Andrographolide   中文名称: 穿心莲内酯

Natural product; p50; NF-κB ; Estrogen - related receptor α (ERRα) [1]

体外活性：发现穿心莲内酯以浓度依赖性方式抑制诱导型一氧化氮合酶的表达。在穿心莲内酯治疗组中，观察到 Akt、c-Jun N 末端激酶和 p65 磷酸化减少。穿心莲内酯还引起 Bcl-2/NF-κb 表达减少和 Cleaved-Caspase3/Bax 蛋白表达剂量依赖性增加。激酶测定：进行体外破骨细胞生成测定以检查穿心莲内酯对破骨细胞分化的影响。制备骨髓巨噬细胞（BMM）。简而言之，将从 6 周龄 C57/BL6 小鼠股骨和胫骨中提取的细胞在 T-75 cm2 烧瓶中的完全细胞培养基和 30 ng/mL M-CSF 中孵育以进行增殖。更换培养基时，洗涤细胞以去除残留的基质细胞。达到90%汇合后，用PBS洗涤细胞3次，并胰蛋白酶消化30分钟以收获BMM。粘附在培养皿底部的细胞被归类为 BMM；将这些 BMM 以每孔 8×103 个细胞的密度一式三份铺在 96 孔板中，并在含有 5% CO2 的加湿培养箱中于 37°C 孵育 24 小时。然后用不同浓度的穿心莲内酯（0、2.5、5 或 10 μM）加 M-CSF (30 ng/mL) 和 RANKL (50 ng/mL) 处理细胞。 5 天后，固定细胞并对其抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 活性进行染色。具有超过 5 个细胞核的 TRAP 阳性多核细胞被计为破骨细胞。 细胞测定：用 CCK-8 测定穿心莲内酯对细胞增殖的影响。 BMM 以每孔 3×103 个细胞的密度接种在 96 孔板中，一式三份。 24 小时后，用浓度逐渐增加的穿心莲内酯（0、2.5、5、10 或 20 μM）处理细胞 2 天。接下来，将 10 μL CCK-8 添加到每个孔中，然后将板在 37°C 下再孵育 2 小时。然后使用 ELX800 吸光度酶标仪在 450 nm 波长（650 nm 参考）下测量光密度 (OD)。计算细胞活力

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穿心莲内酯可抑制核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导的破骨细胞生成。它干扰ERRα与共激活因子PGC - 1β的相互作用，抑制ERRα的转录活性，从而下调线粒体谷氨酰胺酶的表达，扰动破骨细胞分化过程中的代谢适应，抑制成熟破骨细胞的形成。这通过免疫共沉淀和双荧光素酶报告实验得以验证[1]

穿心莲内酯（5 或 30 毫克/千克）治疗可减少 LPS 引起的骨质流失程度。此外，与 LPS 治疗相比，穿心莲内酯略微增加了 BMD 和皮质厚度。组织学检查证实了穿心莲内酯对 LPS 引起的骨质流失的保护作用。 LPS 注射会导致炎症性骨质侵蚀和 TRAP 阳性破骨细胞数量增加。在一项保肝研究中，连续 5 天给大鼠灌胃穿心莲内酯。结果表明，穿心莲内酯可以上调心脏、肝脏和肾脏中谷氨酸半胱氨酸连接酶催化和修饰亚基、血红素加氧酶-1、超氧化物歧化酶-1、谷胱甘肽S-转移酶蛋白和mRNA的表达。

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穿心莲内酯可在体内预防炎症性骨丢失。在卵巢切除的雌鼠模型和高脂饮食诱导的雄鼠模型中，它能有效抑制骨吸收，明显改善骨量丢失，这与其靶向ERRα调节破骨细胞生成的代谢适应机制有关[1]

进行体外破骨细胞生成试验以检查穿心莲内酯对破骨细胞分化的影响。 BMM 细胞或骨髓巨噬细胞被创建。在装有完整细胞培养基和 30 ng/mL M-CSF 的 T-75 cm2 烧瓶中，孵育取自 6 周龄 C57/BL6 小鼠股骨和胫骨的细胞进行增殖。当更换培养基时洗涤细胞以去除可能仍然存在的任何基质细胞。将细胞用 PBS 洗涤 3 次，然后用胰蛋白酶消化 30 分钟，以在细胞达到 90% 汇合后收获 BMM。 BMM 是粘在培养皿底部的细胞。 BMM 以每孔 8×103 个细胞的密度一式三份接种在 96 孔板中，并在含有 5% CO2 的加湿培养箱中于 37°C 下孵育 24 小时。然后，将不同浓度的穿心莲内酯（0、2.5、5 或 10 μM）与 M-CSF (30 ng/mL) 和 RANKL (50 ng/mL) 一起添加到细胞中。五天后对细胞进行固定和染色，以检查抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 活性。破骨细胞是 TRAP 阳性的多核细胞，具有 5 个或更多细胞核[1]。

使用 CCK-8 测定穿心莲内酯对细胞增殖的影响。 BMM 以每孔 3×103 个细胞的密度接种在 96 孔板中，一式三份。 24 小时后，将细胞暴露于逐渐增加剂量的穿心莲内酯（0、2.5、5、10 或 20 μM）两天。向每孔添加 10 μL CCK-8 后，将板在 37°C 下再孵育 2 小时。然后使用 ELX800 吸光度酶标仪在 450 nm 波长（650 nm 参考）下测定光密度 (OD)。进行计算以确定细胞活力[1]。

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培养骨髓来源的巨噬细胞（BMMs）和破骨前体细胞系RAW264.7细胞。在培养基中加入不同浓度的穿心莲内酯，同时用RANKL刺激细胞。然后，采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测破骨细胞的形成情况，用RT - qPCR检测破骨细胞相关基因如Acp5、Ctsk和Atp6v0d2的表达。此外，用免疫共沉淀检测ERRα与PGC - 1β的相互作用，用双荧光素酶报告系统检测ERRα的转录活性[1]

小鼠：使用8周龄的C57BL/6小鼠，构建4组，每组7只。在注射LPS（5 g/g体重）前一天，小鼠腹腔注射穿心莲内酯（5或30 mg/kg体重）或PBS作为对照。在接下来的8天里，每天腹腔注射穿心莲内酯或PBS。在第1天和第4天，腹腔注射LPS。所有小鼠在首次注射LPS后8天处死，并使用分辨率为9 μm的高分辨率微型CT扫描其左侧股骨。

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卵巢切除的雌性大鼠和高脂饮食诱导的雄性大鼠被用作动物模型。穿心莲内酯溶解于二甲基亚砜（DMSO）中，然后用生理盐水稀释。将穿心莲内酯以50 mg/kg/天的剂量腹腔注射给大鼠。一段时间后，采用微型CT评估大鼠的骨量，并通过组织学染色观察骨吸收情况[1]。

[1]. Andrographolide suppresses RANKL-induced osteoclastogenesis in vitro and prevents inflammatory bone loss in vivo. Br J Pharmacol. 2014 Feb;171(3):663-75.

[2]. Broad-spectrum antiviral properties of andrographolide. Arch Virol. 2017 Mar;162(3):611-623.

穿心莲内酯是从穿心莲的叶和根中分离得到的拉丹二萜类化合物，具有抗HIV、抗炎和抗肿瘤活性。它可作为代谢产物、抗炎药、抗HIV药物和抗肿瘤药物发挥作用。它是一种γ-内酯、伯醇、仲醇、拉丹二萜类化合物和碳双环化合物。
穿心莲内酯（HMPL-004）是从中国天然生长的草药中提取的植物产品。该草药在中医中有着悠久的应用历史，用于治疗上呼吸道感染及其他炎症和感染性疾病。
已有报道称穿心莲内酯存在于穿心莲、香茅和银杏中，并有相关数据报道。
穿心莲内酯是一种由穿心莲产生的拉丹二萜类化合物，具有广泛的治疗用途，包括抗炎、抗血小板聚集以及潜在的抗肿瘤特性。由于穿心莲内酯具有多种治疗活性，因此对其作用机制提出了几种假说。该化合物的抗炎作用似乎与抑制巨噬细胞产生一氧化氮（NO）有关。该药物可能激活NO/环磷酸鸟苷（cGMP）通路，并抑制活化血小板中的磷脂酶Cγ2（PLCγ2）/蛋白激酶C（PKC）和PI3K/AKT-MAPK信号通路，从而抑制血小板聚集。在活化血小板中，这三个信号通路均位于胶原结合介导的整合素激活下游，并影响纤维蛋白原与其受体的结合。此外，穿心莲内酯可能通过诱导细胞周期停滞于G0/G1期以及刺激淋巴细胞增殖和活化发挥其抗癌活性。这些过程可能导致肿瘤细胞增殖减少和免疫细胞毒性增强。

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药物适应症
已研究用于治疗溃疡性结肠炎。

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作用机制
HMPL-004 作用于炎症信号转导通路中的多个细胞靶点，从而抑制包括 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 在内的炎症细胞因子的表达。细胞实验表明，HMPL-004 可抑制 TNF-α 和 IL-1β 的产生。HMPL-004 还能够抑制 NF-κB 的激活。NF-κB 是一类转录因子，可调节多种基因，这些基因在宿主防御和炎症中起着至关重要的作用。HMPL-004 的作用机制在 IBD 动物模型中得到了进一步证实。用HMPL-004治疗IBD大鼠可显著降低血浆细胞因子浓度，包括TNF-α和IL-1β。

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背景与目的：破骨细胞在骨质疏松症、类风湿性关节炎和肿瘤骨转移等疾病中发挥着关键作用。因此，寻找能够抑制破骨细胞形成和/或功能的天然化合物对于治疗破骨细胞相关疾病具有重要意义。本研究探讨了穿心莲内酯（AP，一种从传统中药和印度药用植物穿心莲中分离得到的二萜内酯）对破骨细胞生成和LPS诱导的骨溶解的影响。实验方法：体外检测AP对破骨细胞分化和骨吸收的影响。采用Western blot和RT-PCR技术研究其潜在的分子机制。本研究在小鼠骨溶解模型中评估了AP在体内的骨保护活性。主要结果：体外实验表明，AP浓度依赖性地抑制RANKL介导的破骨细胞分化和骨吸收，并降低破骨细胞特异性标志物的表达，包括抗酒石酸酸性磷酸酶、降钙素受体和组织蛋白酶K。进一步的分子分析显示，AP通过抑制TGF-β活化蛋白激酶1的磷酸化、抑制IκBα的磷酸化和降解，进而阻止NF-κB p65亚基的核转位，从而削弱RANKL诱导的NF-κB信号通路。AP还抑制ERK/MAPK信号通路，但不影响p38或JNK信号通路。结论和意义：AP通过减弱NF-κB和ERK/MAPK信号通路在体外抑制RANKL诱导的破骨细胞生成，从而在体内预防骨丢失。这些数据表明，AP是一种有前景的天然化合物，可用于治疗破骨细胞相关的骨病。[1]穿心莲内酯是一种二萜类化合物，以其抗炎作用而闻名。它可以从多种穿心莲属植物中分离得到，俗称“花草”。这种纯化的化合物已在多种应激条件下进行了抗炎作用测试，例如缺血、发热、关节炎、肝毒性或神经毒性、癌变和氧化应激。除了抗炎作用外，穿心莲内酯还具有免疫调节作用，可有效增强细胞毒性T细胞、自然杀伤（NK）细胞、吞噬作用和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）。穿心莲内酯的所有这些特性为其用于抑制病毒复制和病毒引起的发病机制奠定了基础。本文探讨了穿心莲内酯在多种病毒感染中的抗病毒特性，旨在开发一种具有多重作用的高效抗病毒新药。[2]骨质疏松症是一种全身性代谢性骨病，其发生与破骨细胞异常活性密切相关。ERRα是破骨细胞分化的重要调控因子，也是影响细胞线粒体能量代谢的关键转录因子。穿心莲内酯作为ERRα的潜在拮抗剂，为骨质疏松症防治药物的研发提供了新的方向。[1]

C20H30O5

350.45

350.209

C, 68.54; H, 8.63; O, 22.83

5508-58-7

5318517

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

557.3±50.0 °C at 760 mmHg

229-232ºC

195.5±23.6 °C

0.0±3.4 mmHg at 25°C

1.568

1.62

86.99

3

5

3

25

597

6

O([H])[C@]1([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]2(C([H])([H])[H])[C@]([H])(C([H])([H])/C(/[H])=C3/C(=O)OC([H])([H])[C@@]/3([H])O[H])C(=C([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[C@]2([H])[C@]1(C([H])([H])[H])C([H])([H])O[H]

BOJKULTULYSRAS-OTESTREVSA-N

InChI=1S/C20H30O5/c1-12-4-7-16-19(2,9-8-17(23)20(16,3)11-21)14(12)6-5-13-15(22)10-25-18(13)24/h5,14-17,21-23H,1,4,6-11H2,2-3H3/b13-5+/t14-,15-,16+,17-,19+,20+/m1/s1

(3E,4S)-3-[2-[(1R,4aS,5R,6R,8aS)-6-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-5,8a-dimethyl-2-methylidene-3,4,4a,6,7,8-hexahydro-1H-naphthalen-1-yl]ethylidene]-4-hydroxyoxolan-2-one

Andrographolide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。