AKB-6899

别名: AKB-6899 AKB 6899 AKB6899

目录号: V10617 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

AKB-6899 可稳定 HIF-2α，从而诱导肿瘤相关巨噬细胞产生 sVEGFR-1，并减少小鼠黑色素瘤模型中的肿瘤生长。

AKB-6899 CAS号: 1007377-55-0
产品类别: New1

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

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纯度: ≥98%

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产品描述

描述：AKB-6899 可稳定 HIF-2α，从而诱导肿瘤相关巨噬细胞产生 sVEGFR-1，并在小鼠黑色素瘤模型中抑制肿瘤生长。参考文献： Roda JM, Wang Y, Sumner LA, Phillips GS, Marsh CB, Eubank TD. Stabilization of HIF-2α induces sVEGFR-1 production from tumor-associated macrophages and decreases tumor growth in a murine melanoma model. J Immunol. 2012 Sep 15;189(6):3168-77. doi: 10.4049/jimmunol.1103817. Epub 2012 Aug 6. PubMed PMID: 22869907; PubMed Central PMCID：PMC3436995。

AKB-6899是一种新型的取代的3-羟基吡啶-2-羰基甘氨酸缀合物，可优先抑制脯氨酰羟化酶3 (PHD3)，从而选择性地稳定HIF-2α，而不影响HIF-1α的积累。AKB-6899对HIF-2α的化学稳定作用可增加GM-CSF刺激的巨噬细胞中sVEGFR-1的产生。当与GM-CSF联合使用时，AKB-6899可减少小鼠黑色素瘤模型中的肿瘤生长和血管生成，其抗肿瘤作用依赖于肿瘤相关巨噬细胞中sVEGFR-1的产生。[1]

生物活性&实验参考方法

靶点	PHD3 (prolyl hydroxylase 3) [1]
体外研究 (In Vitro)	AKB-6899 (10 μM；24 小时) 可提高 HIF-2α 蛋白水平，而 HIF-1α 水平未相应升高。AKB-6899 不影响 HIF-1α 的积累或 VEGF 的合成，还能促进 GM-CSF 处理的巨噬细胞中可溶性 VEGF 受体 (sVEGFR)-1 的生成 [1]。用 10 μM AKB-6899 处理小鼠骨髓来源的巨噬细胞 18 小时后，免疫印迹分析显示 HIF-2α 蛋白积累增加 (p = 0.001)，而 HIF-1α 水平未相应升高 (p = 0.105)；AKB-6899 不增加 HIF-1α 或 HIF-2α 的 mRNA 水平。 [1] 用 100 ng/mL GM-CSF 和 10 μM AKB-6899 刺激人外周血单核细胞，与单独使用 GM-CSF 相比，sVEGFR-1 蛋白（p = 0.018）和转录本（p = 0.033）水平显著升高；VEGF 蛋白（游离生物可利用的 VEGF）未显著升高（p = 0.133），且 VEGF 转录本水平在单独使用 GM-CSF 和 GM-CSF/AKB-6899 之间无差异（p = 0.558）。[1] 在 0.5% O2 条件下用 GM-CSF 或在常氧条件下用 GM-CSF/AKB-6899 刺激人单核细胞，均产生等量的 sVEGFR-1；在 0.5% 氧气浓度下，AKB-6899 并未进一步增加 sVEGFR-1 的水平，与常氧条件相比，这表明 HIF-2α 已达到最大程度的稳定。[1] 使用来自髓系特异性 HIF-1α 或 HIF-2α 敲除小鼠的骨髓来源巨噬细胞，AKB-6899 在对照组和 HIF-1α 缺陷型巨噬细胞中诱导了相当水平的 sVEGFR-1，但在 HIF-2α 缺陷型巨噬细胞中未能诱导 sVEGFR-1 的产生，证实 AKB-6899 诱导的 sVEGFR-1 产生依赖于 HIF-2α。[1]
体内研究 (In Vivo)	在小鼠黑色素瘤模型中，使用 AKB-6899（17.5 mg/kg；腹腔注射；每周三次；持续 16 天）治疗可有效抑制肿瘤生长 [1]。在携带皮下 B16F10 小鼠黑色素瘤的 C57BL/6 小鼠中，与单独使用 GM-CSF 或 AKB-6899 相比，每周三次腹腔注射 AKB-6899（17.5 mg/kg）联合治疗可显著抑制肿瘤生长（第 16 天，GM-CSF 或 AKB-6899 组与联合治疗组的 p < 0.001）；与载体对照组相比，联合治疗还显著延长了小鼠的生存期（p = 0.001）。 [1] 与对照组相比，接受 GM-CSF/AKB-6899 联合治疗的小鼠肿瘤内 sVEGFR-1 mRNA 水平升高（p = 0.001），但 VEGF mRNA 水平无差异（p = 0.456）；联合治疗组的肿瘤血管生成（CD31 染色）显著降低（p < 0.001）。[1] 与载体对照组相比，接受 GM-CSF/AKB-6899 联合治疗的小鼠肺转移（通过 Pmel17 mRNA 评估）显著减少（p < 0.001）。[1] 当小鼠同时接受 sVEGFR-1 中和抗体（4 μg/只，瘤内注射）和 AKB-6899 治疗时，AKB-6899 的抗肿瘤作用被消除。在AKB-6899联合抗sVEGFR-1抗体组与载体对照组之间，未观察到肿瘤生长存在显著差异（p = 0.128）。[1] 在携带皮下A375人黑色素瘤异种移植瘤的SCID小鼠中，GM-CSF和AKB-6899联合治疗（相同方案）显著抑制了肿瘤生长（p = 0.05）。[1]
酶活实验	通过密度梯度离心法从新鲜外周血中纯化人外周血单核细胞，然后在添加了1%胎牛血清、1% PSA和10 μg/mL多粘菌素B的无内毒素培养基中培养。单核细胞分别用10 ng/mL GM-CSF、10 μM AKB-6899或溶剂对照（PBS或DMSO）处理24小时。收集无细胞培养上清液用于ELISA检测（sVEGFR-1和VEGF），并用Trizol裂解细胞用于RNA提取和实时PCR。 [1] 从 LysMcre 对照组、HIF-1αflox/flox/LysMcre 或 HIF-2αflox/flox/LysMcre 小鼠中分离骨髓祖细胞，方法是将股骨骨髓祖细胞在含有 20 ng/mL 重组鼠 M-CSF 的培养基中培养 5 天。分化的巨噬细胞经血清饥饿 2 小时后，在含有 1% FBS、1% PSA 和 10 μg/mL 多粘菌素 B 的培养基中，加入 100 ng/mL 鼠 GM-CSF 和/或 10 μM AKB-6899 进行处理。24 小时后，用 ELISA 法检测培养上清液中 VEGF 和 sVEGFR-1 的含量。 [1] 将人脐静脉内皮细胞与GM-CSF和/或AKB-6899共同培养；这些细胞分泌的sVEGFR-1基础水平较低，且对GM-CSF、AKB-6899或二者联合作用均无反应。[1]
细胞实验	Western Blot 分析[1] 细胞类型：小鼠骨髓来源巨噬细胞测试浓度： 10 μM 孵育时间： 24 小时实验结果：观察到 HIF 可增加细胞内 -2α 蛋白的表达。
动物实验	动物/疾病模型： 6-8周龄C57BL/6小鼠注射B16F10鼠黑色素瘤细胞[1] 剂量： 17.5 mg/kg 给药途径：腹腔注射（ip）；每周3次；持续16天。实验结果：肿瘤生长显著减少。对于鼠黑色素瘤模型，将1×10^5个B16F10鼠黑色素瘤细胞皮下注射到6-8周龄C57BL/6小鼠左侧腹部。待肿瘤可触及（约5-7天）后，将小鼠随机分配到各治疗组。腹腔注射AKB-6899（17.5 mg/kg）或载体对照（5%蔗糖溶液中的20% PEG-400）；瘤内注射GM-CSF（100 ng/只小鼠）或PBS载体。每周给药三次，直至肿瘤任一方向直径达到20 mm（约2.5周）。每周用游标卡尺测量三次肿瘤直径，肿瘤体积计算公式为0.5 ×（大直径）×（小直径）²。[1] 生存分析中，将B16F10肿瘤接种小鼠，每周三次给予17.5 mg/kg AKB-6899或载体治疗；生存期定义为肿瘤任一方向直径达到20 mm所需的时间。 [1] 在 sVEGFR-1 中和实验中，小鼠每周腹腔注射三次 AKB-6899 或载体，并瘤内注射 4 μg 抗 VEGFR-1 中和抗体或多克隆山羊 IgG 同型对照抗体（50 μL）。[1] 在人黑色素瘤异种移植模型中，将 1×10^6 个 A375 人黑色素瘤细胞皮下注射到 SCID 小鼠体内，并采用与上述相同的治疗方案。[1] 通过巢式实时 PCR 检测肺组织中 Pmel17 mRNA 的表达来评估肺转移情况。处死小鼠后，取出肺组织，速冻，在液氮中匀浆，并用 Trizol 试剂溶解以提取 RNA。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	浓度高达 50 μM 的 AKB-6899 对人外周血单核细胞或 LysMcre 对照组、HIF-1αflox/flox/LysMcre 或 HIF-2αflox/flox/LysMcre 小鼠骨髓来源巨噬细胞的活力没有影响，该结果通过膜联蛋白 V 和碘化丙啶染色在孵育 24 小时后测定。[1]
参考文献	[1]. Stabilization of HIF-2α induces sVEGFR-1 production from tumor-associated macrophages and decreases tumor growth in a murine melanoma model. J Immunol. 2012 Sep 15;189(6):3168-77.
其他信息	AKB-6899 最初是为治疗慢性贫血而开发的，因为 HIF-2α 也控制着促红细胞生成素的产生；其相关化合物 AKB-6548 正在进行 II 期临床试验，且耐受性良好，能够诱导 HIF-2α 依赖性基因的表达，而对 HIF-1α 依赖性基因的影响很小。[1] 与 AKB-6899（PHD3 抑制剂）不同，AKB-4924 是一种 4 位取代的 3-羟基-2-氧代-1,2-二氢吡啶衍生物，它通过抑制 PHD2 来强效稳定 HIF-1α，并增加 VEGF 的产生。[1] AKB-6899 的抗肿瘤和抗血管生成作用依赖于肿瘤相关巨噬细胞产生的 sVEGFR-1，因为中和 sVEGFR-1 可以完全逆转其抑制作用。 [1]肿瘤浸润巨噬细胞是AKB-6899/GM-CSF联合治疗后sVEGFR-1的主要来源，因为血管内皮细胞对AKB-6899或GM-CSF没有上调sVEGFR-1的表达。[1]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C14H11FN2O4
分子量	290.246546983719
精确质量	290.07
CAS号	1007377-55-0
相关CAS号	1007377-55-0
PubChem CID	49848485
外观&性状	White to yellow solid powder
LogP	2
tPSA	99.5
氢键供体(HBD)数目	3
氢键受体(HBA)数目	6
可旋转键数目(RBC)	4
重原子数目	21
分子复杂度/Complexity	393
定义原子立体中心数目	0
SMILES	FC1=CC=CC(=C1)C1=CN=C(C(NCC(=O)O)=O)C(=C1)O
InChi Key	PXWOWORYDKAEJO-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C14H11FN2O4/c15-10-3-1-2-8(4-10)9-5-11(18)13(16-6-9)14(21)17-7-12(19)20/h1-6,18H,7H2,(H,17,21)(H,19,20)
化学名	N-((5-(3-Fluorophenyl)-3-hydroxy-2-pyridinyl)carbonyl)glycine
别名	AKB-6899 AKB 6899 AKB6899
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO : ~100 mg/mL (~344.53 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.5 mg/mL (8.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More* 配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO : ~100 mg/mL (~344.53 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	3.4453 mL	17.2265 mL	34.4531 mL
	5 mM	0.6891 mL	3.4453 mL	6.8906 mL
	10 mM	0.3445 mL	1.7227 mL	3.4453 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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Figure 1. AKB-6899 stabilizes HIF-2α and increases macrophage production of sVEGFR-1 in response to GM-CSF. (A) Murine bone marrow-derived macrophages stimulated for 24 hours with AKB-6899 or an equivalent volume of DMSO (vehicle control) were immunoblotted for HIF-1α or HIF-2α. The numbers below the immunoblots represent the fold increase in HIF levels, normalized to β-actin protein and expressed in relative densitometric units. Immunoblots from one representative donor are shown; the graph represents the mean ± SEM relative densitometric units from 3 independent experiments. (B) Human peripheral blood monocytes were cultured in media containing PBS or 10 ng/mL GM-CSF, and DMSO (vehicle control) or 10 μM AKB-6899. After 24 hours, culture supernatants were harvested and analyzed for sVEGFR-1 content by ELISA (top panel), while cells were lysed in Trizol and analyzed for sVEGFR-1 transcript by real-time PCR (bottom panel). Results shown are the mean ± SEM of a total of 12 healthy donors from 3 independent experiments. (C) The same supernatants as in (B) were analyzed using an ELISA that detects only bioavailable VEGF (i.e., VEGF that is not bound to sVEGFR-1) (top panel). RNA from the cells in (B) was also analyzed for VEGF expression by real-time PCR (bottom panel). [1].Stabilization of HIF-2α induces sVEGFR-1 production from tumor-associated macrophages and decreases tumor growth in a murine melanoma model. J Immunol. 2012 Sep 15;189(6):3168-77.

Figure 3. sVEGFR-1 production from AKB-6899-stimulated macrophages is dependent on HIF-2α but not HIF-1α. Bone marrow-derived macrophages from LysMcre control mice, HIF-1αflox/flox/LysMcre mice, or HIF-2αflox/flox/LysMcre mice were stimulated for 24 hours with 10 μM AKB-6899 or AKB-4924, and sVEGFR-1 and VEGF transcript levels were analyzed by real-time PCR. ND, no difference.[1].Stabilization of HIF-2α induces sVEGFR-1 production from tumor-associated macrophages and decreases tumor growth in a murine melanoma model. J Immunol. 2012 Sep 15;189(6):3168-77.

Figure 4. AKB-6899 enhances the anti-tumor effect of GM-CSF in a murine melanoma model.(A) Mice with subcutaneous B16F10 melanoma tumors were treated 3 times per week intratumorally with PBS or GM-CSF (100 ng/mouse) and intraperitoneally with AKB-6899 (17.5 mg/kg) or the vehicle control (20% PEG in 5% dextran). Tumor dimensions were measured 3 times per week, and tumor volumes were calculated as described in Materials and Methods. Each data point represents the mean tumor volume of at least 15 mice/group, total, from 2 independent experiments. (B) Kaplan-Meier survival analysis of AKB-6899 in B16F10 melanoma. Mice were inoculated with subcutaneous B16F10 tumors and treated 3 times weekly with 17.5 mg/kg AKB-6899 or the vehicle control (n = 10 mice/group, total, from 2 independent experiments). Survival was determined as the time to a tumor size of 20 mm in any dimension.[1].Stabilization of HIF-2α induces sVEGFR-1 production from tumor-associated macrophages and decreases tumor growth in a murine melanoma model. J Immunol. 2012 Sep 15;189(6):3168-77.