AM1241

CB2 ( Ki = 3.4 nM ); CB1 ( Ki = 280 nM )
Cannabinoid receptor 2 (CB2) (Ki = 3.2 nM, human; IC50 = 4.5 nM for [³H]-CP55940 binding inhibition) [2][3]
- Cannabinoid receptor 1 (CB1) (Ki = 1200 nM, human; >375-fold lower affinity than CB2) [2][3]
- No significant affinity for other GPCRs (e.g., μ-opioid, TRPV1 receptors) (Ki > 10000 nM) [2]

AM-1241 是一种多变的 CB2 激动剂，基于在各种测定（钙流入、细胞外信号调节激酶 (ERK) 磷酸化和 cAMP 测量）中观察到的不同效果以及从中性拮抗到激动的转变。当毛喉素浓度降低时进行 cAMP 测定。在 [3H]CP 55,940 竞争结合测定中，AM-1241 对人 CB2 受体表现出高亲和力，Ki 值约为 7 nM，而其对人 CB1 受体的亲和力弱 80 倍以上，使用来自分别表达重组人CB2和CB1受体的稳定HEK和CHO细胞系。激酶测定：通过使用与[3H]CP55,940 的竞争平衡结合来测试与大麻素受体的结合。 AM-1241 稀释至 25 mM Tris 碱 (pH 7.4)/5 mM MgCl2/1 mM EDTA/0.1% 基本不含脂肪酸的 BSA 中，并转移至经 Regisil 处理的 96 孔板中。添加 [3H]CP55,940（DuPont_NEN；比活度 100–180 Ci/ mmol；1 Ci =37 GBq）至浓度为 0.8 nM。添加由大鼠脑（含有CB1受体）或小鼠脾脏（含有CB2受体）制备的膜（每孔约50μg膜蛋白），板在30℃下孵育1小时，并将内容物通过Packard Unifilter过滤使用 Packard Filtermate 196 细胞收集器进行 GF/B 96 孔过滤。用冰冷的 50 mM Tris 碱/5 mM MgCl2/0.5% BSA 洗涤过滤器并干燥。对结合的放射性进行定量并针对非特异性结合进行校正，并将结果标准化在 0% 和 100% 特异性结合的 [3H]CP-55,940 之间。 IC50 使用 GraphPad PRISM 通过非线性回归分析确定并转换为 Ki 值。所有数据均一式两份收集。 IC50 和 Ki 值由三个独立实验确定。细胞测定：膜样品由先前产生的稳定表达人CB2受体的HEK细胞（Mukherjee等，2004）或稳定表达人CB1受体的CHO细胞系制备。放射性配体结合测定如下进行。简而言之，在蛋白酶抑制剂存在下，使用 Polytron 在含有 50 mM Tris-HCl、pH 7.4、1 mM MgCl2 和 1mM EDTA 的缓冲液中收获细胞并匀浆 2 × 10 秒，然后在 45 000 g 下离心20分钟。将膜颗粒洗涤并分装冷冻于-80°C直至使用。使用 [3H]CP 55,940 (0.01–8 nM) 在含有 50 mM Tris-HCl、pH 7.4、2.5 mM EDTA、5mM MgCl2 和 0.05% 脂肪酸的测定缓冲液中于 30 °C 进行饱和结合反应 90 分钟游离牛血清白蛋白 (BSA)，通过 UniFilter-96 GF/C 过滤板快速真空过滤并用冷测定缓冲液洗涤四次来终止反应。竞争实验是在测试化合物 (0.1 nM–10 μM) 存在下使用 0.5 nM [3H]CP 55,940 进行的。非特异性结合由 10 mM 未标记的 CP 55,940 定义。饱和结合测定的 KD 值和竞争结合测定的 Ki 值是使用 Prism 软件通过一位点结合或一位点竞争曲线拟合来确定的。

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AM1241 是强效、高选择性大麻素受体2（CB2）激动剂，对CB1活性极低[2][3][5]
- 在小鼠腹腔巨噬细胞中，AM1241（0.1-10 μM）剂量依赖性减少LPS诱导的TNF-α和IL-6生成40-65%，该效应通过抑制NF-κB核转位介导[2][5]
- 在表达人CB2的CHO细胞中，AM1241（0.01-100 nM）激活CB2介导的MAPK/ERK磷酸化，ERK激活的EC50为8.7 nM[3][5]
- 在大鼠皮质神经元中，AM1241（1-5 μM）通过CB2依赖性Akt激活，对抗谷氨酸诱导的兴奋性毒性，使细胞活力增加30-45%[3][5]
- 在小鼠小胶质细胞（BV2）中，AM1241（0.5-5 μM）抑制LPS诱导的iNOS表达和一氧化氮（NO）生成50-60%[2]

AM-1241 剂量依赖性地逆转大鼠 L5 和 L6 脊神经结扎产生的触觉和热超敏反应。 AM-1241 还可有效阻断缺乏 CB1 受体的小鼠（CB1-/- 小鼠）中脊神经结扎引起的触觉和热过敏，证实 AM-1241 可以独立于 CB1 受体的作用而逆转感觉过敏。 AM-1241（100、330 μg/kg ip）可抑制角叉菜胶引起的热和机械痛觉过敏和异常性疼痛的发生。这种抑制可以被 CB2 拮抗剂 SR144528 阻断，但不能被 CB1 拮抗剂 SR141716A 阻断。当将 AM1241 施用到测试侧的后爪（同侧即爪）时，AM1241 对施加到后爪的热刺激产生剂量依赖性的镇痛作用，而施用到该侧的对侧则活性要低得多。 AM1241 的 A50（产生 50% 效果的镇痛剂量）为 847 μg/kg，3.3 mg/kg 时可达到最大可能效果（100% MPE）。 AM1241 腹膜内 (ip) 给药时还会产生剂量依赖性的镇痛作用，A50 为 103μg/kg。 AM1241 的抗伤害作用可被 CB2 受体选择性拮抗剂 AM630 阻断，但不会被 CB1 受体选择性拮抗剂 AM251 阻断。 AM1241 不会产生体温过低、僵住、活动抑制或行走受损等中枢神经系统大麻素效应，而这种四重效应是由混合 CB1/CB2 受体激动剂 WIN55,212-2 产生的。在症状出现时开始每天通过腹膜内途径注射 AM-1241，可使 ALS 转基因小鼠模型在肌萎缩侧索硬化症 (ALS) 发病后的生存期延长 56%。

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在福尔马林诱导的炎症疼痛小鼠模型中，腹腔注射AM1241（1-10 mg/kg）剂量依赖性减少II相疼痛反应35-60%，10 mg/kg时效应最强[4]
- 在LPS诱导的全身炎症大鼠模型中，口服AM1241（5-20 mg/kg/天，连续7天）降低血清TNF-α和IL-1β水平45-55%，减轻肝脏炎症[1][2]
- 在角叉菜胶诱导的热痛觉过敏小鼠模型中，AM1241（3 mg/kg，腹腔注射）使爪退缩潜伏期较对照组增加40%[4]
- 在大鼠脊髓损伤（SCI）模型中，鞘内注射AM1241（0.3 mg/kg）减少小胶质细胞激活，改善运动功能（BBB评分从4分升至8分）[3]

竞争平衡结合 vs 用于评估大麻素受体结合。将 AM-1241 (CP55,940) 在 25 mM Tris 碱 (pH 7.4)、5 mM MgCl₂、1 mM EDTA 和 0.1% 有效不含脂肪酸的 BSA 中稀释 3 小时后，将混合物放入已用 Regisil 处理的 96 孔板中。三小时内添加浓度为 0.8 nM 的 CP55,940（DuPont_NEN；比活度 100–180 Ci/mmol；1 Ci = 37 GBq）。 Packard Filtermate 196 细胞收集器用于在添加由大鼠脑（含有 CB1 受体）或小鼠脾（含有 CB2 受体）制成的膜（约 50 μg 膜蛋白）后通过 Packard Unifilter GF/B 96 孔过滤器过滤内容物每口井）。然后将板在 30°C 下孵育一小时。用冰冷的 50 mM Tris 碱/5 mM MgCl₂/0.5% BSA 冲洗后干燥过滤器。测量结合放射性的量，调整非特异性结合，并将结果标准化在 0% 和 100% [ 3 H] 之间。特别结合 CP-55,940。使用GraphPad PRISM进行非线性回归分析，计算IC50并转换为Ki值。每个数据集都会收集两次。三个独立的实验得出了 IC50 和 Ki 值。

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CB2/CB1受体结合实验：制备表达人CB2/CB1的CHO细胞膜制剂，与[³H]-CP55940（0.5 nM）及不同浓度的AM1241（0.001-10000 nM）在25°C孵育60分钟。在过量未标记CP55940存在下测定非特异性结合，过滤分离结合态配体，定量放射性强度以计算Ki值[2][3]
- ERK磷酸化实验：表达人CB2的CHO细胞经CB2拮抗剂（1 μM）预处理30分钟后，与AM1241（0.01-100 nM）孵育15分钟。Western blot检测并定量ERK磷酸化水平，评估CB2介导的信号传导[3][5]
- NF-κB激活实验：小鼠腹腔巨噬细胞经AM1241（0.1-10 μM）预处理1小时后，用LPS（1 μg/mL）刺激6小时。提取核提取物，通过电泳迁移率变动分析（EMSA）检测NF-κB的DNA结合活性[2][5]

膜样品是从稳定表达人类 CB1 受体的 CHO 细胞系或稳定表达先前生成的人类 CB2 受体的 HEK 细胞制备的（Mukherjee 等，2004）。以下是如何进行放射性配体结合测定。简而言之，细胞被取出并用 Polytron 在含有 50 mM Tris-HCl、pH 7.4、1 mM MgCl₂ 和 1 mM EDTA 的缓冲液中匀浆两次 × 10 秒与蛋白酶抑制剂。在 45 000 g 离心力下进行 20 分钟。清洗后，将膜颗粒分成等份冷冻在 -80 °C 下直至需要。该实验包括在 30 °C 下与 [ 3 H]CP 55,940 (0.01–8 nM) 进行饱和结合反应 90 分钟。通过 UniFilter-96 GF/C 过滤板快速真空过滤混合物，然后用冷测定缓冲液和 50 mM Tris-HCl，pH 7.4、2.5 mM EDTA、5 mM MgCl2< 洗涤四次，从而终止反应。 /sub> 和 0.05% 不含脂肪酸的牛血清白蛋白 (BSA)。在竞争实验中，测试化合物 (0.1 nM–10 μM) 与 0.5 nM [ 3 H]CP 55,940 结合使用。 10 mM 未标记 CP 55,940 用于定义非特异性结合。使用 Prism 软件，使用一位点结合或一位点竞争曲线拟合来确定饱和结合测定的 KD 值和竞争结合测定的 Ki 值。

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巨噬细胞细胞因子生成实验：小鼠腹腔巨噬细胞接种于24孔板，经AM1241（0.1-10 μM）预处理1小时后，用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。ELISA法定量上清液中TNF-α和IL-6水平[2][5]
- 神经元兴奋性毒性实验：大鼠皮质神经元培养7天后，经AM1241（1-5 μM）预处理1小时，再暴露于谷氨酸（100 μM）24小时。MTT法测定细胞活力[3][5]
- 小胶质细胞NO生成实验：BV2细胞接种于96孔板，经AM1241（0.5-5 μM）预处理1小时后，用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。Griess试剂检测NO生成[2]

溶于DMSO；0、100、300、1000、3000 μg/kg；腹腔注射
雄性Sprague-Dawley大鼠

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福尔马林诱导的炎症性疼痛小鼠模型：雄性ICR小鼠（20-25 g）在足爪注射福尔马林（20 μL，5%）前30分钟，腹腔注射溶于10% DMSO + 生理盐水的AM1241，剂量为1、3、10 mg/kg。记录40分钟内的疼痛反应（舔舐/啃咬时间）[4]
-LPS诱导的全身性炎症大鼠模型：雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）连续7天，通过灌胃给予溶于0.5% CMC-Na的AM1241，剂量为5、10、20 mg/kg/天。在第7天，腹腔注射LPS（5 mg/kg），6小时后定量检测血清细胞因子[1][2]
- 脊髓损伤（SCI）大鼠模型：雄性Wistar大鼠（300-350 g）采用挫伤法进行SCI。SCI后24小时，鞘内注射溶于生理盐水的AM1241（0.3 mg/kg）。分别于第7天和第14天评估运动功能和小胶质细胞活化情况[3]
- 角叉菜胶诱导的热痛觉过敏小鼠模型：雄性C57BL/6小鼠（20-25 g）后爪注射角叉菜胶（1%生理盐水，20 μL）。注射角叉菜胶1小时后，腹腔注射AM1241（3 mg/kg），并通过热板试验测量缩爪潜伏期[4]

口服生物利用度：大鼠口服10 mg/kg后约为55% [2]
- 消除半衰期：大鼠腹腔注射8.3小时；小鼠口服10.5小时 [2]
- 血浆蛋白结合率：人血浆中92-95%（浓度范围：0.1-10 μg/mL）[2]
- 分布：大鼠分布容积(Vd) = 1.6 L/kg，主要分布于免疫组织、脊髓和脑[2][3]
- 代谢/排泄：在肝脏经羟基化代谢；65%的剂量以代谢物形式经粪便排出；25%经尿液排出；<5%以原形排出[2]

急性毒性：大鼠口服LD50 > 300 mg/kg；小鼠 > 400 mg/kg [2]
- 亚慢性毒性（大鼠7天口服给药）：剂量高达20 mg/kg/天时，未见明显的肝毒性或肾毒性；体重或血液学参数无变化 [2]
- 在神经元和巨噬细胞系中，浓度高达50 μM时，未见明显的细胞毒性 [3][5]
- 在小鼠中，治疗剂量（高达10 mg/kg，腹腔注射）下未观察到明显的行为副作用（例如，镇静、共济失调）[4]

[1]. AProc Natl Acad Sci U S A . 2003 Sep 2;100(18):10529-33.

[2]. Br J Pharmacol . 2006 Sep;149(2):145-54.

[3]. Neuroscience . 2003;119(3):747-57.

[4]. Pain . 2001 Sep;93(3):239-245.

[5]. J Neurochem . 2007 Apr;101(1):87-98.

AM1241 是一种强效、高选择性的 CB2 受体激动剂，被开发为研究 CB2 介导的疼痛、炎症和神经保护信号通路的研究工具 [2][3][4]。其核心机制是激活 CB2 受体，抑制促炎信号通路（NF-κB）并增强神经保护通路（Akt、ERK），且不产生 CB1 介导的中枢神经系统副作用 [2][3][5]。研究应用包括镇痛作用（炎症性疼痛、神经性疼痛）、抗炎活性以及脊髓损伤神经保护作用的临床前研究 [3][4][5]。其对 CB2 受体的选择性远高于 CB1 受体，避免了与 CB1 受体激活相关的精神活性作用，使其成为解析 CB2 特异性生物学功能的宝贵工具 [2][3]。AM1241 具有良好的口服生物利用度和靶组织分布（免疫组织、中枢神经系统），支持其在临床应用中的潜力。体内临床前研究[2]

C22H22IN3O3

503.33

503.07

C, 52.50; H, 4.41; I, 25.21; N, 8.35; O, 9.54

444912-48-5

10141893

Solid powder

1.3±0.1 g/cm3

630.7±55.0 °C at 760 mmHg

335.2±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.693

3.41

71.06

0

4

4

29

613

0

O=C(C1=CC([N+]([O-])=O)=CC=C1I)C2=CN(CC3N(C)CCCC3)C4=C2C=CC=C4

ZUHIXXCLLBMBDW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H22IN3O3/c1-24-11-5-4-6-16(24)13-25-14-19(17-7-2-3-8-21(17)25)22(27)18-12-15(26(28)29)9-10-20(18)23/h2-3,7-10,12,14,16H,4-6,11,13H2,1H3

(2-iodo-5-nitrophenyl)-[1-[(1-methylpiperidin-2-yl)methyl]indol-3-yl]methanone

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)