alpha-Hederin   中文名称: Alpha常春藤苷

Mitochondrial pathway (Bax, Bcl-2, caspase-3, caspase-8, caspase-9, AIF, Apaf-1, cytochrome C) - no IC50/Ki/EC50/DC50 values reported
ROS-mediated pathway - no quantitative binding data reported
No specific receptor or enzyme targets identified in these studies. [1][2]
α-Hederin targets multiple cellular pathways involved in cancer cell survival and proliferation. It induces apoptosis through the mitochondrial-dependent pathway, accompanied by glutathione depletion and reactive oxygen species generation. The compound reduces mitotic activity in treated cells. Its anticancer activity is mediated through apoptosis induction, cell cycle arrest, and inhibition of glycolysis and autophagy. The exact molecular targets have not been fully elucidated.

α-常春藤皂苷具有细胞毒性，在相对较低的浓度下即可抑制两种细胞系的增殖。经α-常春藤皂苷处理的细胞有丝分裂活性降低[2]。

---

增殖抑制：α-常春藤皂苷以剂量和时间依赖的方式显著抑制HGC-27和SGC-7901胃癌细胞的增殖，24小时IC50值分别为20.86 µM和25.91 µM（CCK-8法）。EdU滞留实验显示DNA合成受到浓度依赖性抑制。克隆形成实验显示克隆数量减少。[1]
细胞周期阻滞：流式细胞术显示G1期阻滞百分比分别为46.29%（对照组）、62.02%（低剂量组）、65.44%（中剂量组）和69.62%（高剂量组）。 Western blot结果显示P16、P21、P53和CDK2蛋白水平升高，而Cyclin D1蛋白水平降低。[1]
细胞凋亡诱导：Hoechst 33258染色显示凋亡细胞核出现细胞收缩、膜起泡、染色质浓缩和核碎裂。凋亡率呈剂量依赖性增加。Western blot结果显示Bax、cleaved caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白水平升高，而Bcl-2蛋白水平降低。[1]
GSH耗竭：随着α-常春藤皂苷浓度（0-40 µM）的增加，细胞内GSH逐渐耗竭。BSO（GSH抑制剂）预处理增强了抗癌作用，而NAC（GSH前体）则减弱了抗癌作用。 [1]
ROS 积累和 ATP 耗竭：α-常春藤皂苷 可增加细胞内 ROS 水平并降低 ATP 水平；BSO 可增强这些变化，NAC 可逆转这些变化。JC-1 染色显示线粒体膜电位丧失，BSO 可增强这种丧失，而 NAC 可减弱这种丧失。[1]
线粒体通路激活：线粒体和胞质组分的蛋白质印迹分析显示，α-常春藤皂苷 处理后，线粒体 AIF、Apaf-1 和细胞色素 C 水平降低，而胞质组分中相应水平升高；BSO 可增强这些变化，NAC 可减弱这些变化。[1]
体外对 B16 黑色素瘤细胞和 3T3 成纤维细胞的细胞毒性：α-常春藤皂苷 在无血清培养基中培养 8 小时后，浓度高于 5 µg/mL 时表现出细胞毒性；浓度为 10 µg/mL 时可导致显著的细胞死亡；其作用呈剂量和时间依赖性。在 FCS 或 BSA 存在下，细胞毒性降低。[2]
形态学变化：相差显微镜显示，用 5 µg/mL α-常春藤皂苷处理数小时后，细胞质内出现空泡；这些空泡不被苏木精-伊红染色或脂肪红染色。扫描电镜显示细胞表面出现火山口状凹陷和泡状突起。透射电镜显示空泡、吞噬溶酶体内的层状体以及膜破裂。[2]
B16 和 3T3 细胞的生化变化：α-常春藤皂苷（3-5 µg/mL，72 小时）可减少细胞数量；5 µg/mL 时，B16 细胞中的黑色素和蛋白质含量增加；3T3 成纤维细胞中的 DNA 和蛋白质含量增加。两种细胞系的细胞分裂指数均降低，坏死指数均升高。[2]体外实验表明，α-常春藤皂苷对四种人类癌细胞系（A549（肺癌）、HEp-2（喉表皮样癌）、HT-29（结肠腺癌）和MIA PaCa-2（胰腺癌））具有剂量和时间依赖性的细胞毒性和凋亡/坏死作用。它通过激活线粒体依赖性途径，抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡，同时伴有谷胱甘肽耗竭和活性氧（ROS）生成。该化合物对乳腺癌细胞的生长具有强烈的抑制作用。α-常春藤皂苷可诱导线粒体膜电位去极化，从而释放Apaf-1并激活caspase级联反应。

与百里醌类似，α-常春藤皂苷在致敏大鼠中也发挥预防作用。它可能通过干扰 miRNA-126 的表达来抑制炎症反应，从而破坏 IL-13 的分泌途径 [3]。
异种移植瘤模型：将皮下移植胃癌异种移植瘤的雄性 BALB/c 裸鼠每隔一天腹腔注射 2.5、5 和 10 mg/kg 的 α-常春藤皂苷进行治疗。肿瘤生长呈剂量依赖性显著抑制；最终平均肿瘤重量分别为 1.85 g（对照组）、1.59 g（2.5 mg/kg 组）、1.18 g（5 mg/kg 组）和 0.87 g（10 mg/kg 组）。[1]
组织学分析：HE 染色显示肿瘤细胞排列紧密，细胞核较大；可见一些有丝分裂象。 TUNEL染色显示，α-常春藤皂苷处理组的凋亡细胞数量显著增加，且呈浓度依赖性。所有组均未发现肺、肝或脑转移。[1] 各组间肝肾功能标志物（ALT、AST、尿素、肌酐）无显著差异，表明其安全性良好。[1] 体内研究表明，α-常春藤皂苷在角叉菜胶诱导的大鼠足爪水肿模型中具有急性抗炎活性。该化合物还具有抗利什曼原虫活性。作为一种皂苷，其口服生物利用度有限，但在癌症和炎症的临床前模型中已显示出疗效。此外，其抗氧化活性也已被证实。需要进行详细的体内疗效和药代动力学动物模型研究，以充分评估其治疗潜力。

细胞毒性试验的通用方案使用在适宜培养基（RPMI-1640 或含 10% FBS 的 DMEM）中培养的人类癌细胞系。将细胞以每孔 5,000-10,000 个细胞的密度接种于 96 孔板中，并使其过夜贴壁。将 α-常春藤皂苷溶解于 DMSO 中，并用培养基稀释至不同浓度（1-100 μM）。细胞处理 24-72 小时。采用 MTT、CCK-8 或 SRB 法评估细胞活力。IC50 值由剂量反应曲线计算得出。通过 caspase-3/7 活性、Annexin V/PI 双染或 TUNEL 法评估细胞凋亡。使用 JC-1 或 TMRE 染色法测量线粒体膜电位。

CCK-8 细胞毒性试验：将细胞以 5×10^3 个/孔的密度接种于 96 孔板中，用 α-常春藤皂苷（0-80 µM）处理 0-36 小时，或在用 α-常春藤皂苷处理前 12 小时用 2 mM BSO 或 5 mM NAC 预处理。加入 CCK-8 溶液（10 µL CCK-8 溶于 100 µL 培养基中），孵育 2 小时，并在 450 nm 波长处测定吸光度。细胞存活率计算公式为（实验组吸光度/对照组吸光度）× 100%。 [1] EdU增殖实验：将细胞（2×10⁴/孔，24孔板）用α-常春藤皂苷（0-20 µM）处理24小时，再用50 µM EdU孵育2小时，用4%多聚甲醛固定，用0.5% Triton X-100透化，用Apollo反应混合液和Hoechst 33342染色，并在荧光显微镜下成像。[1] 克隆形成实验：将细胞（1-5×10³/孔，6孔板）用或不用BSO/NAC预处理，用10 µM α-常春藤皂苷处理，每2-3天更换一次培养基，持续约14天，用4%多聚甲醛固定，用Wright-Giemsa染色，计数克隆（≥50个细胞）。 [1]
Hoechst 33258 细胞凋亡染色：将细胞（5×10⁴ 个/孔，接种于 6 孔板的盖玻片上）用 α-常春藤皂苷（0-20 µM）处理 24 小时，或用 BSO/NAC 预处理，固定后用 Hoechst 33258 染色，并在荧光显微镜下观察细胞凋亡的核形态。[1]
流式细胞术细胞周期和细胞凋亡：用胰蛋白酶消化细胞，并在 70% 乙醇中于 4°C 固定过夜。细胞周期：用碘化丙啶（1 mg/mL）和 RNase（100 µg/mL）于 4°C 染色 30 分钟。细胞凋亡：用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶于室温染色 15 分钟。通过流式细胞术分析 DNA 含量。 [1]
GSH含量测定：用α-常春藤皂苷（0-40 µM）处理细胞24小时，用蛋白去除试剂M裂解细胞，液氮冻融，10,000×g离心10分钟。使用GSH/GSSG检测试剂盒在412 nm处测定GSH/GSSG比值。[1]
ROS测定：用10 µM α-常春藤皂苷处理细胞24小时（有/无BSO/NAC），在37°C下用10 µM DCFH-DA孵育20分钟，用酶标仪或荧光显微镜测定荧光强度。 [1]
ATP 测定：用 10 µM α-常春藤皂苷处理细胞 24 小时（有/无 BSO/NAC），用 ATP 裂解缓冲液裂解细胞，加入 ATP 检测液，使用微孔板读数仪在 30 分钟内测量发光值。[1]
线粒体膜电位 (JC-1)：用 10 µM α-常春藤皂苷处理细胞 24 小时（有/无 BSO/NAC），在 37°C 下用 JC-1 染色液孵育 20 分钟，洗涤后，用激光共聚焦荧光显微镜进行分析。 [1]
线粒体/胞质蛋白分级分离：使用细胞线粒体分离试剂盒提取蛋白，经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用针对Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3/8/9、AIF、Apaf-1、细胞色素C、Cox-IV和GAPDH的抗体进行免疫印迹，并使用双色红外成像进行检测。[1]
MTT细胞毒性试验（Danloy等）：将细胞接种于96孔板中（根据处理时间，每孔5,000-50,000个细胞），在无血清DMEM-F12-N2培养基中用α-常春藤皂苷（1-15 µg/mL）处理8-72小时，通过MTT还原法测定细胞存活率。 [2]
血清对细胞毒性的影响：将B16细胞在DMEM-F12-N2培养基中用10 µg/mL的α-常春藤皂苷处理72小时，培养基中添加不同浓度的BSA或FCS，用MTT法测定细胞存活率。[2]
细胞增殖/坏死分析：将细胞（150,000个/培养皿）用α-常春藤皂苷（3或5 µg/mL）处理24或48小时，用Bouin氏液固定，苏木精-伊红染色，计数有丝分裂细胞和坏死细胞（2,000个细胞/玻片）。 [2]
DNA/蛋白质/黑色素定量：将350,000个B16细胞或1,050,000个3T3细胞用α-常春藤皂苷（3或5 µg/mL）处理72小时，进行细胞计数，黑色素采用Prasad法测定，蛋白质采用Bradford法测定，DNA采用Labarca法测定。[2]
电镜观察：将用α-常春藤皂苷处理的细胞用戊二醛和四氧化锇固定，包埋于Epon 812树脂中用于透射电镜（TEM）观察，或脱水并镀金钯用于扫描电镜（SEM）观察。[2]
凋亡机制研究的一般方案采用流式细胞术和Western blot分析。收集用α-常春藤皂苷处理的细胞，用PBS洗涤，并在室温下用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色15分钟。细胞凋亡通过流式细胞术进行定量分析。对于蛋白质印迹实验，细胞裂解液用RIPA缓冲液制备，经SDS-PAGE电泳分离后转移至PVDF膜。膜上分别用针对Bax、Bcl-2、细胞色素c、caspase-3、caspase-9、PARP和β-actin的抗体进行孵育。蛋白质条带采用ECL法显色。活性氧（ROS）生成采用DCFH-DA染色法测定。谷胱甘肽水平采用比色法试剂盒测定。

异种移植研究：将胃癌细胞皮下接种于4-6周龄的雄性BALB/c裸鼠。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分为4组（n=6）：对照组（生理盐水）、低剂量组（2.5 mg/kg）、中剂量组（5 mg/kg）和高剂量组（10 mg/kg）的α-常春藤皂苷组。每隔一天腹腔注射药物或生理盐水。每3天用游标卡尺测量肿瘤大小；肿瘤体积计算公式为（宽度² × 长度）/2。实验结束时，取出肿瘤，称重，并进行HE染色和TUNEL染色分析。同时监测小鼠的体重和肝肾功能指标（ALT、AST、尿素、肌酐）。 [1]
体外细胞培养实验（Danloy等人）：将B16黑色素瘤细胞和3T3成纤维细胞培养于含10%胎牛血清（FCS）和青霉素的MEM或DMEM培养基中。孵育24小时后，移除培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞，然后用含α-常春藤皂苷（1-15 µg/mL）的DMEM-F12-N2培养基在37℃、5% CO2条件下处理8-72小时。血清效应实验中，培养基中含有10 µg/mL皂苷，并逐渐增加牛血清白蛋白（BSA）或胎牛血清（FCS）的浓度。[2]
体内抗炎活性研究的一般方案采用角叉菜胶诱导的大鼠足爪水肿模型。将0.1 mL 1%角叉菜胶溶液注射到大鼠后爪足底。在注射角叉菜胶前1小时，以1-50 mg/kg的剂量口服或腹腔注射α-常春藤皂苷。注射后0、1、2、3、4和6小时，使用体积描记器测量爪体积。计算水肿抑制率，并与载体对照组进行比较。吲哚美辛或地塞米松作为阳性对照。为评估其抗利什曼原虫活性，用α-常春藤皂苷治疗感染利什曼原虫的小鼠，并评估寄生虫负荷。

α-常春藤皂苷是一种皂苷，由于胃肠道吸收不良，其口服生物利用度有限。在临床前研究中，通常采用肠外给药。该化合物的分子量约为763 g/mol (C41H66O12)，易溶于水。其代谢和消除途径尚未得到充分阐明。该化合物的药代动力学特性与典型的三萜皂苷相似，主要在肝脏代谢，并通过胆汁和尿液排泄。

体外细胞毒性：在无血清培养基中，浓度高于 5 µg/mL 的 α-常春藤皂苷处理 B16 黑色素瘤细胞和 3T3 成纤维细胞仅 8 小时后即可产生细胞毒性。浓度为 10-15 µg/mL 时，在所有时间点（8-72 小时）均观察到显著的细胞死亡。在 FCS 或 BSA 存在下，细胞毒性降低，表明其与血清蛋白结合。[2] 细胞死亡诱导：α-常春藤皂苷处理（3-5 µg/mL，24-48 小时）可增加 B16 细胞和 3T3 细胞的坏死指数并降低有丝分裂指数。观察到细胞空泡化、细胞膜改变和细胞回缩。 [2]体内毒性：在异种移植小鼠模型中，以2.5、5和10 mg/kg（腹腔注射，隔日一次）的剂量给予α-常春藤皂苷治疗，与对照组相比，肝功能（ALT、AST）或肾功能（尿素、肌酐）均无显著差异，表明其安全性良好。未观察到肺、肝或脑转移。[1]这些研究中未报告LD50、血浆蛋白结合率或药物相互作用数据。[1][2]α-常春藤皂苷的毒性特征尚未完全明确。作为一种皂苷，高剂量时可能引起溶血和胃肠道刺激。据报道，该化合物对癌细胞系具有细胞毒性作用，提示其对正常细胞也可能具有毒性。抗癌疗效与毒性之间的治疗窗口尚需确定。临床开发需要进行标准的临床前毒性研究。该化合物应采取适当的安全预防措施进行操作。

[1]. Wang J, et al. α-Hederin induces the apoptosis of gastric cancer cells accompanied by glutathione decrement and reactive oxygen species generation via activating mitochondrial dependent pathway. Phytother Res. 2020;34(3):601-611.
[2]. Danloy S et al. Effects of alpha-hederin, a saponin extracted from Hedera helix, on cells cultured in vitro. Planta Med, 1994 Feb, 60(1):45-9.
[3]. Maryam Fallahi et al. Effect of Alpha-Hederin, the active constituent of Nigella sativa, on miRNA-126, IL-13 mRNA levels and inflammation of lungs in ovalbumin-sensitized male rats. Planta Med, 1994 Feb, 60(1):45-9.

刺五加皂苷A是一种三萜皂苷，由常春藤皂苷元通过糖苷键与3位上的2-O-(6-脱氧-α-L-甘露吡喃糖基)-α-L-阿拉伯吡喃糖基残基连接而成。它从刺五加（Kalopanax pictus）的茎皮中分离得到。它具有抗炎活性，是一种植物代谢产物。它是一种五环三萜化合物、三萜皂苷、二糖衍生物和羟基单羧酸。其功能与常春藤皂苷元相关。 α-常春藤皂苷已在金银花（Lonicera macrantha）、台北银莲花（Anemone taipaiensis）以及其他一些具有相关数据的生物体中被报道。

---

背景：α-常春藤皂苷是一种单糖苷三萜皂苷，提取自五加科常春藤（Hedera helix L.），也存在于其他植物中，例如黑种草属（Nigella）植物。它已被用于中药，并具有多种生物活性，包括解痉、抗炎、抗氧化、抗利什曼原虫、抗真菌（体外和体内）、杀软体动物、驱虫、抗阿米巴原虫和杀滴虫作用。根据Ames试验，它没有致突变作用，并且能降低苯并[a]芘和吸烟者尿液的致突变性。 [1][2]
化学性质：α-常春藤皂苷是一种单糖苷皂苷，C-3位有一个糖基。它具有溶血活性。研究中使用的纯度≥90%（Wang等人）和>98%（Danloy等人）。储备液用DMSO（1 mM）或蒸馏水（200 µg/mL）配制。[1][2]
作用机制：α-常春藤皂苷通过线粒体途径诱导细胞凋亡：(1) 细胞内GSH耗竭导致氧化应激；(2) ROS积累；(3) 线粒体膜电位丧失；(4) ATP耗竭；(5) AIF、Apaf-1和细胞色素C从线粒体释放到胞质溶胶； (6) 激活 caspase-9、caspase-3 和 caspase-8；(7) 增加 Bax 表达并降低 Bcl-2 表达。它还通过上调 P16、P21 和 P53 以及下调 Cyclin D1 诱导细胞周期停滞于 G1 期。此外，α-常春藤皂苷可引起细胞膜改变、胞质空泡化以及含有层状体的吞噬溶酶体的形成。[1][2]
功效：α-常春藤皂苷对胃癌细胞（HGC-27、SGC-7901）显示出良好的抗肿瘤活性，IC50 值分别为 20.86 µM 和 25.91 µM，并能抑制体内异种移植瘤的生长。它还对 B16 黑色素瘤细胞、3T3 成纤维细胞和 HeLa 细胞显示出细胞毒性作用。它能增强 5-氟尿嘧啶对 HT-29 结肠癌细胞的疗效。[1][2]
潜在的治疗应用：α-常春藤皂苷具有作为天然抗癌药物治疗胃癌的潜力，且安全性良好，但其分子机制仍需进一步阐明。[1]
α-常春藤皂苷是一种天然三萜皂苷，具有广谱抗癌特性。其作用机制包括诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期以及抑制糖酵解和自噬。该化合物还具有抗炎和抗利什曼原虫活性。尽管临床前数据令人鼓舞，但 α-常春藤皂苷尚未获得临床应用的监管批准。它主要用作研究癌细胞生物学、细胞凋亡和皂苷药理学的研究工具。目前尚无 α-常春藤皂苷作为治疗药物的临床试验注册。

C41H66O12

750.9556

750.455

27013-91-8

73296

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

849.6±65.0 °C at 760 mmHg

215ºC (dec.)

250.7±27.8 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.601

8.37

195.6

7

12

6

53

1440

18

O(C1([H])C([H])(C([H])(C([H])(C([H])([H])O1)O[H])O[H])OC1([H])C([H])(C([H])(C([H])(C([H])(C([H])([H])[H])O1)O[H])O[H])O[H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C2(C([H])([H])[H])C([H])(C([H])([H])C([H])([H])C3(C([H])([H])[H])C4(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C5(C(=O)O[H])C([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C5([H])C4=C([H])C([H])([H])C32[H])C1(C([H])([H])[H])C([H])([H])O[H]

KEOITPILCOILGM-LLJOFIFVSA-N

InChI=1S/C41H66O12/c1-21-28(44)30(46)31(47)33(51-21)53-32-29(45)24(43)19-50-34(32)52-27-11-12-37(4)25(38(27,5)20-42)10-13-40(7)26(37)9-8-22-23-18-36(2,3)14-16-41(23,35(48)49)17-15-39(22,40)6/h8,21,23-34,42-47H,9-20H2,1-7H3,(H,48,49)/t21-,23-,24-,25+,26+,27-,28-,29-,30+,31+,32+,33-,34-,37-,38-,39+,40+,41-/m0/s1

(4aS,6aR,6aS,6bR,8aR,9R,10S,12aR,14bS)-10-[(2S,3R,4S,5S)-4,5-dihydroxy-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-9-(hydroxymethyl)-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carboxylic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL (~133.16 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。