alpha-Hederin   中文名称: Alpha常春藤苷

Mitochondrial pathway (Bax, Bcl-2, caspase-3, caspase-8, caspase-9, AIF, Apaf-1, cytochrome C) - no IC50/Ki/EC50/DC50 values reported
ROS-mediated pathway - no quantitative binding data reported
No specific receptor or enzyme targets identified in these studies. [1][2]

α-常春藤皂苷具有细胞毒性，在相对较低的浓度下即可抑制两种细胞系的增殖。经α-常春藤皂苷处理的细胞有丝分裂活性降低[2]。

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增殖抑制：α-常春藤皂苷以剂量和时间依赖的方式显著抑制HGC-27和SGC-7901胃癌细胞的增殖，24小时IC50值分别为20.86 µM和25.91 µM（CCK-8法）。EdU滞留实验显示DNA合成受到浓度依赖性抑制。克隆形成实验显示克隆数量减少。[1]
细胞周期阻滞：流式细胞术显示G1期阻滞百分比分别为46.29%（对照组）、62.02%（低剂量组）、65.44%（中剂量组）和69.62%（高剂量组）。 Western blot结果显示P16、P21、P53和CDK2蛋白水平升高，而Cyclin D1蛋白水平降低。[1]
细胞凋亡诱导：Hoechst 33258染色显示凋亡细胞核出现细胞收缩、膜起泡、染色质浓缩和核碎裂。凋亡率呈剂量依赖性增加。Western blot结果显示Bax、cleaved caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白水平升高，而Bcl-2蛋白水平降低。[1]
GSH耗竭：随着α-常春藤皂苷浓度（0-40 µM）的增加，细胞内GSH逐渐耗竭。BSO（GSH抑制剂）预处理增强了抗癌作用，而NAC（GSH前体）则减弱了抗癌作用。 [1]
ROS 积累和 ATP 耗竭：α-常春藤皂苷 可增加细胞内 ROS 水平并降低 ATP 水平；BSO 可增强这些变化，NAC 可逆转这些变化。JC-1 染色显示线粒体膜电位丧失，BSO 可增强这种丧失，而 NAC 可减弱这种丧失。[1]
线粒体通路激活：线粒体和胞质组分的蛋白质印迹分析显示，α-常春藤皂苷 处理后，线粒体 AIF、Apaf-1 和细胞色素 C 水平降低，而胞质组分中相应水平升高；BSO 可增强这些变化，NAC 可减弱这些变化。[1]
体外对 B16 黑色素瘤细胞和 3T3 成纤维细胞的细胞毒性：α-常春藤皂苷 在无血清培养基中培养 8 小时后，浓度高于 5 µg/mL 时表现出细胞毒性；浓度为 10 µg/mL 时可导致显著的细胞死亡；其作用呈剂量和时间依赖性。在 FCS 或 BSA 存在下，细胞毒性降低。[2]
形态学变化：相差显微镜显示，用 5 µg/mL α-常春藤皂苷处理数小时后，细胞质内出现空泡；这些空泡不被苏木精-伊红染色或脂肪红染色。扫描电镜显示细胞表面出现火山口状凹陷和泡状突起。透射电镜显示空泡、吞噬溶酶体内的层状体以及膜破裂。[2]
B16 和 3T3 细胞的生化变化：α-常春藤皂苷（3-5 µg/mL，72 小时）可减少细胞数量；5 µg/mL 时，B16 细胞中的黑色素和蛋白质含量增加；3T3 成纤维细胞中的 DNA 和蛋白质含量增加。两种细胞系的有丝分裂指数均降低，坏死指数均升高。[2]

与百里醌类似，α-常春藤皂苷在致敏大鼠中也发挥预防作用。它可能通过干扰 miRNA-126 的表达来抑制炎症反应，从而破坏 IL-13 的分泌途径 [3]。
异种移植瘤模型：将皮下移植胃癌异种移植瘤的雄性 BALB/c 裸鼠每隔一天腹腔注射 2.5、5 和 10 mg/kg 的 α-常春藤皂苷进行治疗。肿瘤生长呈剂量依赖性显著抑制；最终平均肿瘤重量分别为 1.85 g（对照组）、1.59 g（2.5 mg/kg 组）、1.18 g（5 mg/kg 组）和 0.87 g（10 mg/kg 组）。[1]
组织学分析：HE 染色显示肿瘤细胞排列紧密，细胞核较大；可见一些有丝分裂象。 TUNEL染色显示，α-常春藤皂苷处理组的凋亡细胞数量显著增加，且呈浓度依赖性。各组均未发现肺、肝或脑转移。[1] 各组肝肾功能标志物（ALT、AST、尿素、肌酐）水平无显著差异，表明该药物安全性良好。[1]

CCK-8 细胞毒性试验：将细胞以 5×10^3 个/孔的密度接种于 96 孔板中，用 α-常春藤皂苷（0-80 µM）处理 0-36 小时，或在用 α-常春藤皂苷处理前 12 小时用 2 mM BSO 或 5 mM NAC 预处理。加入 CCK-8 溶液（10 µL CCK-8 溶于 100 µL 培养基中），孵育 2 小时，并在 450 nm 波长处测定吸光度。细胞存活率计算公式为（实验组吸光度/对照组吸光度）× 100%。 [1] EdU增殖实验：将细胞（2×10⁴/孔，24孔板）用α-常春藤皂苷（0-20 µM）处理24小时，再用50 µM EdU孵育2小时，用4%多聚甲醛固定，用0.5% Triton X-100透化，用Apollo反应混合液和Hoechst 33342染色，并在荧光显微镜下成像。[1] 克隆形成实验：将细胞（1-5×10³/孔，6孔板）用或不用BSO/NAC预处理，用10 µM α-常春藤皂苷处理，每2-3天更换一次培养基，持续约14天，用4%多聚甲醛固定，用Wright-Giemsa染色，计数克隆（≥50个细胞）。 [1]
Hoechst 33258 细胞凋亡染色：将细胞（5×10⁴ 个/孔，接种于 6 孔板的盖玻片上）用 α-常春藤皂苷（0-20 µM）处理 24 小时，或用 BSO/NAC 预处理，固定后用 Hoechst 33258 染色，并在荧光显微镜下观察细胞凋亡的核形态。[1]
流式细胞术细胞周期和细胞凋亡：用胰蛋白酶消化细胞，并在 70% 乙醇中于 4°C 固定过夜。细胞周期分析：用碘化丙啶（1 mg/mL）和 RNase（100 µg/mL）于 4°C 染色 30 分钟。细胞凋亡分析：用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶于室温染色 15 分钟。通过流式细胞术分析 DNA 含量。 [1]
GSH 含量测定：用 α-常春藤皂苷 (0-40 µM) 处理细胞 24 小时，用蛋白去除试剂 M 裂解细胞，液氮冻融，10,000×g 离心 10 分钟。使用 GSH/GSSG 检测试剂盒在 412 nm 处测定 GSH/GSSG 比值。[1]
ROS 测定：用 10 µM α-常春藤皂苷处理细胞 24 小时（有/无 BSO/NAC），在 37°C 下用 10 µM DCFH-DA 孵育 20 分钟，用酶标仪或荧光显微镜测定荧光强度。 [1]
ATP 测定：用 10 µM α-常春藤皂苷处理细胞 24 小时（有/无 BSO/NAC），用 ATP 裂解缓冲液裂解细胞，加入 ATP 检测液，使用微孔板读数仪在 30 分钟内测量发光值。[1]
线粒体膜电位 (JC-1)：用 10 µM α-常春藤皂苷处理细胞 24 小时（有/无 BSO/NAC），在 37°C 下用 JC-1 染色液孵育 20 分钟，洗涤后，用激光共聚焦荧光显微镜进行分析。 [1]
线粒体/胞质蛋白分级分离：使用细胞线粒体分离试剂盒提取蛋白，经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用针对Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3/8/9、AIF、Apaf-1、细胞色素C、Cox-IV和GAPDH的抗体进行免疫印迹，并使用双色红外成像进行检测。[1]
MTT细胞毒性试验（Danloy等）：将细胞接种于96孔板中（根据处理时间，每孔5,000-50,000个细胞），在无血清DMEM-F12-N2培养基中用α-常春藤皂苷（1-15 µg/mL）处理8-72小时，通过MTT还原法测定细胞存活率。 [2]
血清对细胞毒性的影响：将B16细胞在DMEM-F12-N2培养基中用10 µg/mL的α-常春藤皂苷处理72小时，培养基中添加不同浓度的BSA或FCS，用MTT法测定细胞存活率。[2]
细胞增殖/坏死分析：将细胞（150,000个/培养皿）用α-常春藤皂苷（3或5 µg/mL）处理24或48小时，用Bouin氏液固定，苏木精-伊红染色，计数有丝分裂细胞和坏死细胞（2,000个细胞/玻片）。 [2]
DNA/蛋白质/黑色素定量：将350,000个B16细胞或1,050,000个3T3细胞用α-常春藤皂苷（3或5 µg/mL）处理72小时，进行细胞计数，黑色素采用Prasad法测定，蛋白质采用Bradford法测定，DNA采用Labarca法测定。[2]
电子显微镜：将细胞用α-常春藤皂苷处理，用戊二醛和四氧化锇固定，包埋于Epon 812树脂中用于透射电镜(TEM)观察，或脱水并镀金钯后用于扫描电镜(SEM)观察。[2]

异种移植研究：将胃癌细胞皮下接种于4-6周龄的雄性BALB/c裸鼠。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分为4组（n=6）：对照组（生理盐水）、低剂量组（2.5 mg/kg）、中剂量组（5 mg/kg）和高剂量组（10 mg/kg）的α-常春藤皂苷组。每隔一天腹腔注射药物或生理盐水。每3天用游标卡尺测量肿瘤大小；肿瘤体积计算公式为（宽度² × 长度）/2。实验结束时，取出肿瘤，称重，并进行HE染色和TUNEL染色分析。同时监测小鼠的体重和肝肾功能指标（ALT、AST、尿素、肌酐）。 [1]体外细胞培养实验（Danloy等人）：将B16黑色素瘤细胞和3T3成纤维细胞培养于含10%胎牛血清（FCS）和青霉素的MEM或DMEM培养基中。孵育24小时后，移除培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞，然后用含α-常春藤皂苷（1-15 µg/mL）的DMEM-F12-N2培养基在37℃、5% CO2条件下处理8-72小时。在血清效应实验中，培养基中含有10 µg/mL皂苷，并逐渐增加牛血清白蛋白（BSA）或胎牛血清（FCS）的浓度。[2]

体外细胞毒性：在无血清培养基中，浓度高于 5 µg/mL 的 α-常春藤皂苷处理 B16 黑色素瘤细胞和 3T3 成纤维细胞仅 8 小时后即可产生细胞毒性。浓度为 10-15 µg/mL 时，在所有时间点（8-72 小时）均观察到显著的细胞死亡。在 FCS 或 BSA 存在下，细胞毒性降低，表明其与血清蛋白结合。[2] 细胞死亡诱导：α-常春藤皂苷处理（3-5 µg/mL，24-48 小时）可增加 B16 细胞和 3T3 细胞的坏死指数并降低有丝分裂指数。观察到细胞空泡化、细胞膜改变和细胞回缩。 [2]体内毒性：在异种移植小鼠中，以2.5、5和10 mg/kg（腹腔注射，隔日一次）的剂量给予α-常春藤皂苷治疗，与对照组相比，肝功能（ALT、AST）或肾功能（尿素、肌酐）均无显著差异，表明其安全性良好。未观察到肺、肝或脑转移。[1]这些研究中未报告LD50、血浆蛋白结合率或药物相互作用数据。[1][2]

[1]. Wang J, et al. α-Hederin induces the apoptosis of gastric cancer cells accompanied by glutathione decrement and reactive oxygen species generation via activating mitochondrial dependent pathway. Phytother Res. 2020;34(3):601-611.
[2]. Danloy S et al. Effects of alpha-hederin, a saponin extracted from Hedera helix, on cells cultured in vitro. Planta Med, 1994 Feb, 60(1):45-9.
[3]. Maryam Fallahi et al. Effect of Alpha-Hederin, the active constituent of Nigella sativa, on miRNA-126, IL-13 mRNA levels and inflammation of lungs in ovalbumin-sensitized male rats. Planta Med, 1994 Feb, 60(1):45-9.

刺五加皂苷A是一种三萜皂苷，由常春藤皂苷元通过糖苷键与3位上的2-O-(6-脱氧-α-L-甘露吡喃糖基)-α-L-阿拉伯吡喃糖基残基连接而成。它从刺五加（Kalopanax pictus）的茎皮中分离得到。它具有抗炎活性，是一种植物代谢产物。它是一种五环三萜化合物、三萜皂苷、二糖衍生物和羟基单羧酸。其功能与常春藤皂苷元相关。 α-常春藤皂苷已在金银花（Lonicera macrantha）、台北银莲花（Anemone taipaiensis）以及其他一些具有相关数据的生物体中被报道。

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背景：α-常春藤皂苷是一种单糖苷三萜皂苷，提取自五加科常春藤（Hedera helix L.），也存在于其他植物中，例如黑种草属（Nigella）植物。它已被用于中药，并具有多种生物活性，包括解痉、抗炎、抗氧化、抗利什曼原虫、抗真菌（体外和体内）、杀软体动物、驱虫、抗阿米巴原虫和杀滴虫作用。根据Ames试验，它没有致突变作用，并且能降低苯并[a]芘和吸烟者尿液的致突变性。 [1][2]
化学性质：α-常春藤皂苷是一种单糖苷皂苷，C-3位有一个糖基。它具有溶血活性。研究中使用的纯度≥90%（Wang等人）和>98%（Danloy等人）。储备液用DMSO（1 mM）或蒸馏水（200 µg/mL）配制。[1][2]
作用机制：α-常春藤皂苷通过线粒体途径诱导细胞凋亡：(1) 细胞内GSH耗竭导致氧化应激；(2) ROS积累；(3) 线粒体膜电位丧失；(4) ATP耗竭；(5) AIF、Apaf-1和细胞色素C从线粒体释放到胞质溶胶； (6) 激活 caspase-9、caspase-3 和 caspase-8；(7) 增加 Bax 表达并降低 Bcl-2 表达。它还通过上调 P16、P21 和 P53 以及下调 Cyclin D1 诱导细胞周期停滞于 G1 期。此外，α-常春藤皂苷可引起细胞膜改变、胞质空泡化以及含有层状体的吞噬溶酶体的形成。[1][2]
功效：α-常春藤皂苷对胃癌细胞（HGC-27、SGC-7901）显示出良好的抗肿瘤活性，IC50 值分别为 20.86 µM 和 25.91 µM，并能抑制体内异种移植瘤的生长。它还对 B16 黑色素瘤细胞、3T3 成纤维细胞和 HeLa 细胞显示出细胞毒性作用。它能增强 5-氟尿嘧啶对 HT-29 结肠癌细胞的疗效。[1][2]
潜在的治疗应用：α-常春藤皂苷具有良好的安全性，有望成为治疗胃癌的天然抗癌剂，但其分子机制仍需进一步阐明。[1]

C41H66O12

750.9556

750.455

27013-91-8

73296

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

849.6±65.0 °C at 760 mmHg

215ºC (dec.)

250.7±27.8 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.601

8.37

195.6

7

12

6

53

1440

18

O(C1([H])C([H])(C([H])(C([H])(C([H])([H])O1)O[H])O[H])OC1([H])C([H])(C([H])(C([H])(C([H])(C([H])([H])[H])O1)O[H])O[H])O[H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C2(C([H])([H])[H])C([H])(C([H])([H])C([H])([H])C3(C([H])([H])[H])C4(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C5(C(=O)O[H])C([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C5([H])C4=C([H])C([H])([H])C32[H])C1(C([H])([H])[H])C([H])([H])O[H]

KEOITPILCOILGM-LLJOFIFVSA-N

InChI=1S/C41H66O12/c1-21-28(44)30(46)31(47)33(51-21)53-32-29(45)24(43)19-50-34(32)52-27-11-12-37(4)25(38(27,5)20-42)10-13-40(7)26(37)9-8-22-23-18-36(2,3)14-16-41(23,35(48)49)17-15-39(22,40)6/h8,21,23-34,42-47H,9-20H2,1-7H3,(H,48,49)/t21-,23-,24-,25+,26+,27-,28-,29-,30+,31+,32+,33-,34-,37-,38-,39+,40+,41-/m0/s1

(4aS,6aR,6aS,6bR,8aR,9R,10S,12aR,14bS)-10-[(2S,3R,4S,5S)-4,5-dihydroxy-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-9-(hydroxymethyl)-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carboxylic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL (~133.16 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。