| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Myosin (IC50 = 1.4 μM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
心肌肌节的高收缩性可能是遗传性肥厚型心肌病潜在的病理性肥大和纤维化所必需的。Aficamten(CK-274)是在吲哚啉化合物1的优化条件下发现的一种新型心肌肌球蛋白抑制剂。优化的重要进展是发现了一种Indane类似物(12),其具有较少的限制性结构-活性关系,可以快速改善类药物性质[1]Aficamten是一种口服、选择性、变构性心脏肌球蛋白抑制剂,旨在直接针对肥厚型心肌病相关的过度收缩机制。该药物可逆性地结合于β-心脏肌球蛋白马达结构域上一个独特的变构口袋,将肌球蛋白稳定在一种被称为“超松弛态”或弱肌动蛋白结合状态的特殊构象中。通过将肌球蛋白头部锁定在此状态,aficamten可减缓ATP水解循环中磷酸盐的释放速率,从而阻止肌球蛋白转变为产生张力、强结合肌动蛋白状态所需的构象变化。这一作用有效减少了参与收缩循环的活性肌动蛋白-肌球蛋白横桥数量,进而降低心肌肌节中肌球蛋白产生的收缩力,并减轻左心室流出道梗阻。
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| 体内研究 (In Vivo) |
Aficamten 是一种下一代本土肌球蛋白制剂,可提供适合每日一次给药的近期人体半衰期,在数周内达到稳定状态,并显示出较大的国内加工窗口和明确的 PK/PD 联系 [1]。口服治疗后(小鼠 1 mg/kg、小鼠 2 mg/kg、大鼠 3 mg/kg、大鼠 8 mg/kg、狗 1 mg/kg 和猴 1 mg/kg),Aficasten 显示出中枢屏障生物利用度(模型 98) %、大鼠 55%、大鼠 58%、大鼠 79%、狗 45%、猴 41%)[1]。 Aficasten 揭示了最终消除半衰期(猴子为 4.5 小时,猴子为 3.0 小时,狗为 33.8 小时,以及 8.1 小时[1]。
Aficamten可剂量依赖性地降低左心室收缩力,从而显著改善左心室流出道梗阻及心力衰竭症状。药代动力学数据显示,该药物在人体内的半衰期约为3.4天,可在两周内达到稳态血药浓度。临床试验显示,治疗启动两周内即可观察到LVOT梯度降低,且此效应可持续至第24周。第24周时,aficamten组患者静息状态和Valsalva动作下的LVOT梯度较基线平均分别下降35 mmHg和48 mmHg,而安慰剂组则分别上升4 mmHg和2 mmHg。除血流动力学改善外,aficamten还能促进有益的心脏重构。心脏磁共振亚组研究显示,治疗24周后患者的左心室质量指数、最大室壁厚度及左心房容积指数均显著降低,同时N末端B型利钠肽前体和高敏心肌肌钙蛋白I水平也大幅下降。与其作用机制一致,aficamten会降低左心室射血分数:第24周时,aficamten组的LVEF较基线平均下降7%,安慰剂组下降2%。该药物的效应具有可逆性:停药四周后,LVEF和Valsalva动作下的LVOT梯度均恢复至基线水平。 |
| 酶活实验 |
心肌原纤维测定。[1]
为了在天然肌节的背景下评估化合物对全长心肌肌球蛋白ATP酶活性的影响,可以进行皮肤肌原纤维测定。牛心肌纤维可以通过在洗涤剂如triton X-100的存在下使牛心脏左心室组织匀浆而获得。这种处理去除了膜和大多数可溶性细胞质蛋白,但使心肌肌动蛋白器完好无损。肌原纤维制剂保持以Ca2+调节的方式水解ATP的能力。在存在和不存在化合物的情况下,这种肌原纤维制剂的ATP酶活性可以在Ca2+浓度下测定,Ca2+浓度激活到最大速率的限定分数(即25%、75%)。使用丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶偶联酶系统评估小分子制剂抑制稳态ATP酶活性的能力,该系统通过将还原形式的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化为氧化形式的烟胺腺嘌呤二核苷酸,将肌球蛋白产生的二磷酸腺苷(ADP)再生为三磷酸腺苷(ATP),从而在340nm处产生吸光度变化。在补充有60mM KCl和ATP的PM12缓冲液(12mM Pipes,2mM MgCl2,1mM DTT,pH 6.8)中进行肌原纤维ATP酶测定,所述缓冲液的KM约为特定肌原纤维系统的KM的3-10倍(0.5mM ATP用于快速骨骼,0.05mM ATP用于慢速骨骼和心脏)。使用0.6mM EGTA和足够的CaCl2控制钙浓度,以获得所需的游离钙浓度(使用网络资源计算http://www.stanford.edu/~cpatton/webmaxc/webmaxcS.htm)。叠氮化钠(0.25mM)被包括在心肌原纤维测定中(如有指示)以抑制非肌球蛋白ATP酶活性。在存在饱和浓度的非选择性肌球蛋白II抑制剂blebbistatin的情况下,通过减去ATP酶活性,从心脏和慢骨骼肌纤维测定(如指示)中减去非肌球蛋白ATP酶活性。肌原纤维的存在量约为0.25 mg/mL(快速骨骼)或1 mg/mL(慢速骨骼、心脏)。使用0.6mM EGTA和足够的CaCl2控制钙浓度,以获得所需的游离钙浓度(使用网络资源计算http://www.stanford.edu/~cpatton/webmaxc/webmaxcS.htm)。使用Envision或SpectraMax平板读取器在约25°C下进行吸光度测量(340 nm)。 |
| 细胞实验 |
冷冻保存平板人肝细胞测定。[1]
平板人肝细胞测定在Eurofins Pharma Discovery Services进行。在Eurofins Pharma Discovery Services进行了平板肝细胞测定,该测定用于通过测量人肝细胞培养物中CYP1A2、2B6和3A4的mRNA水平来确定CK-3773274对CYP亚型的潜在诱导。将肝细胞解冻,并在S54中以0.7 X 106个活细胞/mL的密度接种到胶原包被的96孔板中。肝细胞在37°C和5%CO2下培养。在接种后4小时,对肝细胞进行清洗,然后进行过夜恢复。接种24小时后,将肝细胞与受试化合物在培养基中孵育,培养基每天更换,总孵育72小时。接种后第5天,用RT-qPCR样品修复试剂洗涤和裂解肝细胞。在每种浓度下以0.1%的最终DMSO浓度将化合物分成三份进行测试。细胞裂解物用作信使核糖核酸模板,并使用寡聚物(dT)和随机引物的混合物通过RTPCR逆转录为cDNA。分别使用CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4序列特异性引物,并将GAPDH作为参考基因,通过单重两步RT-qPCR测定每种亚型的相对表达(与载体对照相比的倍数差异)。通过将每批肝细胞的倍数诱导与预先确定的临界值进行比较来分析每种测试化合物的诱导潜力。 |
| 动物实验 |
药代动力学。[1]
在雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠(n = 3)、雄性比格犬(n = 3,口服;n = 2,静脉注射)和雄性食蟹猴(n = 3)中,通过单次静脉推注和/或口服给药,测定了化合物的药代动力学参数。从给药前立即开始,定期采集血样,直至给药后24小时。采用高效液相色谱法(HPLC)分析血液或血浆样本中化合物的浓度,并以标准品为参照。化合物以溶液或混悬液的形式口服给药,动物禁食12小时。采用与血液和血浆测定相同的方法,通过切取、称重和匀浆组织样本,然后提取化合物,并以标准品为参照,采用HPLC定量分析骨骼肌组织中受试物的浓度。使用WinNonlin®软件分析汇总的药代动力学数据。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收
单次服用1 mg至75 mg阿菲卡汀后,以及每日多次服用5 mg至20 mg阿菲卡汀后,阿菲卡汀的暴露量均与剂量成正比增加。阿菲卡汀的几何平均累积比率在不同剂量水平下相似,范围为4.6至4.8。预计在肥厚型心肌病(oHCM)患者中,每日一次服用阿菲卡汀约17天后即可达到稳态。达峰时间(Tmax)为1.5至2.0小时。口服阿菲卡汀后吸收迅速。口服阿菲卡汀后的生物利用度尚不清楚。 消除途径:单次服用20 mg放射性标记的阿菲卡汀后,32%(0.06%为原形阿菲卡汀)经尿液排出,58%(5.1%为原形阿菲卡汀)经粪便排出。 分布容积 分布容积为313升。阿菲卡汀的血药浓度与血浆浓度比为0.94。 清除率 总清除率为2.6升/小时,肾清除率小于总清除率的0.1%。 蛋白结合率 阿菲卡汀与血浆蛋白的结合率约为90%。 代谢/代谢物 阿菲卡汀在人体内广泛代谢,主要通过CYP2C9,CYP3A、CYP2D6和CYP2C19也有贡献。阿菲卡汀主要代谢为两种药理活性较低的代谢物CK-3834282和CK-3834283,它们在血浆中的浓度分别约为母体药物的56%和103%。非活性代谢物会通过多种反应进一步生物转化,例如葡萄糖醛酸化、磺化、微生物介导的还原和酰胺水解。 生物半衰期 在患有肥厚型心肌病 (oHCM) 的患者中,阿菲卡坦的终末半衰期 (t½) 中位数约为 80 小时。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
药物适应症
治疗肥厚型心肌病 |
| 分子式 |
C18H19N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
337.375763177872
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| 精确质量 |
337.153
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| 元素分析 |
C, 64.08; H, 5.68; N, 20.76; O, 9.48
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| CAS号 |
2364554-48-1
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| PubChem CID |
139331495
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| 外观&性状 |
White to light brown solid powder
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| LogP |
2.1
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| tPSA |
85.8Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
490
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CCC1=NC(=NO1)C2=CC3=C(C=C2)[C@@H](CC3)NC(=O)C4=CN(N=C4)C
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| InChi Key |
IOVAZWDIRCRMTM-OAHLLOKOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H19N5O2/c1-3-16-21-17(22-25-16)12-4-6-14-11(8-12)5-7-15(14)20-18(24)13-9-19-23(2)10-13/h4,6,8-10,15H,3,5,7H2,1-2H3,(H,20,24)/t15-/m1/s1
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| 化学名 |
N-[(1R)-5-(5-ethyl-1,2,4-oxadiazol-3-yl)-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamide
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| 别名 |
CK-3773274; CK274; Aficamten [INN]; [USAN]; CK-3773,274; B1I77MH6K1; CK3773,274; CK 274; CK 3773274; CK-274; Aficamten
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~370.50 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9640 mL | 14.8201 mL | 29.6402 mL | |
| 5 mM | 0.5928 mL | 2.9640 mL | 5.9280 mL | |
| 10 mM | 0.2964 mL | 1.4820 mL | 2.9640 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。