST水平。采用TUNEL染色法检测肝组织细胞凋亡[1]。

在正常的CD34+造血祖细胞（HPC）中，5 μM的AC-73可适度抑制细胞生长，但不影响细胞周期、分化或引起形态异常。[2] AC-73对CHO细胞（CD147阴性细胞系）的生长和凋亡没有可检测到的影响。[2]

[1]. A novel small-molecule compound targeting CD147 inhibits the motility and invasion of hepatocellular carcinoma cells. Oncotarget. 2016 Feb 23;7(8):9429-47.

[2]. The small-molecule compound AC-73 targeting CD147 inhibits leukemic cell proliferation, induces autophagy and increases the chemotherapeutic sensitivity of acute myeloid leukemia cells. Haematologica. 2019 May;104(5):973-985.

AC-73 是一种小分子化合物（3-[2-[(1,1'-联苯]-4-基甲基)氨基]-1-羟乙基]苯酚），被认为是一种特异性 CD147 抑制剂。[2]
- 该化合物通过抑制 ERK/STAT3 激活通路和激活非凋亡性自噬性细胞死亡来抑制白血病细胞增殖。[2]
- AC-73 可增强 AML 细胞对阿糖胞苷 (Ara-C) 和三氧化二砷 (ATO) 的化疗敏感性，从而降低这些药物的浓度。[2]
- AC-73 可增强 M3 型和非 M3 型白血病细胞中 ATO 诱导的自噬。[2]
- CD147 在 CD34⁺CD371⁺ AML 细胞（潜在的白血病干细胞）中表达，提示 AC-73 可能靶向白血病干细胞。 [2]
该研究提出AC-73作为一种潜在的抗白血病药物，可用于治疗急性髓系白血病（AML），尤其适用于与传统化疗联合使用。未来需要利用动物模型进行毒理学和药效学研究，以进行临床前评估。[2]

C21H21NO2

319.396945714951

319.157

C, 78.97; H, 6.63; N, 4.39; O, 10.02

775294-71-8

775294-71-8;

2989791

White to off-white solid powder

2.8

52.5

3

3

6

24

348

0

C1=CC=C(C=C1)C2=CC=C(C=C2)CNCC(C3=CC(=CC=C3)O)O

UECKKYNEEBRMIL-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H21NO2/c23-20-8-4-7-19(13-20)21(24)15-22-14-16-9-11-18(12-10-16)17-5-2-1-3-6-17/h1-13,21-24H,14-15H2

3-{2-[(Biphenyl-4-ylmethyl)-amino]-1-hydroxy-ethyl}-phenol

AC-73; AC 73; AC73

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 250 mg/mL (~782.72 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.51 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.51 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.51 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。