GnRH receptor (Type I GnRH receptor). [2]

与未添加阿拉瑞林的情况相比，阿拉瑞林显著降低了细胞活力。浓度为 10⁻⁵ M 的阿拉瑞林对细胞活力的刺激作用最强，且呈剂量依赖性[1]。

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MTT 法检测显示，阿拉瑞林显著降低了培养的大鼠胃平滑肌细胞 (GSMC) 的活力。在浓度为 10⁻⁹、10⁻⁷ 和 10⁻⁵ mol/L 时，OD 值 (490 nm) 分别为 0.533±0.073、0.368±0.029 和 0.243±0.042，而对照组的 OD 值为 0.728±0.100。在 10⁻⁵ mol/L 浓度下达到最大抑制效果，且呈剂量依赖性（F=59.083，P<0.01）[1]。
- 通过³H-TdR掺入法评估，阿拉瑞林抑制了 GSMC 中的 DNA 合成。用阿拉瑞林（10⁻⁹、10⁻⁷、10⁻⁵ mol/L）处理 16 小时后，再进行 8 小时的³H-TdR 脉冲标记，各组的掺入计数（cpm）分别为 1448.17±327.72、945.83±374.32 和 385.83±184.66，而对照组为 1936.50±440.99。在 10⁻⁵ mol/L 浓度下，抗增殖作用最为显著 (F=22.33, P<0.05)，且呈剂量依赖性 [1]。
- 阿拉瑞林降低了 GSMC 中增殖细胞核抗原 (PCNA) 的平均荧光值。经 10⁻⁹、10⁻⁷ 和 10⁻⁵ mol/L 阿拉瑞林处理 24 小时后，平均荧光值分别为 11.37±1.99、9.35±1.38 和 7.37±1.06，而对照组为 13.48±1.31。这种抑制作用呈剂量依赖性 (F=15.86, P<0.01) [1]。
- 流式细胞术 DNA 分析显示，阿拉瑞林显著增加了 G₁ 期细胞的比例，并降低了 S 期细胞的比例。在阿拉瑞林浓度分别为 10⁻⁹、10⁻⁷ 和 10⁻⁵ mol/L 时，G₁ 期细胞比例分别为 80.00±9.42%、79.60±7.43% 和 80.20±10.03%（对照组：70.80±11.30%），S 期细胞比例分别为 9.93±1.73%、6.60±1.54% 和 3.20±1.20%（对照组：17.50±3.40%）。阿拉瑞林对 S 期细胞比例的影响呈剂量依赖性（F=32.5，P<0.05）[1]。

阿瑞林能够直接作用于大鼠壁细胞，并抑制迷走神经功能，两者均可减少胃酸分泌[2]。阿瑞林能够显著增加大鼠胃黏膜下平滑肌细胞（GSMC）的G1期细胞比例，并降低S期细胞比例[1]。在麻醉大鼠中，以2 μg/kg的剂量经胃腔灌注阿瑞林，胃pH值在0至45分钟内呈时间依赖性逐渐升高，并在45分钟时达到约5.548 ± 0.237的平台期，显著高于对照组（P < 0.01）。 [2] 在麻醉大鼠中，尾静脉注射2 μg/kg的阿拉瑞林后，胃pH值在0至45分钟内呈时间依赖性逐渐升高，并在45分钟时达到约5.244 ± 0.371的平台期，显著高于对照组（P < 0.01）。静脉输注阿拉瑞林抑制胃酸分泌的机制涉及迷走神经活性的降低。[2]

将细胞用 2.5 g/L 胰蛋白酶溶液消化后，接种于 96 孔板中。培养 24 小时至细胞密度约为 800 g/L 的亚融合状态后，向每个孔中加入 0.1 mL 含有 2.5% 小牛血清和不同浓度（0.001、0.1 和 10 μM）阿拉瑞林的培养基。然后将孔板置于 CO₂ 培养箱中培养一整天。每个浓度至少使用 12 个孔进行测试。最后，向每个孔中加入 15 μL MTT 溶液，并孵育 4 小时。移除培养基和 MTT 溶液后，向每个孔中加入 150 μL DMSO，并振荡 10 分钟以溶解结晶。使用酶联免疫吸附测定仪（ELISA）在 490 nm 波长处测定吸光度值[1]。

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原代培养的大鼠胃平滑肌细胞（GSMC）取自 1-3 日龄雄性 Sprague-Dawley 大鼠。取出胃，刮去黏液，将平滑肌组织切碎成 1.0 mm³ 的小块。将组织块置于含 I 型胶原酶的 DMEM 培养基中，于 37°C 消化 30-60 分钟，每 20 分钟收集一次细胞。将细胞悬液以 500 r/min 离心 5 分钟，用 DMEM 培养基洗涤两次，然后在含 100 mL/L 小牛血清、100 U/mL 青霉素 G 和 100 U/mL 链霉素的 DMEM 培养基中，于 50 mL/L CO₂ 湿润环境下培养。为去除成纤维细胞，细胞预先贴壁 90 分钟。培养基每3天更换一次，每4-5天用胰蛋白酶（2.5 g/L）进行传代培养。实验在第3-5代细胞上进行[1]。
- MTT 实验：将GSMC以每孔0.1 mL 10⁴个细胞的密度接种于96孔板中。培养24小时至细胞汇合度达到约80%后，加入0.1 mL含2.5%小牛血清和阿拉瑞林（10⁻⁹、10⁻⁷、10⁻⁵ mol/L）的培养基，孵育24小时。然后，向每孔加入15 mL MTT溶液（5 g/L，溶于pH 7.2的PBS缓冲液），孵育4小时。移除培养基和MTT溶液，向每孔加入150 mL DMSO，振荡10分钟以溶解结晶。使用酶标仪在 490 nm 波长处测定吸光度值 [1]。
- ³H-TdR 掺入实验：将 GSMC 细胞以每孔 0.1 mL 10⁴ 个细胞的密度接种于 96 孔板中。24 小时后，加入 0.1 mL 含 2.5% 小牛血清和阿拉瑞林（10⁻⁹、10⁻⁷、10⁻⁵ mol/L）的培养基，孵育 16 小时。然后，向每孔加入 ³H-TdR（2 mCi/mL），孵育 8 小时。最后，加入等体积的 100 mL/L 三氯乙酸 (TCA) 终止孵育，以破坏细胞并沉淀大分子。用甲醇洗涤后，将沉淀物收集在玻璃纤维滤纸上，干燥，与0.5 mL闪烁液混合，并用闪烁计数器测定放射性[1]。
- PCNA免疫荧光测定：将GSMC接种于6孔板的盖玻片上。培养24小时至细胞汇合度达到约80%后，加入2 mL含有25 mL/L小牛血清和阿拉瑞林（10⁻⁹、10⁻⁷、10⁻⁵ mol/L）的培养基，继续培养24小时。细胞用 40 g/L 多聚甲醛固定 30 分钟，用 PBS 洗涤，用甲醇-H₂O₂ 处理 30 分钟以去除内源性过氧化物酶，然后在 4°C 下与小鼠抗 PCNA 抗体（1:200 稀释）孵育过夜，随后在室温下与生物素标记的山羊抗兔 IgG 抗体（1:200 稀释）孵育 2 小时，最后在室温下与 SABC-fluo Cy3（1:100 稀释）孵育 1 小时。使用激光共聚焦显微镜扫描 PCNA 的平均荧光值 [1]。
- 流式细胞术细胞周期分析：将 GSMC 以每孔 1.5 mL 10⁷ 个细胞的密度接种于 12 孔板中。细胞生长至亚汇合度约80%后（24小时），加入2 mL含25 mL/L小牛血清和阿拉瑞林（10⁻⁹、10⁻⁷、10⁻⁵ mol/L）的培养基，继续培养48小时。用胰蛋白酶（2.5 g/L）消化细胞，用700 mL/L乙醇固定，并用碘化丙啶（PI）染色进行DNA分析。使用流式细胞仪（EPICS Profile II）[1]分析DNA含量和细胞周期分布。

大鼠：实验采用两组雄性Sprague-Dawley大鼠。第一组：使用分室胃模型测定胃酸分泌量。简而言之，切开腹部，暴露胃和十二指肠并分别结扎，然后向每个胃室中注入1.5 mL 0.9%氯化钠溶液（含2 μg/kg阿瑞林）。分别在15、30、45和60分钟后使用ABL-500测定pH值，并从分室胃中抽取胃液。对照组以生理盐水代替阿瑞林。第二组：麻醉后，经尾静脉注射2 mL阿瑞林（2 μg/kg）。对照组注射生理盐水代替阿瑞林。之后，结扎十二指肠和胃，并立即注入1.5 mL生理盐水。

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雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g，出生后30-60天）禁食24小时，但可自由饮用自来水。用戊巴比妥钠（40 mg/kg，腹腔注射）麻醉后，将动物随机分为两组（每组n=12）。
第一组：在分室胃中测量胃酸分泌。切开腹部，暴露胃和十二指肠并结扎；然后将含有Alarelin（2 μg/kg）的1.5 mL 0.9%氯化钠溶液注入分室胃中。分别在15、30、45和60分钟后抽取胃液并测量pH值。对照组注入生理盐水代替Alarelin。 [2]
第二组：麻醉后，经尾静脉注射2 ml阿拉瑞林（2 μg/Kg）。对照组注射生理盐水代替阿拉瑞林。然后结扎胃和十二指肠，并立即灌注1.5 ml生理盐水。分别于15、30、45和60分钟后抽取胃液并测量pH值。[2]

[1]. Expression of gonadotropin-releasing hormone receptor and effect of gonadotropin-releasing hormone analogue on proliferation of cultured gastric smooth muscle cells of rats. World J Gastroenterol. 2004 Jun 15;10(12):1780-4.

[2]. Distribution, cloning and sequencing of GnRH, its receptor, and effects of gastric acid secretion of GnRH analogue in gastric parietal cells of rats. Life Sci. 2005 Feb 4;76(12):1351-65.

另见：LHRH、Ala(6)-Gly(10)-乙酰胺-（注：已移至此处）；Surfagon（注：已移至此处）。

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阿拉瑞林是一种GnRH-1类似物，它通过GnRH受体直接作用于胃壁细胞。GnRH与其受体结合后激活涉及Giα亚基的信号转导通路，Giα亚基抑制腺苷酸环化酶，从而抑制胃酸分泌。它还可以通过降低迷走神经活性来抑制胃酸分泌。[2]

C60H86N16O16

1287.42

1286.64

C, 55.98; H, 6.73; N, 17.41; O, 19.88

79561-22-1

(Des-Gly10,D-Ala6,Pro-NHEt9)-LHRH; 52435-06-0

9855027

White to off-white solid powder

1.482 g/cm3

1.694

-0.5

466.34

15

14

30

84

2320

9

C(=O)(O)C.C(C1=CNC2C=CC=CC1=2)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N1CCC[C@H]1C(=O)NCC)=O)CC1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC([C@@H]1CCC(=O)N1)=O)CC1NC=NC=1

DPWSRXJWCYEGIV-PFHUABGLSA-N

InChI=1S/C56H78N16O12.2C2H4O2/c1-5-60-54(83)45-13-9-21-72(45)55(84)39(12-8-20-61-56(57)58)66-50(79)40(22-30(2)3)67-47(76)31(4)64-49(78)41(23-32-14-16-35(74)17-15-32)68-53(82)44(28-73)71-51(80)42(24-33-26-62-37-11-7-6-10-36(33)37)69-52(81)43(25-34-27-59-29-63-34)70-48(77)38-18-19-46(75)65-38;2*1-2(3)4/h6-7,10-11,14-17,26-27,29-31,38-45,62,73-74H,5,8-9,12-13,18-25,28H2,1-4H3,(H,59,63)(H,60,83)(H,64,78)(H,65,75)(H,66,79)(H,67,76)(H,68,82)(H,69,81)(H,70,77)(H,71,80)(H4,57,58,61);2*1H3,(H,3,4)/t31-,38+,39+,40+,41+,42+,43+,44+,45+;;/m1../s1

acetic acid;(2S)-N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-(diaminomethylideneamino)-1-[(2S)-2-(ethylcarbamoyl)pyrrolidin-1-yl]-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]-5-oxopyrrolidine-2-carboxamide

LHRH-A; larelin Acetate; Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Leu-Arg-Pro-NHEt; 6-D-Ala-10-D-gly-LHRH-ethylamide; 6-D-Ala-10-D-gly-LHRH-ethylamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~62.5 mg/mL (~48.6 mM)
H2O: ~100 mg/mL (~77.7 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (1.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (1.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (1.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (77.67 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。