Amyloid β-Peptide (1-42) human   中文名称: beta-淀粉样多肽-42

Peptide; AD biomarker

β淀粉样蛋白聚集指南（以下是我们推荐的方案。这只是一个指南，可以根据您的具体需求进行修改）。
1.将固体Aβ肽溶解在冷的六氟-2-丙醇（HFIP）中。将肽在室温下孵育至少1小时，以建立单体和结构随机化。
2.通过蒸发去除HFIP，并将所得肽以薄膜形式储存在-20或-80℃下。
3.将所得薄膜溶解在5mM无水DMSO中，然后涡旋并稀释至适当的浓度和缓冲液（血清和无酚红培养基）。
4.接下来，将溶液在4-8°C下放置48小时。然后将样品在4-8°C下以14000g离心10分钟；上清液中的可溶性低聚物。实验前将上清液稀释10-200倍。
方法因下游应用而异
注意：
聚集形式β淀粉样蛋白在溶液中不稳定，制备好之后建议立即使用。

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体外研究表明，Aβ(1-42)具有强效的神经毒性。在2.5 μM浓度下，它可使SH-SY5Y细胞活力降至对照组的65%。该肽能增强神经细胞中Ca²⁺电流的失活并阻断Ca²⁺依赖性K⁺电流。Aβ(1-42)寡聚体在处理后30分钟内定位于细胞质和细胞核，8小时后观察到大量积累。该肽还会增加处理细胞中APP mRNA的表达水平。Aβ(1-42)的可溶性寡聚体对神经元细胞具有高度毒性，损害突触功能，是阿尔茨海默病发病机制中的主要神经毒性物质。聚集形式在溶液中不稳定，建议制备后立即使用。

可以使用人 TFA 和 β-淀粉样蛋白创建阿尔茨海默病动物模型 (1-42)。
在体内，Aβ(1-42)通过立体定向注射至海马或侧脑室广泛用于建立阿尔茨海默病动物模型。大鼠双侧海马各注射10 μg（1 μL）Aβ(1-42)可诱导显著的认知缺陷，通过Morris水迷宫实验测定（逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少）。该肽可诱导神经退行性变，表现为神经元数量减少、核固缩，以及大脑皮层和海马中晚期糖基化终末产物受体（AGER）表达增加。与单因素模型（单独使用D-半乳糖或Aβ）相比，联合给药产生更严重的认知损伤。该模型最适合用于研究Aβ对特定脑区或神经环路影响的短期研究。

描述了在溶液中监测β -淀粉样蛋白成核步骤的可能性，从而通过毛细管电泳和优化的实验条件来描述这一动态过程。这里显示了Abeta 1-42和Abeta 1-40的电泳模式随时间的显著差异，并阐明了不同的聚集状态，这反映了两个非常相似的肽的非常不同的寡聚化行为。通过超离心分离出一种高分子量的聚合物种，使我们能够评估其作为毒性低聚物的作用。通过添加小分子来扰乱已鉴定物种之间的现有平衡，原则上可以干扰肽的聚集过程，最终在体外阻止斑块的形成。[3]

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对于Aβ(1-42)的无细胞聚集研究，标准流程包括：将固体Aβ(1-42)溶解于冷的六氟-2-丙醇（HFIP）中，室温孵育至少1小时以实现单体和结构随机化。通过蒸发去除HFIP，将所得肽膜储存于-20°C或-80°C。将肽膜溶解于5 mM无水DMSO中，然后在缓冲液（无血清和酚红的培养基）中稀释至适当浓度。为生成寡聚体，将溶液在4-8°C下老化48小时，然后在4-8°C下以14,000 × g离心10分钟；可溶性寡聚体存在于上清液中，稀释10-200倍后用于实验。聚集状态使用硫黄素T（ThT）荧光、透射电子显微镜（TEM）或MALDI-TOF质谱监测。聚集形式不稳定，应立即使用。

Aβ肽的MTT测定[2]
合成的Aβ肽被单体化和溶解。简单地说，将单体肽溶解到1 mg/ml的去离子水中，加入氨，最终浓度为0.13% (pH值为9.8)。所有肽均以1 μm的浓度使用。3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)测定方法如上所述。

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细胞核制备及酶联免疫吸附试验[2]
根据制造商的说明书进行少量修改，用nucleus EZ Prep核分离试剂盒分离细胞核。简单地说，将含有细胞核的微球重悬在PBS中，超声处理，在95℃下孵育，并在20000 × g下离心10分钟。使用C末端特异性G2-13抗体进行Aβ42 elisa。为了定量Aβ38、Aβ40、Aβ42、Aβ42 G33A和Aβ43，使用识别Aβ残基17-24的抗体4G8。

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免疫荧光法[2]< br > 用生物素化Aβ42肽1 μm处理SH-SY5Y细胞。用3.3%甲醛(含0.5% Triton X-100)和125 mm甘氨酸(含镁和钙的PBS)固定和渗透细胞。细胞先用5%胎牛血清阻断，再用一抗阻断。用单克隆抗体AB或Avidin Fluor488 (Sigma)检测生物素a β42。细胞核用DAPI染色。使用LSM 510元共聚焦显微镜获得图像。

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典型的Aβ(1-42)神经毒性研究体外方案使用SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞。用1-10 μM浓度的生物素化Aβ(1-42)肽处理细胞。对于定位研究，细胞用含0.5% Triton X-100的3.3%甲醛固定和透化，然后用含镁和钙的PBS中的125 mM甘氨酸处理。用5%胎牛血清封闭细胞，然后与一抗孵育。使用Avidin Fluor488检测生物素-Aβ(1-42)肽，细胞核用DAPI染色。使用共聚焦显微镜获取图像。对于活力测定，用2.5 μM Aβ(1-42)处理细胞24-48小时，使用MTT或CCK-8法评估活力。由于肽的不稳定性，所有溶液应新鲜配制并立即使用。

将动物（12月龄的转基因APPPS1小鼠）先用PBS灌注，再用固定液（4%甲醛、0.2%戊二醛，溶于50 mM二甲胂酸钠缓冲液，pH 7.4）灌注。解剖海马体，并在室温下用相同的固定液进行后固定。将样本包埋于LR-Gold树脂中，并在4℃下聚合。将超薄切片与10 nm胶体金标记的G2-13一抗孵育。切片先用醋酸铀复染，再用柠檬酸铅复染。[2]
mAb G2-13的标记采用胶体金。离心（10分钟，6700 × g）后，取胶体金上清液，用醋酸铀复染，并通过透射电镜（TEM）分析，以确保上清液中不含金聚集体。将 500 μg mAb G2-13 用 2 mM 四硼酸钠透析。等体积的 G2-13 和胶体金在室温下孵育 20 分钟。用 10% NaCl 滴定法评估金/蛋白比例的稳定性。用 100 mM 碳酸钾将胶体金的 pH 值调节至 9。将蛋白/金溶液在 1% BSA 中孵育 20 分钟。离心后，将沉淀物重悬于 20 mM TBS、1% BSA 和 0.05% 叠氮化钠（pH 8.2）中，并在 6700 × g 下离心 5 分钟。上清液中含有标记有 10 nm 金的 G2-13 抗体。[2]

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标准的Aβ(1-42)诱导阿尔茨海默病模型体内实验流程：成年SD大鼠（或C57BL/6小鼠）用2%戊巴比妥钠（50 mg/kg，腹腔注射）麻醉后固定于脑立体定位仪。通过中线切口暴露颅骨，在海马注射坐标（前囟后AP = -3.5 mm，中线右侧旁开ML = +2.0 mm）处钻开颅骨。微量注射器垂直进针至脑表面下3.0 mm深度（DV = 3.0 mm）。将Aβ(1-42)（10 μg溶于1 μL无菌PBS）缓慢注射至每侧海马，持续5分钟。留针5分钟使药物充分扩散，然后缓慢退针5分钟。对于侧脑室注射，坐标通常为前囟后AP = -0.8 mm，中线旁开ML = ±1.5 mm，深度DV = -3.5 mm。注射后1-4周使用Morris水迷宫（逃避潜伏期、穿越平台次数）和神经功能评分评估认知功能。收集脑组织进行组织学分析（尼氏染色、AGER免疫组化和Aβ沉积检测）。

Aβ(1-42)本身不是治疗药物，而是一种致病肽；其药代动力学特性主要在清除和代谢的背景下进行研究。该肽在生物基质（包括血浆、全血和肝脏S9组分）中被多种蛋白酶降解。内源性清除机制包括脑啡肽酶、胰岛素降解酶（IDE）和基质金属蛋白酶的酶解，以及通过LRP1（低密度脂蛋白受体相关蛋白1）介导的血脑屏障受体转运。Aβ清除受损是散发性AD发病的关键因素，Aβ42/Aβ40比值降低可作为症状前AD患者淀粉样蛋白清除减少的指标。关于Aβ结合肽的研究表明，口服给药可实现脑部穿透，血浆浓度可测量（10-100 mg/kg剂量下AUC值为261-1928 ng·h/mL）。Aβ结合化合物在小鼠血浆中的消除半衰期（t½）约为3-5小时。

Aβ(1-42)在体外和体内均表现出强效的神经毒性。在体外，2.5 μM浓度下可使SH-SY5Y细胞活力降至对照组的65%，更高浓度导致更大的细胞毒性。该肽诱导氧化应激、钙失调和线粒体功能障碍，导致细胞凋亡。在体内，脑内注射Aβ(1-42)（10 μg/位点）导致神经元丢失、神经炎症和认知缺陷，无明显全身毒性。适当操作时，该肽对操作者被认为是相对安全的，因为其主要毒性针对模型生物的神经组织。人体毒性与AD发病机制相关，Aβ(1-42)寡聚体和斑块的积累导致进行性神经退行性变和认知功能下降。在动物建模所用剂量下未报道急性全身毒性。然而，作为一种疾病相关肽，其致病性强调根据机构生物安全指南进行正确处理和处置的重要性。

[1]. Impact of amyloid-β peptide (1-42) on voltage-gated ion currents in molluscan neurons. Bull Exp Biol Med. 2011 Oct;151(6):671-4.

[2]. Nuclear translocation uncovers the amyloid peptide Aβ42 as a regulator of gene transcription. J Biol Chem. 2014 Jul 18;289(29):20182-91.

[3]. Capillary electrophoresis studies on the aggregation process of beta-amyloid 1-42 and 1-40 peptides. Electrophoresis. 2004 Oct;25(18-19):3186-94.

利用双微电极电压钳技术，在蜗牛（Helix pomatia）分离的神经元中记录了不同类型的电压门控离子电流。在浴液中加入淀粉样β肽（1-42，1-10 μM）并未改变延迟整流钾离子电流和漏电流，但增强了钙离子电流的失活，并阻断了钙离子依赖性钾离子电流。[1]

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尽管可溶性淀粉样β肽Aβ42与阿尔茨海默病的疾病症状相关，但人们对淀粉样β肽（Aβ）的生物活性知之甚少。本文中，我们发现长度为38至43个氨基酸的Aβ肽可被培养的神经母细胞瘤细胞内化，并存在于细胞核中。我们通过三种独立的方法证实了核内Aβ42的直接检测，具体如下：（i）核组分的生化分析； (ii) 利用共聚焦激光扫描显微镜检测活细胞中生物素标记的Aβ；(iii) 利用透射电镜观察培养细胞以及野生型和转基因APPPS1小鼠（分别过表达具有瑞典突变和L166P突变的淀粉样前体蛋白和早老素1）脑组织中的Aβ。此外，本研究还详细阐述了Aβ42在核信号传导中的新功能，该功能不同于淀粉样前体蛋白的胞内结构域。染色质免疫沉淀实验表明，Aβ42特异性地作为基因转录抑制因子与LRP1和KAI1启动子相互作用。通过定量RT-PCR，我们证实，所检测候选基因的mRNA水平仅被潜在的神经毒性Aβ42野生型肽段降低。较短的肽段（Aβ38或Aβ40）和其他较长的肽段（无毒的Aβ42 G33A取代或Aβ43）对mRNA水平没有影响。总体而言，我们的数据表明 Aβ42 的核转位影响基因调控，Aβ42 在阿尔茨海默病发病机制中的有害作用可能受到改变疾病修饰基因表达谱的影响。[2]

C₂₀₃H₃₁₁N₅₅O₆₀S

4514.04

4511.27

107761-42-2

57339251

Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala

DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA

White to off-white solid powder

1.351

1840.49

CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC3=CNC=N3)NC(=O)[C@H](CC4=CNC=N4)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC5=CC=C(C=C5)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC6=CNC=N6)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CC7=CC=CC=C7)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N

DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N

InChI=1S/C203H311N55O60S/c1-28-106(20)164(195(310)220-91-149(267)228-130(71-98(4)5)181(296)238-129(66-70-319-27)179(294)251-158(100(8)9)193(308)218-87-146(264)215-88-151(269)250-160(102(12)13)198(313)255-163(105(18)19)199(314)258-165(107(21)29-2)200(315)227-112(26)202(317)318)257-201(316)166(108(22)30-3)256-169(284)109(23)224-147(265)89-216-171(286)122(51-40-42-67-204)233-188(303)139(81-145(208)263)244-192(307)143(94-260)230-150(268)92-219-194(309)159(101(10)11)252-191(306)141(83-157(280)281)245-177(292)127(60-64-153(272)273)232-168(283)111(25)226-180(295)133(73-113-45-34-31-35-46-113)241-184(299)135(75-115-49-38-33-39-50-115)247-196(311)162(104(16)17)254-190(305)131(72-99(6)7)239-173(288)123(52-41-43-68-205)234-175(290)125(58-62-144(207)262)236-185(300)136(77-117-84-211-95-221-117)243-187(302)138(79-119-86-213-97-223-119)248-197(312)161(103(14)15)253-178(293)128(61-65-154(274)275)237-182(297)132(76-116-54-56-120(261)57-55-116)229-148(266)90-217-172(287)142(93-259)249-189(304)140(82-156(278)279)246-186(301)137(78-118-85-212-96-222-118)242-174(289)124(53-44-69-214-203(209)210)235-183(298)134(74-114-47-36-32-37-48-114)240-176(291)126(59-63-152(270)271)231-167(282)110(24)225-170(285)121(206)80-155(276)277/h31-39,45-50,54-57,84-86,95-112,121-143,158-166,259-261H,28-30,40-44,51-53,58-83,87-94,204-206H2,1-27H3,(H2,207,262)(H2,208,263)(H,211,221)(H,212,222)(H,213,223)(H,215,264)(H,216,286)(H,217,287)(H,218,308)(H,219,309)(H,220,310)(H,224,265)(H,225,285)(H,226,295)(H,227,315)(H,228,267)(H,229,266)(H,230,268)(H,231,282)(H,232,283)(H,233,303)(H,234,290)(H,235,298)(H,236,300)(H,237,297)(H,238,296)(H,239,288)(H,240,291)(H,241,299)(H,242,289)(H,243,302)(H,244,307)(H,245,292)(H,246,301)(H,247,311)(H,248,312)(H,249,304)(H,250,269)(H,251,294)(H,252,306)(H,253,293)(H,254,305)(H,255,313)(H,256,284)(H,257,316)(H,258,314)(H,270,271)(H,272,273)(H,274,275)(H,276,277)(H,278,279)(H,280,281)(H,317,318)(H4,209,210,214)/t106-,107-,108-,109-,110-,111-,112-,121-,122-,123-,124-,125-,126-,127-,128-,129-,130-,131-,132-,133-,134-,135-,136-,137-,138-,139-,140-,141-,142-,143-,158-,159-,160-,161-,162-,163-,164-,165-,166-/m0/s1

(4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[(2S)-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[2-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S,3S)-1-[[2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-carboxypropanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid

β-Amyloid (1-42, human); Abeta1-42; Abeta42; Amyloid beta 1-42; Abeta 1-42;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~33.33 mg/mL (~7.20 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (0.54 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。