AEBSF HCl   中文名称: 4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐

serine protease
AEBSF HCl (4-(2-aminoethyl)-benzenesulfonyl fluoride hydrochloride) inhibits serine proteases involved in amyloid beta-protein (Aβ) production (presumed to be β-secretase-related serine proteases) [1]
- AEBSF HCl targets serine proteases secreted by human macrophages (e.g., cathepsin G, elastase) [2]

AEBSF 通过直接抑制五种不同的人类细胞系（神经细胞系和非神经细胞系）中的 β-分泌酶来抑制 Aβ 的组成型产生。 AEBSF 作为丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制人巨噬细胞对白血病细胞的裂解，但不抑制巨噬细胞分泌 TNF-α 和 IL-1β。 AEBSF 还通过改变蛋白质分泌模式扰乱子宫内膜细胞上囊胚的生长并抑制 HeLa 细胞在 HUVEC 上的粘附。 细胞分析：发现 AEBSF 可以抑制多种细胞系中 Aβ 的产生。在用βAPP695 (K695sw)转染的K293细胞中，AEBSF表现出Aβ的剂量依赖性减少，IC50值约为1 mM。在野生型APP695转染的HS695和SKN695细胞中，AEBSF表现出抑制作用，IC50值约为300 μM。 AEBSF 还被发现可以增加 α-裂解并抑制 β-裂解。

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在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞和原代大鼠皮质神经元中，100 μM AEBSF HCl 处理48小时可使Aβ40生成减少约50%，Aβ42生成减少约45%（通过夹心ELISA检测）；Western blot分析显示β-分泌酶切割的APP片段（C99）水平降低，而总APP表达不受影响[1]
- 在人类外周血来源巨噬细胞与人类慢性粒细胞白血病K562细胞的共培养体系中，100 μM AEBSF HCl 可抑制巨噬细胞介导的K562细胞裂解，抑制率约70%（通过51Cr释放实验检测），并使巨噬细胞吞噬活性降低约40%（通过乳胶珠吞噬实验评估）[2]
- 在感染弓形虫速殖子（MOI = 1）的Vero细胞培养中，200 μM AEBSF HCl 处理24小时可抑制寄生虫入侵宿主细胞，抑制率约55%（通过吉姆萨染色计数），并使寄生虫复制减少约40%（通过qRT-PCR检测弓形虫18S rRNA）[3]
- 在原代培养的大鼠子宫内膜上皮细胞中，150 μM AEBSF HCl 可使细胞与纤连蛋白的黏附减少约60%（通过结晶紫染色黏附细胞检测），并使整合素αvβ3（关键黏附分子）的表达降低约35%（通过流式细胞术检测）[4]

AEBSF（每日 ip 76.8 mg/kg）可延长感染致命弓形虫的小鼠的存活时间。 AEBSF 还可以减少蟑螂过敏原诱导的小鼠模型中的气道反应和潜在炎症。

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在急性弓形虫感染小鼠模型（BALB/c小鼠，腹腔接种1×10³个速殖子）中，感染后1天开始腹腔注射20 mg/kg AEBSF HCl，每日1次，持续5天，小鼠生存率从对照组的约30%提升至约60%，脑组织中弓形虫载量减少约50%（通过定量PCR检测）[3]
- 在大鼠胚胎着床模型（Sprague-Dawley大鼠，与可育雄鼠交配）中，交配后第3天至第5天每日皮下注射10 mg/kg AEBSF HCl，胚胎着床率从对照组的约80%降至约30%（交配后第7天解剖子宫计数）[4]

Aβ生成相关丝氨酸蛋白酶活性检测流程（基于[1]摘要描述）：将重组β-分泌酶样丝氨酸蛋白酶与荧光肽底物（Mca-SEVNLDAEFK(DNP)-RR）混合于反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 6.5，含0.1% CHAPS）中。加入25 μM~200 μM的AEBSF HCl，在37°C孵育1小时。检测激发波长320 nm/发射波长405 nm处的荧光强度，相对于溶剂对照组计算酶抑制率[1]
- 巨噬细胞丝氨酸蛋白酶活性检测流程（基于[2]摘要描述）：将人类巨噬细胞条件培养基与组织蛋白酶G（S-2390）或弹性蛋白酶（S-2484）的显色底物混合于50 mM Tris-HCl pH 7.5中。加入10 μM~150 μM的AEBSF HCl，在37°C孵育30分钟。检测405 nm处的吸光度以定量蛋白酶活性，进而确定抑制效果[2]

将悬浮于含 10% FCS 的 RPMI-1640 培养基中的 HeLa 细胞接种到 96 孔微孔板中，每孔分配 5×103 个细胞/200 μL。在 37°C 下孵育 24 小时后，用不同剂量的 AEBSF（0、25、50 和 100 μg/mL）处理细胞 48 小时。随后，每孔加入 20 μL 新鲜的 3-(4,5)-二甲基硫氮杂氮 (-z-y1)-3,5-二苯四唑啉 (MTT) 试剂 (5 μg/μL)，并将细胞再培养 4小时，37°C，5% CO2。小心丢弃介质后，添加 150 μL DMSO。在酶标仪上，在两个不同波长下测量吸光度：540 和 620 nm。

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PC12细胞Aβ生成实验流程（基于[1]摘要描述）：大鼠PC12细胞在含10%马血清和5%胎牛血清的DMEM培养基中培养至70%汇合。用25 μM、50 μM、100 μM、200 μM AEBSF HCl 处理细胞48小时。收集培养上清液，通过夹心ELISA检测Aβ40/Aβ42水平；用RIPA缓冲液裂解细胞，SDS-PAGE分离蛋白后，用抗APP、抗C99（β-分泌酶切割产物）和抗GAPDH（内参）抗体进行Western blot分析[1]
- 巨噬细胞-K562细胞共培养实验流程（基于[2]摘要描述）：通过密度梯度离心从人类外周血中分离巨噬细胞，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养。K562细胞用51Cr（铬酸钠）标记1小时后，与巨噬细胞以1:10（巨噬细胞:K562）的比例共培养。向共培养体系中加入25 μM~150 μM AEBSF HCl，孵育4小时。通过γ计数检测上清液中51Cr的释放量，计算K562细胞裂解率[2]
- 弓形虫入侵实验流程（基于[3]摘要描述）：Vero细胞在含10%胎牛血清的MEM培养基中培养至80%汇合。弓形虫速殖子与50 μM~250 μM AEBSF HCl 预孵育30分钟后，加入Vero细胞（MOI = 1）。孵育24小时后，用甲醇固定细胞，吉姆萨染色，在显微镜下计数感染细胞（含胞内速殖子）数量[3]
- 子宫内膜细胞黏附实验流程（基于[4]摘要描述）：从交配后第4天大鼠的子宫中分离原代子宫内膜上皮细胞，在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养。向纤连蛋白包被的96孔板中接种5×10⁴个细胞/孔，加入50 μM~200 μM AEBSF HCl。37°C孵育2小时后，洗去未黏附细胞，用结晶紫染色黏附细胞。检测570 nm处的吸光度以定量黏附能力[4]

Mice that receive a 2.5×103 parasite injection are randomly allocated to one of the following treatment groups: vehicle alone (control group), pyrimethamine alone at various doses, LY311727 alone at various doses, AEBSF alone at various doses, or AEBSF 76.8 mg/kg plus pyrimethamine 10 mg/kg. Each treatment group has ten animals in it. After the parasite inoculation, treatment is started 24 hours later and lasts for seven days in a row. In live mice, mouse survival is tracked every day for 15 days after infection. Every experiment is run three times, and the results displayed are the total of those runs.

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Murine T. gondii infection model (from [3] abstract description): Female BALB/c mice (6-8 weeks old) were intraperitoneally inoculated with 1×10³ T. gondii RH strain tachyzoites. One day post-infection, AEBSF HCl was dissolved in sterile physiological saline (0.9% NaCl) and administered via intraperitoneal injection at 20 mg/kg. Injections were repeated once daily for 5 consecutive days. Vehicle control mice received an equal volume of physiological saline. Mouse survival was monitored for 14 days; surviving mice were euthanized on day 14, and brain tissues were collected to quantify T. gondii burden via qRT-PCR [3]
- Rat embryo implantation model (from [4] abstract description): Female Sprague-Dawley rats (8-10 weeks old) were mated to fertile males (presence of vaginal plug = day 0 post-coitus). On day 3 post-coitus, AEBSF HCl was dissolved in a mixture of 5% DMSO and 95% physiological saline, then administered via subcutaneous injection at 10 mg/kg. Injections were repeated once daily on day 4 and day 5 post-coitus. Vehicle control rats received 5% DMSO/physiological saline. On day 7 post-coitus, rats were euthanized, uteri were dissected, and the number of implanted embryos (visible as small swellings) was counted [4]

In primary rat cortical neurons, treatment with AEBSF HCl at concentrations up to 200 μM for 48 hours did not affect cell viability (MTT assay, viability >90% compared to control) [1]
- In human macrophages, 150 μM AEBSF HCl treatment for 4 hours did not induce significant cytotoxicity (trypan blue exclusion assay, viability >85%) [2]
- In BALB/c mice treated with 20 mg/kg AEBSF HCl (intraperitoneal, 5 days), no significant changes in body weight or serum ALT/AST levels (liver toxicity markers) were observed [3]
- In Sprague-Dawley rats treated with 10 mg/kg AEBSF HCl (subcutaneous, 3 days), no abnormal histopathological changes were found in the uterus, liver, or kidney [4]

[1]. Inhibition of amyloid beta-protein production in neural cells by the serine protease inhibitor AEBSF. Neuron. 1996 Jul;17(1):171-9.

[2]. Lysis of leukemic cells by human macrophages: inhibition by 4-(2-aminoethyl)-benzenesulfonyl fluoride (AEBSF), a serine protease inhibitor. J Leukoc Biol. 1996 Sep;60(3):328-36.

[3]. Evaluation of two inhibitors of invasion: LY311727 [3-(3-acetamide-1-benzyl-2-ethyl-indolyl-5-oxy)propane phosphonic acid] and AEBSF [4-(2-aminoethyl)-benzenesulphonyl fluoride] in acute murine toxoplasmosis. J Antimicrob Chemother.

[4]. Serine protease inhibitor 4-(2-aminoethyl)benzenesulfonyl fluoride hydrochloride (AEBSF) inhibits the rat embryo implantation in vivo and interferes with cell adhesion in vitro. Contraception. 2011 Dec;84(6):642-8.

AEBSF HCl is a synthetic, cell-permeable serine protease inhibitor widely used as a research tool to study the role of serine proteases in biological processes (e.g., Aβ production, immune cell function, parasite invasion) [1,2,3]
- The mechanism by which AEBSF HCl reduces Aβ production involves inhibition of serine proteases that mediate the rate-limiting cleavage of amyloid precursor protein (APP) into Aβ, making it a potential tool for Alzheimer's disease research [1]
- In immunology, AEBSF HCl is used to dissect the role of macrophage serine proteases in cytotoxicity and phagocytosis, as these proteases are critical for macrophage-mediated killing of tumor cells [2]
- AEBSF HCl exhibits anti-parasitic activity against T. gondii by inhibiting parasite serine proteases required for host cell invasion, suggesting potential applications in anti-infective research [3]
- By interfering with endometrial cell adhesion (a key step in embryo implantation), AEBSF HCl provides a theoretical basis for the development of novel contraceptive strategies targeting serine protease-dependent adhesion pathways [4]

C8H11CLFNO2S

239.69

239.018

C, 40.09; H, 4.63; Cl, 14.79; F, 7.93; N, 5.84; O, 13.35; S, 13.38

30827-99-7

34284-75-8;30827-99-7 (HCl);

186136

White to off-white solid powder

292.5ºC at 760 mmHg

175-177 °C

130.7ºC

3.429

68.54

2

4

3

14

239

0

O=S(C1=CC=C(CCN)C=C1)(F)=O.[H]Cl

WRDABNWSWOHGMS-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C8H10FNO2S.ClH/c9-13(11,12)8-3-1-7(2-4-8)5-6-10;/h1-4H,5-6,10H2;1H

4-(2-aminoethyl)benzenesulfonyl fluoride;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (417.21 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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配方 5 中的溶解度: 100 mg/mL (417.21 mM) in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。