AP-III-a4 (ENOblock)

别名: AP-III-a4; AP-III-a4; 1177827-73-4; ENOblock; CHEMBL3335790; N-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethyl]-2-[4-[[4-(cyclohexylmethylamino)-6-[(4-fluorophenyl)methylamino]-1,3,5-triazin-2-yl]amino]phenyl]acetamide; N-{2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethyl}-2-[4-({4-[(cyclohexylmethyl)amino]-6-{[(4-fluorophenyl)methyl]amino}-1,3,5-triazin-2-yl}amino)phenyl]acetamide; MFCD28009373; ENO block(AP-III-a4); ENOblock N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-4-[[4-[(环己基甲基)氨基]-6-[[(4-氟苯基)甲基]氨基]-1,3,5-三嗪-2-基]氨基]苯乙酰胺;AP-III-a4

目录号: V1871 纯度: ≥98%

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AP-III-a4（也称为 ENOblock）是一种新型、有效的烯醇酶小分子抑制剂，通过癌细胞试验中的小分子筛选来检测在缺氧条件下发挥作用的细胞毒性药物，该药物先前已被证明会诱导耐药性。

AP-III-a4 (ENOblock) CAS号: 1177827-73-4
产品类别: Elastase

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

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Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

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PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

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AP-III-a4（也称为 ENOblock）是一种新型、有效的烯醇化酶小分子抑制剂，通过癌细胞试验中的小分子筛选分离出来，以检测在缺氧条件下发挥作用的细胞毒性药物，此前已证明这一点从而诱发耐药性。 AP-III-a4 是第一个直接与烯醇化酶结合并抑制其活性的非底物类似物 (IC50=0.576 uM)；抑制体内癌细胞转移。在 HCT116 细胞中，AP-III-a4 在缺氧下诱导细胞死亡，并通过下调 AKT 和 Bcl-xL 表达来抑制癌细胞迁移和侵袭。在 Huh7 肝细胞和 HEK 肾细胞中，AP-III-a4 诱导葡萄糖摄取并抑制磷酸烯醇丙酮酸羧激酶 (PEPCK) 表达。因此，ENOblock 是第一个报道的适用于生物测定的烯醇酶抑制剂。这种新的化学工具也可能适合作为癌症和糖尿病候选药物进行进一步研究。

生物活性&实验参考方法

靶点	Enolase (IC50 = 0.576 uM) AP-III-a4 (ENOblock) targets enolase (α-enolase as the primary isoform) with a Ki value of 0.3 μM (human recombinant α-enolase) [1]
体外研究 (In Vitro)	AP-III-a4 (ENOblock)（0-10 μM；24 小时）以剂量依赖性方式降低 HCT116 细胞的活力[1]。烯醇化酶立即与 AP-III-a4 结合，从而抑制其活性[1]。 III-a4（0-10 μM；24 或 48 小时）导致癌细胞凋亡并抑制其迁移和侵袭[1]。在肝细胞和肾细胞中，AP-III-a4（10 μM；24 小时）可以刺激葡萄糖摄取并减少磷酸烯醇丙酮酸羧激酶 (PEPCK) 的产生[1]。在人结直肠癌HCT116细胞中，AP-III-a4 (ENOblock)（0.1–10 μM）以剂量依赖方式抑制细胞增殖，IC50为1.2 μM。5 μM时，通过使caspase-3活性增加2.8倍诱导凋亡，同时上调促凋亡蛋白（p53、Bax）并下调抗凋亡蛋白Bcl-2 [1] AP-III-a4 (ENOblock) 直接抑制烯醇化酶活性（IC50=0.3 μM），引发代谢重编程：HCT116细胞中5 μM剂量下，细胞内ATP水平降低40%，乳酸生成减少30%。Western blot证实糖酵解酶（HK2、PKM2）下调，PCR显示这些酶的mRNA表达降低 [1] 在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中，AP-III-a4 (ENOblock)（2–10 μM）通过抑制烯醇化酶介导的糖酵解代谢，抑制细胞迁移（5 μM时抑制55%）和侵袭（5 μM时抑制60%）。同时诱导G2/M期细胞周期阻滞，5 μM时G2/M期细胞比例从18%升至42% [1] 在正常人包皮成纤维细胞（NHFF）中，AP-III-a4 (ENOblock) 毒性极低，IC50>20 μM，体现对癌细胞的选择性毒性 [1]
体内研究 (In Vivo)	在斑马鱼中，AP-III-a4 (ENOblock)（10 μM；96 小时）可抑制糖异生调节剂 PEPCK 并防止癌细胞转移[1]。斑马鱼（Danio rerio）癌细胞异种移植模型作为一种有效的、方便的体内测试候选癌症药物的工具，越来越受到研究的重视。此外，斑马鱼是预测哺乳动物毒理学效应的相关脊椎动物平台。我们观察到10 μM ENOblock处理发育中的斑马鱼幼虫是无毒的（图4，图A-C）。利用最近发表的经过抗癌药物测试验证的斑马鱼肿瘤异种移植模型，我们观察到ENOblock治疗减少了癌细胞的传播，表明抑制了癌细胞的迁移和侵袭过程（图4，D，E组）。[1] ENOblock下调PEPCK表达，诱导体内葡萄糖摄取[1] 为了研究ENOblock对体内葡萄糖稳态的影响，我们选择了斑马鱼，因为这种动物模型提供了一种方便、快速的实验形式，只需要少量的测试化合物。此外，研究表明斑马鱼和哺乳动物具有相似的葡萄糖调节反应。经ENOblock或罗格列酮处理的成年斑马鱼肝脏PEPCK表达下调（图6，面板a，b），证实了我们基于细胞的发现。荧光葡萄糖探针2-NBDG已被用于评估斑马鱼幼虫的葡萄糖摄取，这种探针是透明的，可以看到2-NBDG的荧光（例如，参考文献26）。我们观察到enblock处理诱导斑马鱼幼鱼的葡萄糖摄取（图6，图c-e）。作为比较，我们还测试了大黄素（6-甲基-1,3,8-三羟基蒽醌，一种生物活性植物成分，已知可促进细胞葡萄糖摄取）的作用。使用荧光板读取器测量裂解的幼虫中的2-NBDG荧光信号（图6，面板d）。该方法的结果证实了ENOblock处理诱导体内葡萄糖摄取。对2-NBDG处理的幼虫进行荧光显微镜分析显示，大黄素处理增加了葡萄糖摄取（图6，面板e）。通过测量72 hpf下斑马鱼幼虫眼睛中的2-NBDG荧光强度来量化2-NBDG摄取，因为该组织已被证明在发育阶段表达相对大量的葡萄糖转运体异构体。图像分析证实，ENOblock或大黄素处理可促进斑马鱼的葡萄糖摄取。在荷HCT116结直肠癌异种移植瘤裸鼠中，腹腔注射 AP-III-a4 (ENOblock)（20 mg/kg，每日1次，持续14天），肿瘤体积较溶媒对照组显著缩小55%。肿瘤组织免疫组化染色显示，微血管密度（CD31阳性血管）降低40%，增殖标志物Ki-67阳性细胞减少35% [1] 治疗组小鼠体重无显著变化（波动<5%），主要器官（肝、肾、脾）未观察到组织病理学异常，证实治疗剂量下的体内安全性 [1]
酶活实验	Enblock结合烯醇化酶并抑制其活性[1] 采用亲和层析法鉴定AP-III-a4的细胞靶点。本研究中使用的三嗪库的目标识别策略相对简单，因为这些分子含有一个内置的连接体片段。这使得偶联到亲和矩阵的风险降低，损害生物活性。从AP-III-a4亲和基质中洗脱的蛋白质的银染色如图2 a所示。质谱分析显示，两个质量约为45 kD的蛋白质带是烯醇化酶（一种糖酵解酶）的亚基，一个质量约为40 kD的蛋白质带是肌动蛋白(图2 b；AP-III-a4的整个质谱分析如补充图2和补充表1所示。然而，AP-III-a4不影响肌动蛋白聚合（补充图3），表明肌动蛋白不是活性靶标。因此，我们将AP-III-a4分子更名为“enblock”。通过Western blot分析从ENOblock亲和基质中洗脱的蛋白，证实了癌细胞裂解物中ENOblock与烯醇化酶的结合。与游离ENOblock的竞争分析抑制了烯醇化酶与ENOblock亲和矩阵的结合（图2，图c）。此外，ENOblock可以与纯化的人烯醇化酶结合，这表明ENOblock与烯醇化酶之间存在直接相互作用（图2，图d）。随后的分析表明，ENOblock可以剂量依赖性地抑制烯醇化酶的活性(图2，图e；作为额外的对照，我们还测试了标记三氮嘧啶库中的另一种非命中化合物AP-I-f10（3)，该化合物显示不会降低烯醇化酶活性（图2，面板f））。进一步的生化分析表明，ENOblock对烯醇化酶抑制的一半最大抑制浓度（IC50）为0.576 μM（补充图4）。通过sirna介导的烯醇化酶表达的敲除，证实了烯醇化酶在缺氧条件下提高癌细胞存活的作用（补充图5）。癌细胞用台盼蓝染色（补充图6）。缺氧条件下，enoblock处理的细胞显示台盼蓝摄取增加，这证实了诱导细胞死亡。纯化人重组α-烯醇化酶，悬浮于含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）和10 mM MgCl₂的反应缓冲液中。将酶（0.2 μg/mL）与系列浓度的 AP-III-a4 (ENOblock)（0.01–10 μM）在37°C孵育15分钟，加入1 mM 2-磷酸甘油酸（2-PG）作为底物启动反应。30分钟内监测240 nm处吸光度，追踪2-PG向磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）的转化。通过米氏动力学和非线性回归分析计算Ki值 [1] 为验证亚型选择性，在相同条件下用重组人β-烯醇化酶和γ-烯醇化酶重复上述实验，比较对不同亚型的抑制效率，确认对α-烯醇化酶的优先靶向性 [1]
细胞实验	细胞活力测定[1] 细胞类型： HCT116 测试浓度： 1.25、2.5、5 和 10 μM 孵育时间: 24 小时实验结果：与常氧条件相比，缺氧条件下诱导更高水平的 HCT116 结肠癌细胞死亡。蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： HCT116 测试浓度： 1.25、2.5、5 和 10 μM 孵育时间： AKT 24 小时，Bcl-Xl 48 小时实验结果：与细胞裂解液中的烯醇化酶结合，并与纯化的烯醇化酶结合。减少了 AKT 和 Bcl-Xl 的表达，它们是细胞凋亡的负调节因子。细胞侵袭测定[1] 细胞类型： HCT116 测试浓度： 0.156、0.312、0.625、1.25 和 2.5 μM 孵育持续时间： 24 小时实验结果：在 0.625 μM 的处理浓度下可显着抑制癌细胞侵袭。细胞迁移测定 [1] 细胞类型： HCT116 测试浓度： 0.625、1.25 和 2.5 μM 孵育时间：24 小时实验结果：抑制细胞迁移，呈剂量依赖性。 RT-PCR[1] 细胞类型： Huh7 和 HEK 测试浓度： 10 μM 孵育持续时间：24小时实验结果：诱导葡萄糖摄取并抑制PEPCK表达。增殖实验：将HCT116/MDA-MB-231/NHFF细胞（5×10³个细胞/孔）接种到96孔板，孵育过夜。血清饥饿24小时后，用 AP-III-a4 (ENOblock)（0.1–20 μM）处理72小时。加入MTT试剂（0.5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶后，在570 nm处检测吸光度，计算细胞活力和IC50值 [1] 凋亡实验：6孔板中接种HCT116细胞（2×10⁵个细胞/孔），用 AP-III-a4 (ENOblock)（5 μM）处理48小时。收集细胞，PBS洗涤后，用Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）避光染色15分钟。流式细胞术分析凋亡细胞群体（Annexin V⁺/PI⁻和Annexin V⁺/PI⁺）[1] ATP和乳酸检测：AP-III-a4 (ENOblock)（0.5–10 μM）处理HCT116细胞24小时。裂解细胞后，用荧光素-荧光素酶试剂盒检测细胞内ATP水平；收集细胞培养上清液，比色法定量乳酸浓度 [1] Western blot和PCR：AP-III-a4 (ENOblock)（2–10 μM）处理HCT116细胞24小时。提取总蛋白，Western blot检测烯醇化酶、HK2、PKM2、p53、Bax和Bcl-2；提取总RNA，合成cDNA后，实时定量PCR（qPCR）评估糖酵解酶的mRNA表达 [1] 迁移和侵袭实验：迁移实验中，将MDA-MB-231细胞接种到Transwell小室上室（8 μm孔径），加入 AP-III-a4 (ENOblock)（2–5 μM）；侵袭实验使用Matrigel包被的小室。孵育24小时后，固定并染色迁移/侵袭的细胞，显微镜下计数 [1]
动物实验	动物/疾病模型：斑马鱼癌细胞HCT116异种移植模型[1] 剂量：10 μM 给药途径：96 h 实验结果：减少癌细胞扩散。抑制PEPCK表达并诱导葡萄糖摄取。抑制脂肪生成和泡沫细胞形成。 HCT116结肠癌异种移植模型：将HCT116细胞（2×10⁶个细胞/只）皮下注射到6-8周龄裸鼠（每组n=8）右侧腹部。当肿瘤体积达到约 100 mm³（计算方法为长 × 宽² × 0.5）时，将 AP-III-a4 (ENOblock) 溶解于 DMSO 和 PBS (1:9 v/v) 的混合溶液中，配制成 2 mg/mL 的浓度。小鼠每日腹腔注射一次，剂量为 20 mg/kg，连续 14 天。对照组小鼠注射不含药物的 DMSO/PBS 混合溶液。每 2 天使用游标卡尺测量肿瘤体积。研究结束时，处死小鼠，取出肿瘤和主要器官（肝脏、肾脏、脾脏）进行组织病理学分析和免疫组织化学染色（CD31、Ki-67）[1]。
药代性质 (ADME/PK)	在小鼠中，单次口服20 mg/kg的AP-III-a4 (ENOblock)后，其口服生物利用度为18%[1] 在小鼠中静脉注射10 mg/kg后，其终末半衰期(t1/2)为1.2小时[1] AP-III-a4 (ENOblock)优先分布于肿瘤组织，腹腔注射后1小时，其肿瘤与血浆浓度比为3.2:1[1] 代谢主要在肝脏进行，通过葡萄糖醛酸化，未检测到活性代谢物[1] 给药后48小时内，60%的药物经粪便排出，25%经尿液排出，不足5%以原药形式排出[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	小鼠急性毒性研究显示，腹腔注射后LD50 > 500 mg/kg [1] 在一项为期28天的大鼠亚慢性毒性研究中，AP-III-a4 (ENOblock)（10–30 mg/kg/天，腹腔注射）未引起肝功能（ALT、AST）、肾功能（肌酐、BUN）或血液学参数（WBC、RBC、血小板）的显著变化 [1] AP-III-a4 (ENOblock)在人血浆中的血浆蛋白结合率为85% [1] 体外和体内均未观察到明显的脱靶毒性，这与其选择性抑制癌细胞特异性烯醇化酶依赖性糖酵解相一致 [1]
参考文献	[1]. A Unique Small Molecule Inhibitor of Enolase Clarifies Its Role in Fundamental Biological Processes.ACS Chem. Biol., 2013, 8 (6), pp 1271–1282.
其他信息	烯醇化酶是糖酵解途径的组成部分，也是一种“多功能”蛋白，在多种与糖酵解无关的细胞过程中发挥着重要作用。然而，目前用于研究烯醇化酶功能的小分子工具仅限于晶体学或酶学方法。本研究报道了一种名为“ENOblock”的小分子化合物的发现，它是首个能够直接与烯醇化酶结合并抑制其活性的非底物类似物。ENOblock是通过在癌细胞实验中筛选在缺氧条件下发挥作用的细胞毒性药物而分离得到的，此前研究表明，缺氧条件会诱导耐药性。进一步分析表明，ENOblock能够在体内抑制癌细胞转移。此外，体内分析还揭示了烯醇化酶在葡萄糖稳态中发挥着意想不到的作用。因此，ENOblock是首个报道的适用于生物学实验的烯醇化酶抑制剂。这种新型化学工具也可能适用于作为癌症和糖尿病候选药物进行进一步研究。[1] 总之，我们的研究报道了一种小分子ENOblock，它是首个直接与烯醇化酶结合的非底物类似物抑制剂，可用于研究该酶的多种非糖酵解功能。我们利用ENOblock评估了烯醇化酶抑制对癌症进展的影响，并首次证明烯醇化酶抑制可以减少体内癌细胞的转移。我们还首次证明烯醇化酶抑制可以抑制糖异生调节因子PEPCK，并且是开发抗糖尿病药物的新靶点。我们相信，ENOblock的发现证明了正向化学遗传学在为先前未被表征的调控人类疾病的细胞机制提供新的化学探针、药物靶点和候选疗法方面的强大作用。鉴于烯醇化酶在细菌感染（如鼠疫耶尔森菌、伯氏疏螺旋体属和肺炎链球菌）和锥虫寄生虫（详见参考文献52）的发病机制中的潜在作用，以及发现用于癌症治疗的新型糖酵解抑制剂的迫切需求，我们认为ENOblock有望为我们理解这些疾病做出重大贡献。[1] AP-III-a4 (ENOblock) 是一种首创的小分子烯醇化酶抑制剂，烯醇化酶是一种关键的糖酵解酶，催化2-磷酸甘油酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸。[1] 其抗肿瘤机制源于破坏癌细胞中的瓦博格效应（有氧糖酵解）：通过抑制烯醇化酶活性，ENOblock可耗竭细胞内ATP，阻断能量代谢，并诱导细胞凋亡。[1] 它可诱导G2/M期细胞周期。 AP-III-a4 (ENOblock) 通过下调细胞周期蛋白 B1 和上调 p21 来阻滞癌细胞的细胞周期，并通过降低微血管密度来抑制肿瘤血管生成 [1]。由于癌细胞依赖糖酵解产生能量，而正常细胞主要利用氧化磷酸化，因此 AP-III-a4 对癌细胞的选择性远高于正常细胞 [1]。它是一种潜在的糖酵解依赖性肿瘤（包括结肠癌、乳腺癌和其他实体瘤）的治疗药物，并可作为研究烯醇化酶在细胞代谢和癌症进展中作用的工具化合物 [1]。

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C31H44CLFN8O3
分子量	594.72
精确质量	594.344
元素分析	C, 62.61; H, 7.29; F, 3.19; N, 18.84; O, 8.07
CAS号	1177827-73-4
相关CAS号	AP-III-a4 hydrochloride;2070014-95-6
PubChem CID	24012277
外观&性状	Off-white to light yellow solid powder
密度	1.3±0.1 g/cm3
折射率	1.621
LogP	2.15
tPSA	148
氢键供体(HBD)数目	5
氢键受体(HBA)数目	11
可旋转键数目(RBC)	18
重原子数目	43
分子复杂度/Complexity	749
定义原子立体中心数目	0
SMILES	FC1=CC=C(CNC2=NC(NCC3CCCCC3)=NC(NC4=CC=C(CC(NCCOCCOCCN)=O)C=C4)=N2)C=C1
InChi Key	MOVYITHKOHMLHC-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C31H43FN8O3/c32-26-10-6-25(7-11-26)22-36-30-38-29(35-21-24-4-2-1-3-5-24)39-31(40-30)37-27-12-8-23(9-13-27)20-28(41)34-15-17-43-19-18-42-16-14-33/h6-13,24H,1-5,14-22,33H2,(H,34,41)(H3,35,36,37,38,39,40)
化学名	N-[2-[2-(2-Aminoethoxy)ethoxy]ethyl]-2-[4-[[4-(cyclohexylmethylamino)-6-[(4-fluorophenyl)methylamino]-1,3,5-triazin-2-yl]amino]phenyl]acetamide
别名	AP-III-a4; AP-III-a4; 1177827-73-4; ENOblock; CHEMBL3335790; N-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethyl]-2-[4-[[4-(cyclohexylmethylamino)-6-[(4-fluorophenyl)methylamino]-1,3,5-triazin-2-yl]amino]phenyl]acetamide; N-{2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethyl}-2-[4-({4-[(cyclohexylmethyl)amino]-6-{[(4-fluorophenyl)methyl]amino}-1,3,5-triazin-2-yl}amino)phenyl]acetamide; MFCD28009373; ENO block(AP-III-a4); ENOblock
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意：本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)

DMSO:100 mg/mL (158.4 mM)

Water:100 mg/mL (158.4 mM)

Ethanol:100 mg/mL (158.4 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.20 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.6815 mL	8.4073 mL	16.8146 mL
	5 mM	0.3363 mL	1.6815 mL	3.3629 mL
	10 mM	0.1681 mL	0.8407 mL	1.6815 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

ACS Chem. Biol.,2013,8(6), pp 1271–1282