| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Myosin (IC50 = 1.4 μM)
Aficamten targets cardiac myosin ATPase, the molecular motor responsible for cardiac muscle contraction. It acts as an inhibitor of cardiac myosin ATPase with an IC50 of 1.26 µM for the bovine enzyme. By inhibiting cardiac myosin, Aficamten reduces the number of active cross-bridges during each cardiac cycle, thereby decreasing myocardial contractility. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
心肌肌节过度收缩可能是遗传性肥厚型心肌病中病理性肥大和纤维化的关键因素。Aficamten (CK-274) 是一种新型心肌肌球蛋白抑制剂，它是通过优化吲哚啉化合物 1 而发现的。该优化过程的重要进展是发现了一种茚满类似物 (12)，其构效关系更为宽松，从而能够快速改善药物特性[1]。Aficamten 是一种口服、选择性、变构心肌肌球蛋白抑制剂，旨在直接靶向肥厚型心肌病 (HCM) 相关的过度收缩。它可逆地结合到 β-心肌肌球蛋白运动结构域上一个特定的变构口袋，使肌球蛋白稳定在一种被称为“超松弛”或弱肌动蛋白结合状态的特定构象中。通过将肌球蛋白头部锁定在这种状态，阿菲卡明减缓了ATP水解循环中磷酸盐的释放速率，从而阻止了肌球蛋白发生构象变化，使其无法转变为产生收缩力的、与肌动蛋白紧密结合的状态。这种作用有效地减少了参与收缩循环的活性肌动蛋白-肌球蛋白横桥的数量，从而降低了肌球蛋白在心肌肌节处产生的收缩力，并减轻了左心室流出道（LVOT）梗阻。
体外实验表明，阿菲卡明对牛源心肌肌球蛋白ATPase的IC50值为1.26 µM。它能降低分离的大鼠心室肌细胞的收缩分数，IC50值为7.9 µM。该化合物是一种强效的心肌肌球蛋白抑制剂，IC50值为1.4 µM。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
Aficamten 是一种新一代本土肌球蛋白制剂，其半衰期接近人体平均水平，适合每日一次给药，可在数周内达到稳态，并具有较大的国内加工窗口和清晰的药代动力学/药效学关联性[1]。口服给药后（小鼠 1 mg/kg、小鼠 2 mg/kg、大鼠 3 mg/kg、大鼠 8 mg/kg、犬 1 mg/kg 和猴 1 mg/kg），Aficamten 显示出良好的中枢屏障生物利用度（模型 98%，大鼠 55%，大鼠 58%，大鼠 79%，犬 45%，猴 41%）[1]。 Aficamten 的最终消除半衰期在猴体内为 4.5 小时，在犬体内为 3.0 小时，在另一侧为 8.1 小时[1]。Aficamten 可剂量依赖性地降低左心室收缩力，从而显著改善左心室流出道梗阻和心力衰竭症状。药代动力学方面，Aficamten 在人体内的半衰期约为 3.4 天，两周内即可达到稳态浓度。临床试验中，开始治疗两周内即可观察到左心室流出道压差 (LVOT-G) 的降低，并持续至第 24 周。在第 24 周，Aficamten 组静息和 Valsalva 动作下 LVOT-G 的平均变化值分别为 -35 mmHg 和 -48 mmHg，而安慰剂组分别为 +4 mmHg 和 +2 mmHg。除了血流动力学改变外，Aficamten 还能诱导有利的心脏重塑。心脏磁共振（CMR）子研究表明，治疗24周后，左心室质量指数、最大室壁厚度和左心房容积指数均显著降低，同时N末端B型利钠肽前体（NT-proBNP）和高敏肌钙蛋白I也显著下降。与药物机制一致，阿菲卡汀可降低左心室射血分数（LVEF）；在第24周，阿菲卡汀组的LVEF较基线平均变化为-7%，而安慰剂组为-2%。该药物的作用是可逆的：停药4周后，LVEF和Valsalva左心室流出道梯度（LVOT-G）均恢复至基线水平。体内实验表明，阿菲卡汀以剂量依赖的方式降低大鼠的左心室短轴缩短率。目前，该药物正被开发用于治疗肥厚型心肌病（HCM），特别是梗阻型HCM。该化合物可降低左心室流出道梯度。改善肥厚型心肌病患者的症状。
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| 酶活实验 |
心肌肌原纤维测定。[1]
为了评估化合物对天然肌节中全长心肌肌球蛋白ATPase活性的影响，可以进行去膜肌原纤维测定。牛心肌肌原纤维可通过在去垢剂（例如Triton X-100）存在下匀浆牛左心室组织获得。这种处理可以去除细胞膜和大部分可溶性胞质蛋白，但保留心肌肌节肌动蛋白-肌球蛋白复合物的完整性。肌原纤维制剂保留了以Ca2+调节的方式水解ATP的能力。在有无化合物存在的情况下，可以在激活至最大速率特定比例（例如25%、75%）的Ca2+浓度下测定此类肌原纤维制剂的ATPase活性。使用丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶偶联酶系统评估小分子药物抑制牛心肌肌原纤维稳态 ATPase 活性的能力，该系统通过将还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH) 氧化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD)，将肌球蛋白产生的二磷酸腺苷 (ADP) 再生为三磷酸腺苷 (ATP)，从而在 340 nm 处产生吸光度变化。肌原纤维ATPase活性测定在PM12缓冲液（12 mM Pipes、2 mM MgCl₂、1 mM DTT，pH 6.8）中进行，该缓冲液补充了60 mM KCl和ATP，ATP浓度约为特定肌原纤维系统KM值的3-10倍（快肌纤维为0.5 mM ATP，慢肌纤维和心肌纤维为0.05 mM ATP）。使用0.6 mM EGTA和足量的CaCl₂控制钙离子浓度，以获得所需的游离钙离子浓度（使用网络资源http://www.stanford.edu/~cpatton/webmaxc/webmaxcS.htm计算）。在心肌肌原纤维活性测定中（如适用），加入叠氮化钠（0.25 mM）以抑制非肌球蛋白ATPase活性。在心肌和慢肌纤维肌原纤维测定中（如适用），通过扣除在饱和浓度的非选择性肌球蛋白II抑制剂blebbistatin存在下的ATPase活性，来扣除非肌球蛋白ATPase活性。肌原纤维的浓度约为0.25 mg/mL（快肌纤维）或1 mg/mL（慢肌纤维、心肌纤维）。使用0.6 mM EGTA和足量的CaCl₂控制钙浓度，以获得所需的游离钙浓度（使用网络资源http://www.stanford.edu/~cpatton/webmaxc/webmaxcS.htm计算）。吸光度测量（340 nm）在约25 °C下进行，使用Envision或SpectraMax酶标仪。 Aficamten的体外酶活性测定包括测量心肌肌球蛋白ATPase活性的抑制情况。将牛心肌肌球蛋白与ATP在不同化合物浓度下孵育。采用比色法测定无机磷酸盐的释放量，从而定量ATPase活性。根据剂量反应曲线确定牛源酶的IC50值为1.26 µM。 |
| 细胞实验 |
冷冻保存的接种人肝细胞检测。[1]
接种人肝细胞检测由Eurofins Pharma Discovery Services完成。该接种人肝细胞检测用于通过测量人肝细胞培养物中CYP1A2、2B6和3A4的mRNA水平来确定CK-3773274诱导CYP同工酶的潜在作用，该检测由Eurofins Pharma Discovery Services完成。将肝细胞解冻后，以0.7×10⁶个活细胞/mL的密度接种于胶原蛋白包被的96孔板中，培养基为S54。肝细胞在37℃、5% CO₂条件下培养。接种4小时后，洗涤肝细胞，然后过夜恢复培养。接种24小时后，将肝细胞与待测化合物在培养基中孵育，每日更换培养基，总孵育时间为72小时。接种后第5天，洗涤肝细胞，并用RT-qPCR样品制备试剂裂解细胞。每种化合物均设置三个重复，最终DMSO浓度为0.1%。以细胞裂解液为mRNA模板，使用oligo(dT)引物和随机引物的混合物，通过RT-PCR将其反转录为cDNA。使用CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4序列特异性引物，以GAPDH为内参基因，通过单重两步RT-qPCR测定各亚型的相对表达量（相对于载体对照组的倍数变化）。通过比较每种测试化合物的诱导倍数与每批肝细胞预先设定的阈值，分析其诱导潜力。 使用分离的大鼠心室肌细胞进行Aficamten的细胞活性测定。用不同浓度的Aficamten处理细胞。以分数缩短率作为收缩力的指标。根据剂量反应曲线确定IC50为7.9 µM。 |
| 动物实验 |
药代动力学。[1]
在雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠（n = 3）、雄性比格犬（n = 3，口服；n = 2，静脉注射）和雄性食蟹猴（n = 3）中，通过单次静脉推注和/或口服给药，测定了化合物的药代动力学参数。从给药前立即开始，定期采集血样，直至给药后24小时。采用高效液相色谱法（HPLC）分析血液或血浆样本中化合物的浓度，并以标准品为参照。化合物以溶液或混悬液的形式口服给药于禁食12小时的动物。通过切除、称重和匀浆组织样本，然后提取化合物，并以与血液和血浆测定相同的方式，采用HPLC定量法，以标准品为参照，测定骨骼肌组织中受试物的浓度。使用WinNonlin®软件分析汇总的药代动力学数据。 Aficamten的体内动物研究在大鼠中进行。该化合物口服给药，并通过超声心动图测量射血分数。观察到射血分数呈剂量依赖性降低。该化合物目前也在进行治疗肥厚型心肌病（HCM）的临床试验。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收
单次服用1毫克至75毫克阿菲卡汀后，以及每日多次服用5毫克至20毫克阿菲卡汀后，阿菲卡汀的暴露量与剂量成正比增加。不同剂量水平下阿菲卡汀的几何平均累积比值相似，范围为4.6至4.8。对于肥厚型心肌病（oHCM）患者，每日一次服用阿菲卡汀约17天后预计达到稳态血药浓度。达峰时间（Tmax）为1.5至2.0小时。口服阿菲卡汀后吸收迅速。口服阿菲卡汀后的生物利用度尚不清楚。 消除途径：单次服用20 mg放射性标记的阿菲卡汀后，32%（0.06%为原形阿菲卡汀）经尿液排出，58%（5.1%为原形阿菲卡汀）经粪便排出。 分布容积 分布容积为313升。阿菲卡汀的血浆浓度-剂量比为0.94。 清除率 总清除率为2.6 L/h，肾清除率小于总清除率的0.1%。 蛋白结合率 阿菲卡汀与血浆蛋白的结合率约为90%。 代谢/代谢物 阿菲卡汀在人体内广泛代谢，主要通过CYP2C9，CYP3A、CYP2D6和CYP2C19也有参与。阿菲卡汀主要代谢为两种药理活性较低的代谢物CK-3834282和CK-3834283，分别约占血浆中原药浓度的56%和103%。无活性代谢物会通过多种反应进一步生物转化，例如葡萄糖醛酸化、磺化、微生物介导的还原和酰胺水解。 生物半衰期 在肥厚型心肌病（oHCM）患者中，阿菲卡汀的中位终末半衰期（t½）约为80小时。 阿菲卡汀是一种口服生物利用度高的化合物。该化合物的分子量为337.38 g/mol，分子式为C18H19N5O2。纯度≥98%。具体的药代动力学参数，如半衰期、生物利用度和清除率，可在临床文献中找到。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
阿菲卡明通常耐受性良好。作为一种心肌肌球蛋白抑制剂，它能降低心肌收缩力，从而导致心输出量下降。该化合物禁用于严重心力衰竭患者。具体的毒理学数据可在临床文献中找到。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
药物适应症
治疗肥厚型心肌病 Aficamten 是一种正在研发用于治疗肥厚型心肌病 (HCM) 的研究性药物。它是一种新一代心肌肌球蛋白抑制剂。该化合物可从商业供应商处获得，用于研究用途。除临床试验外，它尚未获准用于人体治疗。 |
| 分子式 |
C18H19N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
337.375763177872
|
| 精确质量 |
337.153
|
| 元素分析 |
C, 64.08; H, 5.68; N, 20.76; O, 9.48
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| CAS号 |
2364554-48-1
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| PubChem CID |
139331495
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| 外观&性状 |
White to light brown solid powder
|
| LogP |
2.1
|
| tPSA |
85.8Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
490
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CCC1=NC(=NO1)C2=CC3=C(C=C2)[C@@H](CC3)NC(=O)C4=CN(N=C4)C
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| InChi Key |
IOVAZWDIRCRMTM-OAHLLOKOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H19N5O2/c1-3-16-21-17(22-25-16)12-4-6-14-11(8-12)5-7-15(14)20-18(24)13-9-19-23(2)10-13/h4,6,8-10,15H,3,5,7H2,1-2H3,(H,20,24)/t15-/m1/s1
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| 化学名 |
N-[(1R)-5-(5-ethyl-1,2,4-oxadiazol-3-yl)-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamide
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| 别名 |
CK-3773274; CK274; Aficamten [INN]; [USAN]; CK-3773,274; B1I77MH6K1; CK3773,274; CK 274; CK 3773274; CK-274; Aficamten
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~370.50 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9640 mL | 14.8201 mL | 29.6402 mL | |
| 5 mM | 0.5928 mL | 2.9640 mL | 5.9280 mL | |
| 10 mM | 0.2964 mL | 1.4820 mL | 2.9640 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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