| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在HepG2细胞中，黄曲霉内酯呈剂量依赖性地促进细胞凋亡。研究表明，这种由阿诺内酯引起的细胞凋亡与多种因素相关，包括Bax/Bcl-2比值升高、caspase-3激活、活性氧（ROS）生成、谷胱甘肽（GSH）耗竭以及STAT3激活抑制[1]。氨基内酯可降低STAT3靶基因的表达、DNA结合能力以及STAT3向细胞核的转位。尽管这种作用并非通过抑制STAT3上游激酶介导，但阿诺内酯可显著降低STAT3的激活，而对MAPK和NF-κB的转录影响较小[2]。在HCT-8人结肠癌细胞中，阿诺内酯可激活激活素/SMAD3信号通路。阿诺内酯通过阻止Cripto-1和IIA型激活素受体在激活素信号通路中的相互作用，发挥抗肿瘤作用[4]。黄曲霉内酯（5 μg/mL，24 h）可抑制结肠腺癌 HCT-8 细胞的生长 [4]。
黄曲霉内酯在处理 12 小时后以剂量依赖的方式抑制 HepG2 细胞的生长，IC50 值为 33 μM。[1] 40 μM 黄曲霉内酯处理可诱导细胞发生严重的形态学改变，这些改变是细胞死亡的特征，包括细胞变圆和收缩，且这种改变呈时间依赖性（3、6、12 小时）。用 3 mM N-乙酰-L-半胱氨酸 (NAC) 预处理可完全保护细胞免受这种细胞毒性作用。使用钙黄绿素AM和碘化丙啶进行的活/死细胞检测显示，经40 μM土木香内酯处理3、6和12小时后，细胞活力分别降至74.33%、51.6%和27%，而对照组为98.5%。NAC预处理逆转了这种细胞毒性作用。[1] Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析表明，土木香内酯（40 μM）以时间依赖性方式诱导细胞凋亡。早期凋亡在3小时和6小时增加，而晚期凋亡在12小时也出现。NAC（3 mM）逆转了这种凋亡作用。 [1] 经DCFH-DA流式细胞术检测，40 μM土木香内酯处理3、6和12小时后，细胞内活性氧（ROS）生成量分别增加至25%、42%和54%，而对照组为15%。[1] 经罗丹明123流式细胞术检测，40 μM土木香内酯处理3、6和12小时后，线粒体膜电位（MMP）分别降低至85%、79%和62%，而对照组为98%。[1] 细胞内谷胱甘肽（GSH）水平从处理3小时开始显著下降，并随时间推移进一步降低，而氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平保持不变。培养基中未检测到GSH或GSSG。用PEG-过氧化氢酶、PEG-超氧化物歧化酶或蛋氨酸（GSH载体抑制剂）预处理并不能阻止GSH的消耗。NAC预处理则完全抑制了GSH的消耗。Western blot结果显示，经土木香内酯处理的细胞中谷胱甘肽还原酶（GR）的表达略有增加。RT-PCR结果显示，γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的mRNA表达水平未发生改变。HPLC分析表明，将1 mM土木香内酯与浓度递增的GSH（0、5、15、30 mM）孵育，土木香内酯的含量呈剂量依赖性降低，表明二者之间存在直接结合。 [1] 蛋白质印迹分析显示，土木香内酯（40 μM，6 和 12 小时）以时间依赖性方式降低了 pTyr705 STAT3 和抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达，增加了促凋亡蛋白 Bax 的表达，并刺激了 caspase-3 的裂解（出现 32 kDa 和 17 kDa 片段）。[1] |
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| 体内研究 (In Vivo) |
与对照组小鼠相比，接受丙氨内酯治疗的小鼠平均肿瘤体积缩小了约2.17倍。然而，在试验期间，丙氨内酯的给药对小鼠的总体重没有影响，表明其未造成明显损害。此外，与对照组小鼠相比，接受丙氨内酯治疗的小鼠的平均肿瘤重量也显著降低。更重要的是，注射丙氨内酯后，肿瘤组织中细胞周期蛋白D1和p-STAT3的表达显著降低[2]。在异种移植模型中，将MDA-MB-231细胞皮下注射到无胸腺裸鼠体内，然后每2天腹腔注射一次丙氨内酯，剂量为2.5 mg/kg体重，持续14天。与对照组小鼠相比，丙氨内酯治疗组小鼠的平均肿瘤体积缩小了约2.17倍。平均肿瘤重量也显著降低。在试验期间，丙氨内酯的给药并未影响小鼠的总体体重。肿瘤组织的免疫组织化学分析显示，与对照组相比，经阿兰托内酯治疗的小鼠肿瘤组织中 p-STAT3 和 Ki-67 蛋白的表达显著降低。[2]
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| 酶活实验 |
STAT3 DNA结合活性的电泳迁移率变动分析 (EMSA)：将核提取物与32P末端标记的双链STAT3共有序列寡核苷酸（序列5′-GATCCTTCTGGGATTTCCTAGATC-3′）孵育。为进行竞争实验，在加入标记探针前10分钟加入100倍过量的未标记寡核苷酸。DNA-蛋白质复合物在6%聚丙烯酰胺凝胶电泳上进行分离，并使用图像分析仪分析放射性条带。[2]
分子对接模拟：使用STAT3同源二聚体与DNA结合的X射线晶体结构（PDB代码：1BG1）。去除双链DNA、结晶水和PO4-缓冲分子。添加STAT3单体及其氢原子，赋予Kollman-Uni电荷，并使用Sybyl软件（版本6.5）进行能量最小化。提取天然 pTyr 肽作为配体。以该配体的质心为中心，构建一个覆盖 STAT3 SH2 结构域-pTyr 相互作用区域的网格盒（20×20×20 个点，间距 0.375 Å）。使用 AutoDock（版本 4.0）将阿兰托内酯对接至 SH2 结构域。使用 Discovery Studio（版本 3.0）生成示意图。[2] MMP-9 活性的明胶酶谱分析：将细胞接种于无血清 DMEM 培养基中，并用阿兰托内酯处理 24 小时。取上清液进行含 0.1% 明胶的 8% SDS-PAGE 凝胶电泳。凝胶用 2.5% Triton X-100 洗涤，并在显色缓冲液（50 mM Tris-Cl，pH 7.6，200 mM NaCl，10 mM CaCl2）中于 37°C 孵育 24 小时。明胶酶活性通过以下方法显色：用 0.1% 考马斯亮蓝 R-250 的 45% 甲醇/10% 乙酸溶液染色 30 分钟，然后用 45% 甲醇/10% 乙酸溶液脱色。[2] |
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| 细胞实验 |
细胞活力检测[4]
细胞类型： HCT-8 细胞。 测试浓度： 5 μg/mL (~21.6 μM)。 孵育时间： 24 小时。 实验结果： 激活 HCT-8 细胞中的激活素信号通路。 HepG2 细胞在添加了 10% 胎牛血清、100 单位/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素的 DMEM 培养基中，于 37°C、5% CO2 条件下培养。细胞用溶于 DMSO 的土木香内酯（最终 DMSO 浓度为 1%）处理。DMSO 处理的细胞作为对照。[1] 细胞活力通过 MTT 法测定。将细胞用不同浓度的土木香内酯处理12小时后，加入MTT试剂（500 μg/mL），于37℃孵育4小时。将生成的甲臜晶体溶解于150 μL DMSO中，并在570 nm处测定吸光度。细胞存活率以对照组为基准进行计算。IC50值使用GraphPad Prism 5软件计算。[1] 用40 μM土木香内酯（有或无NAC）处理细胞0、3、6和12小时后，通过相差显微镜观察细胞形态变化。[1] 活/死细胞检测：将细胞用40 μM土木香内酯（有或无NAC）处理0、3、6和12小时后，用2 μM钙黄绿素AM和4 μM碘化丙啶（PI）的PBS溶液在室温下避光染色20分钟。活细胞和死细胞通过显微镜计数（每个样本100个细胞）。[1] 细胞凋亡检测：将细胞用40 μM土木香内酯处理0、3、6、12小时，收集细胞，用PBS洗涤，并重悬于500 μL结合缓冲液中，该缓冲液含有5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，避光孵育15分钟，然后进行流式细胞术分析。[1] 活性氧（ROS）测定：将细胞用40 μM土木香内酯处理0、3、6、12小时，然后在37°C下与10 μM DCFH-DA孵育30分钟，收集细胞，洗涤，重悬于PBS中，过滤，并通过流式细胞术分析DCF荧光。 [1] MMP 测定：将细胞用 40 μM 土木香内酯处理 0、3、6 和 12 小时，然后在黑暗中用含 10 μg 罗丹明 123 的 1 mL PBS 重悬 30 分钟，离心，洗涤，重悬于 PBS 中，过滤，并通过流式细胞术进行分析。[1] GSH 和 GSSG 测定：将细胞用 40 μM 土木香内酯处理 0、3、6 和 12 小时，或在有或无 2 mM 甲硫氨酸和 3 mM NAC 的情况下用 40 μM 土木香内酯处理 6 小时。使用商业试剂盒通过分光光度法测定细胞内和细胞外 GSH/GSSG。结果以 nmol GSH/mg 蛋白表示。 [1] 高效液相色谱分析：将 1 mM 土木香内酯与 0、5、15 和 30 mM GSH 在不含胎牛血清的 DMEM 培养基中于 37°C 孵育 30 分钟。使用 C18 色谱柱，以乙腈/水 (65:35) 为流动相，进行 30 分钟的高效液相色谱分析，并在 227 nm 波长处检测洗脱曲线。[1] RNA 提取和 RT-PCR：使用商业试剂盒提取总 RNA。以 500 ng 总 RNA 为模板进行反转录，合成 cDNA。PCR 反应进行 35 个循环（94°C 1 分钟，52°C 30 秒，72°C 1 分钟），最后在 72°C 延伸 10 分钟。使用 γ-GCS 和 GAPDH 的引物。产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离，并用溴化乙锭染色。[1] 免疫印迹：将40 μg蛋白样品进行12% SDS-PAGE电泳，然后转移至PVDF膜。用5%脱脂牛奶封闭后，将膜与一抗（Bax (1:300)、Bcl-2 (1:1000)、caspase-3 (1:500)、pTyr705 STAT3 (1:300)、谷胱甘肽还原酶 (1:300) 和β-actin (1:400)）于室温孵育2小时，再与HRP标记的二抗 (1:5000) 孵育1小时。使用ECL化学发光试剂盒在X光胶片上检测信号。[1] |
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| 动物实验 |
动物/疾病模型： 6周龄雌性无胸腺BALB/c裸鼠[2]。
剂量： 2.5 mg/kg。 给药途径： 每2天腹腔注射一次。 实验结果： 显示出抗癌活性。 肿瘤异种移植研究：将MDA-MB-231细胞（5×10^6个细胞/200 μL）皮下注射到6周龄雌性无胸腺BALB/c裸鼠的右侧腹部。注射10天后，将小鼠随机分为治疗组和对照组（n=5）。阿兰内酯悬浮于0.1% DMSO（v/v）生理盐水中。治疗组小鼠每2天腹腔注射一次阿兰托内酯（2.5 mg/kg体重），连续14天。对照组小鼠注射等体积的溶剂（0.1% DMSO生理盐水，100 μL，腹腔注射）。每2天使用游标卡尺测量肿瘤体积，计算公式为：长×宽²×π/6。治疗14天后，处死小鼠，取出肿瘤，称重，并用4%多聚甲醛固定，用于免疫组织化学分析。[2] 免疫组织化学：将肿瘤组织包埋于石蜡中，切片与Ki-67和p-STAT3抗体（1:200稀释）孵育。使用HRP EnVision系统显色，并用3,3′-二氨基联苯胺四盐酸盐染色检测过氧化物酶结合位点。切片用梅耶氏苏木精复染后封片，然后在显微镜下观察。[2] |
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
阿兰托内酯是一种倍半萜内酯，其结构为3a,5,6,7,8,8a,9,9a-八氢萘并[2,3-b]呋喃-2-酮，在5位和8a位分别含有两个甲基取代基，在3位含有一个亚甲基取代基。它是一种植物代谢产物，具有诱导细胞凋亡和抗肿瘤活性。它是一种倍半萜内酯、萘并呋喃类化合物和烯烃类化合物。据报道，阿兰托内酯存在于旋覆花（Inula grandis）、日本旋覆花（Inula japonica）和其他具有相关数据的生物体中。
阿兰托内酯是一种具有抗炎和抗癌作用的倍半萜内酯。本研究首次证明，阿兰托内酯通过其α-亚甲基-γ-内酯部分与谷胱甘肽（GSH）直接结合，从而消耗HepG2细胞中的GSH。 GSH耗竭会导致STAT3磷酸化抑制、氧化应激、Bcl-2家族蛋白调控（Bax/Bcl-2比值升高）、线粒体膜电位耗散和caspase-3激活，最终诱导细胞凋亡。该化合物有望成为肝癌治疗的先导化疗药物。[1] |
| 分子式 |
C15H20O2
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|---|---|
| 分子量 |
232.323
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| 精确质量 |
232.146
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| CAS号 |
546-43-0
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| PubChem CID |
72724
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.1±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
275.0±0.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
78-79ºC
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| 闪点 |
111.5±18.2 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.5 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.534
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| LogP |
3.69
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| tPSA |
26.3
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
0
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| 重原子数目 |
17
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| 分子复杂度/Complexity |
421
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
C[C@H]1CCC[C@]2(C1=C[C@H]3[C@@H](C2)OC(=O)C3=C)C
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| InChi Key |
PXOYOCNNSUAQNS-AGNJHWRGSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H20O2/c1-9-5-4-6-15(3)8-13-11(7-12(9)15)10(2)14(16)17-13/h7,9,11,13H,2,4-6,8H2,1,3H3/t9-,11+,13+,15+/m0/s1
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| 化学名 |
(3aR,5S,8aR,9aR)-5,8a-dimethyl-3-methylidene-5,6,7,8,9,9a-hexahydro-3aH-benzo[f][1]benzofuran-2-one
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| 别名 |
AI3-31147Alantolactone AI331147 AI3 31147
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~430.44 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.3044 mL | 21.5220 mL | 43.0441 mL | |
| 5 mM | 0.8609 mL | 4.3044 mL | 8.6088 mL | |
| 10 mM | 0.4304 mL | 2.1522 mL | 4.3044 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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