Ac-DEVD-AFC

Fluorogenic substrate

小时后，与 1 小时后的对照组相比，Ac-DEVD-AFC 组的 caspase-3 活性显着升高。 Photofrin 和 LPLI 组的 caspase-3 活性没有表现出统计学上显着的升高。当 caspase-3 被激活时，通过转染 shRNA-BiML 可以显着减少 Ac-DEVD-AFC 的破坏 [1]。

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为了进一步证实上述观察结果，应用了AFC（半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3激活的指标）释放试验。活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（而非前半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3）确实对Ac-DEVD-AFC底物产生蛋白水解激活。如图3E所示，与对照组相比，在用Ac-DEVD-AFC孵育1小时后，PPT后4小时观察到半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活性显著增加（第5列）。Photofrin和LPLI组的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活性没有显著增加（第2列和第3列）。shRNA-BimL转染显著抑制了响应半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3激活的Ac-DEVD-AFC的切割（第6列）。这些结果表明，Bim参与了PPT诱导的caspase-3活性，这与蛋白质印迹分析的结果一致[1]。

荧光法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活性[1]
为了检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活性，将PBS洗涤的细胞沉淀（来源于培养基或贴壁细胞）重新悬浮在提取缓冲液[25 mM HEPES（pH7.4）、0.1%TritonX-100、10%甘油、5 mM DTT、1mM苯甲基磺酰氟、10 mg/ml pepstatin和10 mg/ml Leupeptin]中，并剧烈涡旋。在室温下，将20μl提取物（相当于样品的10%）与终浓度为100μM的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3荧光底物Ac-DEVD-AFC一起孵育，并通过监测37°C下荧光AFC的释放来连续测量半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3活性。使用自动酶标仪，AFC的激发波长为400nm，发射波长为530nm。作为确认和比较我们实验中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3检测的平行研究，将一批细胞暴露于紫外线照射下，这是一种公认的诱导凋亡的方案。对于紫外线照射诱导的细胞凋亡，去除培养基，用PBS冲洗细胞，以120 mJ/cm2（253.7 nm，200μW/cm2）的通量照射，然后恢复培养基。

[1]. Involvement of Bim in Photofrin-mediated photodynamically induced apoptosis. Cell Physiol Biochem. 2015;35(4):1527-36.

Background/aims: Photodynamic therapy (PDT) is a promising noninvasive technique, which has been successfully applied to the treatment of human cancers. Studies have shown that the Bcl-2 family proteins play important roles in PDT-induced apoptosis. However, whether Bcl-2-interacting mediator of cell death (Bim) is involved in photodynamic treatment remains unknown. In this study, we attempt to determine the effect of Bim on Photofrin photodynamic treatment (PPT)-induced apoptosis in human lung adenocarcinoma ASTC-a-1 cells.
Methods: The translocation of Bim/Bax of the cells were monitored by laser confocal scanning microscope. The levels of Bim protein and activated caspase-3 in cells were detected by western blot assay. Caspase-3 activities were measured by Caspase-3 Fluorogenic Substrate (Ac-DEVD-AFC) analysis. The induction of apoptosis was detected by Hoechst 33258 and PI staining as well as flow cytometry analysis. The effect of Bim on PPT-induced apoptosis was determined by RNAi.
Results: BimL translocated to mitochondria in response to PPT, similar to the downstream pro-apoptotic protein Bax activation. PPT increased the level of Bim and activated caspase-3 in cells and that knockdown of Bim by RNAi significantly protected against caspase-3 activity. PPT-induced apoptosis were suppressed in cells transfected with shRNA-Bim.
Conclusion: We demonstrated the involvement of Bim in PPT-induced apoptosis in human ASTC-a-1 lung adenocarcinoma cells and suggested that enhancing Bim activity might be a potential strategy for treating human cancers. [1]

C30H34N5O13F3

729.611860000001

729.21

201608-14-2

644234

N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-7-amido-4-trifluoroMethylcoumarin

DEVD; Ac-DEVD-7-amido-4-trifluoroMethylcoumarin

Light yellow to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1152.7±65.0 °C at 760 mmHg

650.9±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.575

1.58

287.61

8

16

17

51

1430

4

CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NC1=CC2=C(C=C1)C(=CC(=O)O2)C(F)(F)F)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)C

GZDRODOYEFEHGG-NUDCOPPTSA-N

InChI=1S/C30H34F3N5O13/c1-12(2)25(38-26(47)17(6-7-21(40)41)36-28(49)18(10-22(42)43)34-13(3)39)29(50)37-19(11-23(44)45)27(48)35-14-4-5-15-16(30(31,32)33)9-24(46)51-20(15)8-14/h4-5,8-9,12,17-19,25H,6-7,10-11H2,1-3H3,(H,34,39)(H,35,48)(H,36,49)(H,37,50)(H,38,47)(H,40,41)(H,42,43)(H,44,45)/t17-,18-,19-,25-/m0/s1

(4S)-4-[[(2S)-2-acetamido-3-carboxypropanoyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-oxo-1-[[2-oxo-4-(trifluoromethyl)chromen-7-yl]amino]propan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid

Ac-DEVD-AFC; Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AFC; 201608-14-2; MFCD01310970; N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-7-amido-4-trifluoromethylcoumarin; (4S)-4-[[(2S)-2-acetamido-3-carboxypropanoyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-oxo-1-[[2-oxo-4-(trifluoromethyl)chromen-7-yl]amino]propan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid; Ac-Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-trifluoromethylcoumarin; SCHEMBL1180114;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 50 mg/mL (~68.53 mM)
H2O : ~0.67 mg/mL (~0.92 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。