Acetylcysteine amide   中文名称: N-乙酰-L-胱氨酸

NACA is a thiol antioxidant that reduces oxidative stress by increasing glutathione levels, scavenging reactive oxygen species, and restoring antioxidant enzyme activities. [1]

N-乙酰半胱氨酸酰胺在 10–20 mM 浓度下表现出显著的细胞毒性，但对浓度低于 1 mM 的阿霉素 (DOX) 处理的 H9c2 细胞的活力没有明显影响。N-乙酰半胱氨酸酰胺 (750 μM) 可降低 DOX 引起的活性氧 (ROS) 水平和脂质过氧化，并恢复 GSH/GSSG 比值和抗氧化酶活性，包括过氧化氢酶 (CAT)、谷胱甘肽还原酶 (GR) 和谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx) [1]。N-乙酰半胱氨酸酰胺 (1 mM) 可预防甲基苯丙胺 (METH) 诱导的人脑微血管内皮细胞 (HBMVEC) 死亡 [3]。

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NACA 对 H9c2 细胞的细胞毒性：将 H9c2 心肌细胞暴露于浓度范围为 0.25 mM 至 20 mM 的 NACA 中 24 小时。在浓度≥10 mM时观察到显著的细胞毒性。在20 mM时，细胞活力降低约80%（p < 0.01）。在0.75 mM时，细胞活力与对照组相当。作为比较，NAC（N-乙酰半胱氨酸）在浓度≥2 mM时诱导了显著的细胞毒性。[1]
对DOX诱导的细胞毒性的影响：用750 μM NACA预处理细胞2小时，随后与DOX（0.25-100 μM）共同处理24-72小时，对DOX诱导的细胞死亡的保护作用甚微。在5 μM DOX时观察到最显著（但仍然微弱）的保护作用。[1]
活性氧的减少：与对照组相比，5 μM DOX处理使ROS增加56%。与 DOX 单独治疗组相比，750 μM NACA 联合治疗可将 ROS 水平降低至对照水平（p < 0.05）。[1]
谷胱甘肽和半胱氨酸水平：DOX (5 μM) 显著降低了细胞内 GSH 和半胱氨酸水平。NACA (750 μM) 联合治疗使 GSH 和半胱氨酸水平恢复至高于 DOX 单独治疗组（p < 0.05）。NACA 单独治疗可显著提高 GSH 水平（p < 0.05）。[1]
GSSG 和 GSH/GSSG 比值：DOX 使 GSSG 水平升高 61%，GSH/GSSG 比值降低 47%。NACA 联合治疗使 GSSG 水平恢复至对照水平，并显著提高 GSH/GSSG 比值（p < 0.01）。NACA 单独治疗可提高 GSH/GSSG 比值（p < 0.05）。 [1]
脂质过氧化：DOX 使 MDA（一种脂质过氧化标志物）水平从 0.92 ± 0.02 nmol/100 mg 蛋白升高至 1.55 ± 0.17 nmol/100 mg 蛋白。NACA 联合治疗使 MDA 水平降低至 0.89 ± 0.02 nmol/100 mg 蛋白（与单独使用 DOX 组相比，p < 0.05），与对照组相似。[1]
过氧化氢酶活性：DOX 使 CAT 活性从 10.94 ± 2.13 mU/mg 蛋白降低至 4.30 ± 0.45 mU/mg 蛋白（降低 61%）。NACA 联合治疗使 CAT 活性恢复至 13.13 ± 2.17 mU/mg 蛋白（与单独使用 DOX 组相比，p < 0.05）。 [1]
谷胱甘肽过氧化物酶活性：DOX 使 GPx 活性从 24.77 ± 3.91 ΔA/min/mg 蛋白降低至 12.50 ± 1.74 ΔA/min/mg 蛋白（降低 50%）。NACA 联合治疗使 GPx 活性恢复至 19.31 ± 3.07 ΔA/min/mg 蛋白（与单独使用 DOX 相比，p < 0.05）。[1]
谷胱甘肽还原酶活性：DOX 使 GR 活性从 5.13 ± 0.09 mU/mg 蛋白降低至 0.83 ± 0.04 mU/mg 蛋白（降低 84%）。NACA 联合治疗使 GR 活性恢复至 4.22 ± 0.53 mU/mg 蛋白（与单独使用 DOX 相比，p < 0.05）。 [1]
与NAC的比较：该研究指出，既往研究表明，140 mg/kg的NAC未能预防急性DOX诱导的心脏毒性，这归因于其脂溶性低，限制了生物利用度。NACA以酰胺取代羧基，具有更高的亲脂性，从而能够更好地穿透细胞膜。[1]

当存在N-乙酰半胱氨酸酰胺时，中枢神经系统的生物利用度更高。在创伤性脑损伤（TBI）大鼠模型中，腹腔注射N-乙酰半胱氨酸酰胺（150 mg/kg）可提高线粒体生物能量学，降低氧化应激，维持线粒体功能，并增强皮质保护和功能预后[2]。

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创伤性脑损伤模型（大鼠）：成年雄性Sprague-Dawley大鼠接受中度（1.5 mm）单侧可控皮质冲击损伤。NACA治疗采用多种方案：（1）损伤后30分钟腹腔注射150 mg/kg，同时使用渗透泵以18.5 mg/kg/hr的速度持续输注7天；（2）损伤后5分钟、6小时、12小时、18小时和24小时腹腔注射150 mg/kg。 [2]
神经保护（组织保护）：损伤后15天，与NAC治疗组和载体治疗组相比，NACA治疗组动物的皮质组织保护显著增加（p < 0.05）。单独使用NAC治疗与载体治疗组无显著差异。[2]
认知功能（莫里斯水迷宫）：损伤后10-15天，与NAC治疗组和载体治疗组相比，NACA治疗组大鼠游到平台的距离显著缩短（药物治疗效应p < 0.013）。游泳速度无显著差异。[2]
氧化损伤：损伤后7天，与载体治疗组相比，NACA治疗显著降低了脂质过氧化（4-HNE水平）（p < 0.0001）。未观察到蛋白质亚硝基化（3-NT水平）的显著降低。 [2]
线粒体生物能量学：损伤后25小时，与假手术组相比，载体处理组动物的线粒体状态III、状态VFCCP和状态Vsucc呼吸作用降低了50-60%。NACA治疗显著改善了所有线粒体呼吸参数，使其与假手术组无显著差异。状态IV呼吸作用未观察到显著差异。[2]
线粒体谷胱甘肽含量：损伤后25小时，与假手术组相比，载体处理组动物的线粒体总谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽含量降低了21-23%。NACA治疗使总谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽维持在与假手术组无显著差异的水平。氧化型谷胱甘肽（GSSG）在各组间无显著变化。[2]
与NAC的比较：NACA在组织保护和认知功能方面显示出优于NAC的疗效。与载体相比，单独使用NAC治疗并未显著改善这些指标。[2]
在未接受过任何处理的动物中的安全性：对未受伤的大鼠给予NACA（150 mg/kg，每6小时一次，持续24小时），与载体相比，线粒体呼吸或谷胱甘肽含量均未发生改变，表明NAC无毒性作用且耐受性良好。[2]

过氧化氢酶活性测定：将细胞匀浆用 50 mM 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）稀释。在细胞匀浆存在下，于 240 nm 处测定 10 mM 过氧化氢的指数衰减。不含细胞匀浆的反应混合物用作空白对照。[1]
谷胱甘肽过氧化物酶活性测定：采用 Paglia 和 Valentine 的方法测定 GPx 活性。叔丁基过氧化氢被 GPx 还原，然后通过 GR 与 NADPH 氧化偶联而再生。在 340 nm 处用分光光度法监测 NADPH 的衰减速率。[1]
谷胱甘肽还原酶活性测定：采用 Carlberg 和 Mannervik 的方法测定 GR 活性。通过监测 340 nm 处 NADPH 的指数衰减来测定 NADPH 依赖的 GSSG 向 GSH 的转化。不含 GSSG 的反应混合物用作空白对照。 [1]

细胞培养：H9c2心肌细胞（大鼠胚胎心脏组织来源）培养于含10%胎牛血清（FBS）、4 mM L-谷氨酰胺、1.5 g/L碳酸氢钠、4.5 g/L葡萄糖和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。每3天传代一次。[1]
细胞毒性试验（MTS）：将细胞接种于96孔板中。处理后，加入MTS试剂并孵育。测定490 nm处的吸光度，该值与活细胞数量成正比。[1]
细胞内活性氧（ROS）测定：处理后，将细胞与5 μM DCFH-DA在37℃下孵育20分钟。在激发波长485 nm、发射波长520 nm处测定DCF荧光强度。 [1]
高效液相色谱法测定谷胱甘肽 (GSH) 和半胱氨酸：将细胞匀浆在丝氨酸硼酸盐缓冲液中用 NPM（1 mM 乙腈溶液）衍生化。5 分钟后，用 2N HCl 酸化样品，过滤，然后注入 HPLC 色谱柱。荧光检测波长为 λex = 330 nm，λem = 376 nm。[1]
氧化型谷胱甘肽 (GSSG) 测定：用 2-乙烯基吡啶处理细胞匀浆以封闭 GSH 巯基。加入 NADPH 和谷胱甘肽还原酶以还原 GSSG。然后用 NPM 衍生化样品并测定荧光。[1]
脂质过氧化测定 (MDA)：将细胞匀浆与丁基羟基甲苯和三氯乙酸混合，煮沸 30 分钟。去除上清液，加入硫代巴比妥酸，然后用正丁醇萃取。荧光测量条件为激发波长λex = 515 nm，发射波长λem = 550 nm。[1]
蛋白质测定：采用考马斯亮蓝法，以牛血清白蛋白（BSA）为标准，在595 nm处测定吸光度，测定蛋白质浓度。[1]

动物：**成年雄性Sprague-Dawley大鼠（300-350克）术前饲养7天，自由摄食饮水。[2]
* **手术（可控皮层冲击）：**大鼠使用4%异氟烷麻醉，术中维持浓度为2.5%。在矢状缝外侧，以前囟和后囟为中心，进行6毫米的开颅手术。使用气动控制冲击器（5毫米尖端，速度3.5米/秒，深度1.5毫米）诱导中度损伤。假手术组动物仅进行开颅手术，不进行冲击。体温维持在37°C。 [2]
* **NACA 给药（组织保护/行为学研究）：** 大鼠（每组 n=6-8）接受以下治疗：（1）NACA：损伤后 30 分钟腹腔注射 150 mg/kg NACA，并持续使用渗透泵（18.5 mg/kg/小时，持续 7 天）；（2）NAC：相同方案；（3）赋形剂：等体积。实验人员对治疗方案不知情。[2]
* **NACA 给药（线粒体研究）：** 大鼠（每组 n=5）接受以下治疗：（1）NACA：损伤后 5 分钟、6 小时、12 小时、18 小时和 24 小时腹腔注射 150 mg/kg NACA；（2）赋形剂：在相同时间点注射等体积生理盐水；（3）假手术组：不进行任何治疗。损伤后 25 小时处死。 [2]
* **NACA 给药（未损伤组）：** 未受伤的大鼠（每组 n=3）分别于 0、6、12、18 和 24 小时腹腔注射 NACA 或载体。25 小时后处死。[2]
* **莫里斯水迷宫：** 测试于术后 10 天开始，连续 5 天，每天进行 4 次试验。水池直径 170 厘米，平台直径 13 厘米，浸没于水面下 2 厘米处。记录并分析游泳表现。[2]
* **组织学处理：** 损伤后 15 天，大鼠先用 PBS 灌注，再用 4% 多聚甲醛灌注。脑组织用 4% 多聚甲醛-15% 蔗糖溶液后固定，切片厚度为 50 微米，并用甲酚紫染色。采用无偏倚的Cavalieri方法评估皮质损伤。[2]
* **氧化应激免疫组织化学：**损伤后7天，对50 μm厚的切片进行4-HNE（脂质过氧化）和3-NT（蛋白质亚硝基化）染色。切片经NaBH4还原、封闭后，与一抗（兔抗HNE、鼠抗3-NT）孵育，再与荧光二抗孵育。成像在Li-COR Odyssey系统上进行。[2]
* **线粒体分离：**损伤后25小时，迅速取出脑组织，将皮质组织在线粒体分离缓冲液（215 mM甘露醇、75 mM蔗糖、0.1% BSA、1 mM EGTA、20 mM HEPES，pH 7.2）中匀浆。先进行差速离心，然后用氮气弹（1200 psi，10 分钟）处理以释放突触体线粒体。最终沉淀物重悬于不含 EGTA 的缓冲液中（蛋白浓度约为 10 mg/mL）。[2]
* **线粒体生物能量学（Seahorse XF24）：** 将 50 μg 线粒体接种于呼吸缓冲液（215 mM 甘露醇、75 mM 蔗糖、0.1% BSA、20 mM HEPES、2 mM MgCl₂、2.5 mM KH₂PO₄，pH 7.2）中。依次注射：A 端口 - 丙酮酸 (5 mM)、苹果酸 (2.5 mM)、ADP (1 mM)，用于状态 III；B 端口 - 寡霉素 A (1 μM)，用于状态 IV；C 端口 - FCCP (4 μM)，用于状态 VFCCP； D 端口 - 鱼藤酮 (0.1 μM) 和琥珀酸 (10 mM) 用于 Vsucc 状态。测定耗氧率并以假手术组的百分比表示。[2]
* **谷胱甘肽测定：** 用 5% 偏磷酸处理线粒体蛋白 (200-300 μg) 以去除蛋白质，在 4°C 下以 14,000 g 离心 15 分钟。收集上清液并储存于 -80°C。使用商业试剂盒 (Enzo Life Sciences) 在 414 nm 波长处测定总 GSH、还原型 GSH 和氧化型 GSH 的吸光度。结果以假手术组的百分比表示。[2]

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动物：成年雄性 Sprague-Dawley 大鼠 (300-350 g) 在手术前饲养 7 天，可自由获取食物和水。 [2]
手术（可控皮层冲击）：大鼠使用4%异氟烷麻醉，手术过程中维持浓度为2.5%。在矢状缝外侧，以颅骨前囟和人字缝为中心，进行6毫米的开颅手术。使用气动控制冲击器（5毫米尖端，速度3.5米/秒，深度1.5毫米）诱导中度损伤。假手术组动物仅进行开颅手术，不进行冲击。体温维持在37°C。[2]
NACA给药（组织保护/行为学研究）：大鼠（每组n=6-8）接受以下治疗：（1）NACA：损伤后30分钟腹腔注射150毫克/千克NACA，并持续使用渗透泵（18.5毫克/千克/小时，持续7天）；（2）NAC：相同方案；（3）等体积的溶剂对照组。实验人员对治疗方案不知情。 [2]
NACA 给药（线粒体研究）：大鼠（每组 n=5）分别接受以下处理：（1）NACA：伤后 5 分钟、6、12、18 和 24 小时腹腔注射 150 mg/kg NACA；（2）载体：相同时间点注射等体积生理盐水；（3）假手术：不进行任何处理。伤后 25 小时处死。[2]
NACA 给药（未处理研究）：未受伤的大鼠（每组 n=3）分别于伤后 0、6、12、18 和 24 小时腹腔注射 NACA 或载体。伤后 25 小时处死。[2]
Morris 水迷宫：测试于术后 10 天开始，连续 5 天，每天进行 4 次试验。水池直径 170 厘米，平台直径 13 厘米，浸没于水面以下 2 厘米处。记录并分析游泳表现。[2]
组织学处理：损伤后15天，大鼠先用PBS灌注，再用4%多聚甲醛灌注。脑组织经4%多聚甲醛-15%蔗糖后固定，切片厚度为50 μm，并用甲酚紫染色。采用无偏Cavalieri法评估皮质损伤。[2]
氧化应激免疫组织化学：损伤后7天，将50 μm厚的切片进行4-HNE（脂质过氧化）和3-NT（蛋白质亚硝基化）染色。切片经NaBH4还原、封闭后，与一抗（兔抗HNE，鼠抗3-NT）孵育，再与荧光二抗孵育。使用Li-COR Odyssey系统进行成像。 [2]
线粒体分离：损伤后25小时，迅速取出脑组织，将皮质组织在线粒体分离缓冲液（215 mM 甘露醇、75 mM 蔗糖、0.1% BSA、1 mM EGTA、20 mM HEPES，pH 7.2）中匀浆。经差速离心后，用氮气弹（1200 psi，10分钟）处理以释放突触体线粒体。最终沉淀物重悬于不含EGTA的缓冲液中（蛋白浓度约为10 mg/mL）。 [2]
线粒体生物能量学（Seahorse XF24）：将线粒体（50 μg）接种于呼吸缓冲液（215 mM 甘露醇、75 mM 蔗糖、0.1% BSA、20 mM HEPES、2 mM MgCl₂、2.5 mM KH₂PO₄，pH 7.2）中。依次注射：A 端口 - 丙酮酸（5 mM）、苹果酸（2.5 mM）、ADP（1 mM），用于状态 III；B 端口 - 寡霉素 A（1 μM），用于状态 IV；C 端口 - FCCP（4 μM），用于状态 VFCCP；D 端口 - 鱼藤酮（0.1 μM）和琥珀酸（10 mM），用于状态 Vsucc。测量耗氧率并以假实验组的百分比表示。 [2]
谷胱甘肽测定：取200-300 μg线粒体蛋白，用5%偏磷酸处理以去除蛋白质，于4℃下以14,000g离心15分钟。收集上清液并储存于-80℃。使用商业试剂盒（Enzo Life Sciences）在414 nm波长处测定总谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的吸光度。结果以对照组的百分比表示。[2]

结构修饰以提高生物利用度：NACA 是 NAC 的结构类似物，其中羧基被酰胺基取代。这种修饰提高了其亲脂性，使其能够更有效地穿过细胞膜。文献指出，由于羧基的存在，NAC 在生理 pH 值下带负电荷，这限制了其穿过细胞膜的能力。[1]
血脑屏障穿透性：该研究引用了之前的研究，这些研究表明 NACA 可以穿过血脑屏障。[1]
螯合特性：NACA 已被证明可以螯合 Cu²⁺，而 Cu²⁺ 可催化自由基的形成。[1]

细胞毒性阈值：在H9c2细胞中，NACA浓度≤1 mM时未显示显著细胞毒性。浓度≥10 mM时观察到显著细胞毒性，20 mM时细胞死亡率达80%。该研究采用750 μM (0.75 mM)作为安全工作浓度。[1]
与NAC的比较：NACA在H9c2细胞中的毒性低于NAC。NAC浓度≥2 mM时诱导显著细胞毒性，而NACA的毒性阈值为≥10 mM。[1]

[1]. N-acetylcysteine amide decreases oxidative stress but not cell death induced by doxorubicin in H9c2 cardiomyocytes. BMC Pharmacol. 2009 Apr 15;9:7.

[2]. N-acetylcysteine amide confers neuroprotection, improves bioenergetics and behavioral outcome following TBI. Exp Neurol. 2014 Jul;257:106-13.

[3]. N-Acetylcysteine amide protects against methamphetamine-induced oxidative stress and neurotoxicity in immortalized human brain endothelial cells. Brain Res. 2009 Jun 12;1275:87-95.

N-乙酰半胱氨酸酰胺是N-乙酰半胱氨酸（NAC）的酰胺形式，NAC是一种合成的N-乙酰衍生物，也是L-半胱氨酸的前药。L-半胱氨酸是一种内源性氨基酸，也是抗氧化剂谷胱甘肽（GSH）的前体，具有潜在的抗氧化和抗炎活性。N-乙酰半胱氨酸酰胺（NACA）的给药可以提高GSH水平。GSH可以清除活性氧（ROS），降低氧化应激，并预防ROS介导的细胞损伤和凋亡。与NAC相比，NACA具有更高的亲脂性和膜渗透性。

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背景：N-乙酰半胱氨酸酰胺（NACA）是一种相对较新的硫醇抗氧化剂，是N-乙酰半胱氨酸（NAC）的结构类似物。它是通过将NAC的羧基替换为酰胺基而合成的，以提高其亲脂性和细胞膜渗透性。 [1]
作用机制（抗氧化剂）：NACA通过多种机制降低氧化应激：(1) 提供半胱氨酸用于GSH合成；(2) 通过非酶促硫醇-二硫键交换将GSSG转化为GSH；(3) 直接清除自由基；(4) 螯合催化自由基生成的金属离子（Cu²⁺）；(5) 维持抗氧化酶（CAT、GPx、GR）的活性。[1]
研究背景：这是首篇研究NACA对阿霉素诱导的心肌细胞毒性具有化学保护作用的报告。[1]
主要发现（氧化应激与细胞死亡的分离）：尽管NACA有效降低了所有测量的氧化应激参数（ROS、GSH耗竭、脂质过氧化、酶失活），但其对阿霉素诱导的细胞死亡的保护作用甚微。这表明阿霉素（DOX）诱导的细胞毒性涉及不依赖于氧化应激的机制，例如拓扑异构酶II抑制导致DNA损伤和细胞凋亡。[1]
潜在应用：基于其抗氧化特性以及与NAC相比更高的生物利用度，NACA可能在涉及氧化应激的疾病中具有治疗潜力。然而，它无法阻止该模型中阿霉素诱导的细胞死亡，凸显了阿霉素心脏毒性的复杂性。[1]

C5H10N2O2S

162.2101

162.046

38520-57-9

10176265

White to off-white solid powder

0.896

115.47

3

3

3

10

149

1

CC(N[C@@H](CS)C(N)=O)=O

UJCHIZDEQZMODR-BYPYZUCNSA-N

InChI=1S/C5H10N2O2S/c1-3(8)7-4(2-10)5(6)9/h4,10H,2H2,1H3,(H2,6,9)(H,7,8)/t4-/m0/s1

(2R)-2-acetamido-3-sulfanylpropanamide

NACANac amide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~200 mg/mL (~1232.97 mM)
DMSO : ≥ 100 mg/mL (~616.48 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (15.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (15.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (15.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (616.48 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。