IL-12/IL-23

Apilimod 的 IC50 约为 20 nM，可抑制人 PBMC 中 IFN-γ/SAC 或 SAC 诱导的 IFN-γ 产生。对高浓度人PBMC中IFN-γ/SAC产生的TNF-α和ConA引起的IL-5，Apimod表现出一定的抑制作用；然而，在所有检测的培养物中，它对 IL-1β、IL-2、IL-4、IL-8 和 IL-18 均表现出一定程度的抑制作用。 IFN-γ/LPS 或 IFN-γ/SAC 刺激大大增加了 p35 和 p40 启动子驱动的荧光素酶活性，而 100 nM Apilimod 完全阻断它 [1]。

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Apilimod (STA-5326)显著抑制IL-12和IL-23的产生[1]
IL-12在先天性和适应性免疫反应中起着不可或缺的作用。IFN-γ是IL-12产生的一种强而选择性的增强剂，只有在LPS或SAC刺激前用IFN-γ延长治疗至少8小时后，这种作用才明显。31这表明，在Th1介导的慢性自身免疫或免疫性疾病中，以反复高水平IFN-γ为特征，IL-12家族的产生是由IFN-γ介导的。为了发现有效的IL-12抑制剂，我们使用IFN-γ/LPS刺激的人外周血单个核细胞进行了表型筛选试验，并筛选了80000个化合物库。通过筛选发现了一种新化合物，即1,3,5-三嗪衍生物。主要优化过程产生并评估了约500种化合物，并发现了独特的吗啉嘧啶衍生物STA-5326。STA-5326强烈抑制IFN-γ/LPS刺激的人PBMC培养物中IL-12的产生，IC50为10 nM（表1）。在IFN-γ/SAC刺激的人外周血单个核细胞中，抑制活性更为明显，其中STA-5326完全抑制IL-12，IC50为1 nM（图1；表1）。即使在10μM的浓度下，也没有观察到细胞存活率的降低。

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Apilimod (STA-5326)在抑制细胞因子产生方面的选择性[1]
细胞因子抑制的选择性对于理解作用机制和体内活性特别重要。STA-5326抑制了IFN-γ/SAC或SAC在人PBMCs中诱导的IFN-γ产生，IC50约为20 nM，而当使用抗CD3和抗CD28抗体刺激T细胞时，该化合物对产生没有显著影响，这表明通过抑制IL-12独立于抑制Th1细胞而发生的T细胞受体依赖性IFN-γ的产生不会被该化合物直接抑制（表2）。在IFN-γ/SAC刺激的人外周血单个核细胞中观察到IL-6产生的显著减少，但在IFN-α/LPS刺激的人单核细胞、IFN-γ/SAC刺激的THP-1和小鼠脾细胞中没有观察到（表2；Y.Wada，未发表的数据，2001-2002）。同样，在IL-10的产生中观察到IFN-γ/SAC特异性抑制。STA-5326在高浓度下对IFN-γ/SAC诱导的TNF-α和ConA诱导的人外周血单个核细胞IL-5表现出一定的抑制作用，但在所有测试的培养物中对IL-1β、IL-2、IL-4、IL-8和IL-18没有抑制作用。

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阿匹利莫（STA-5326）对IL-12 p35和p40启动子活性的影响[1]
在证明STA-5326减少IL-12 p70和p40蛋白的产生后，对p35和p40启动子活性进行了研究，以更深入地了解该化合物的作用机制。用DNA构建体瞬时转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7，其中p35和p40启动子指导萤光素酶报告基因的表达。然后用小鼠重组IFN-γ刺激细胞，然后在STA-5326或STA-5392（一种与STA-5326结构相关的无活性化合物）存在或不存在的情况下用LPS或SAC刺激细胞。经IFN-γ/LPS或IFN-γ/SAC刺激后，p35和p40启动子驱动的萤光素酶活性显著诱导，并被100 nM STA-5326完全抑制（图2）。结构上密切相关的非活性化合物STA-5392即使在1μM时也没有效果（图2B）。p35和p40启动子介导的萤光素酶表达的抑制与观察到的p70蛋白产生的抑制具有良好的相关性。该结果表明，STA-5326对IL-12和IL-23的抑制发生在转录水平，并且STA-5326抑制IL-12 p35和IL-12/IL-23 p40基因的转录。

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Apilimod (STA-5326)的活性不需要从头合成蛋白质[1]
皮质类固醇、33-36环腺苷酸、37IFN-β、38和IL-1039通过一种需要从头合成蛋白质的机制对细胞因子（包括IL-12）的产生产生抑制作用。为了确定新的蛋白质合成是否参与STA-5326的抑制机制，与CHX对IL-10抑制IL-12的作用相比，评估了蛋白质合成抑制剂CHX对STA-5326抑制IL-12产生的作用。浓度为5μg/mL的CHX将IL-12的产生减少了一半以上。STA-5326在CHX存在的情况下仍能有效抑制IL-12的产生，并且比单独使用CHX治疗更能减少IL-12的生产，表明CHX不会消除STA-5326的抑制活性（图3）。值得注意的是，STA-5326在CHX存在下的IC50估计值比没有CHX的培养物中的IC50低2至3倍。在同一实验中，浓度为10ng/mL的IL-10在没有CHX的情况下显著降低了IL-12的产生，但在CHX存在的情况下完全失去了抑制活性。

Apilimod（10 mg/kg，口服）不仅在试验期间连续给药时效果良好，而且在第 30 天开始时效果也很好，此时疾病明显可检测到，但尚未达到最严重的程度。仅在 Th1 模型中，TA-5326 显着减少了细胞数量，与载体对照相比，平均抑制百分比为 51% ± 8%。 Th2 患者对阿莫德治疗没有反应[1]。在 EAU 小鼠中，阿匹莫德（5 或 20 mg/kg）可降低血液 IL-12 p40 水平，而不影响体重。临床和组织学研究表明，口服阿莫德可降低实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）的严重程度[2]。

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阿匹利莫/Apilimod (STA-5326)对体内Th1反应的选择性抑制 STA-5326对体外IL-12和IL-23产生的有效和选择性抑制表明，该化合物应显著抑制体内Th1反应，但不抑制Th2反应。我们评估了STA-5326对体内Th1和Th2小鼠模型的影响，这两种模型分别由结核分枝杆菌和弗氏佐剂在C57BL/6小鼠中诱导，以及蛔虫/氢氧化铝和不完全弗氏佐剂分别在BALB/c小鼠中诱导。STA-5326、类固醇泼尼松龙作为阳性对照或载体从免疫接种当天起口服给小鼠，并收集每组的淋巴结细胞，以评估其对体内Th1和Th2反应诱导的影响。图4分别显示了4个Th1和6个Th2实验中细胞数量相对于初始对照的平均百分比。免疫接种后，这些Th1和Th2模型中载体对照组的淋巴结细胞比相应的初始对照组增加了约3倍。在两种模型中，用泼尼松龙治疗的动物均观察到减少，表明Th1和Th2反应均受到不加选择的抑制。相比之下，STA-5326治疗仅在Th1模型中导致细胞数量显著减少，与赋形剂对照相比，平均抑制百分比为51%±8%。STA-5326治疗在Th2环境中没有效果（图4）。 [1]
为了检查小鼠T细胞的分化，然后以每孔相等的细胞数接种淋巴结细胞，并评估抗CD3/CD28抗体刺激的IFN-γ和IL-4的产生，这两种细胞因子分别代表Th1和Th2。C57BL/6小鼠接种M结核疫苗有效地驱动了载体对照中的体内Th1反应，IFN-γ的产生显著增加（图5）。或者，用蛔虫/氢氧化铝对BALB/c小鼠进行免疫接种会引起体内Th2反应，在载体处理组中观察到IL-4的增加。泼尼松龙治疗不仅能阻断Th1模型中IFN-γ的升高，还能适度阻断Th2模型中IL-4的升高。相比之下，阿匹利莫（STA-5326）仅在Th1模型中抑制IFN-γ，与4个单独的Th1实验中的赋形剂对照组相比，平均减少84%±10%。有趣的是，在STA-5326治疗组中，Th2细胞因子IL-4的产生趋于增加，从6个单独的Th2实验来看，与赋形剂对照组相比，平均增加了232%±91%。这些结果清楚地表明，STA-5326的作用是刺激依赖性的，并且对Th1反应具有选择性。

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Apilimod (STA-5326)在炎症性肠病动物模型中的体内抑制活性 最近的人类和动物研究表明，克罗恩病的局部免疫反应主要是Th1，IL-12在疾病的发生和进展中起着关键作用。40-42为了研究Apilimod (STA-5326)在治疗CD方面的潜力，我们在CD4+CD45Rb高T细胞转移模型中测试了口服该化合物。组织学分析显示，载体处理动物的结肠出现炎症性组织病理学变化，如明显的上皮增生、隐窝长度明显增加、黏膜和LP中慢性炎症细胞的显著浸润，包括隐窝微脓肿、明显的反应性异型性和不同程度的杯状细胞耗竭。在口服阿匹利莫（STA-5326）的动物中，这些变化显著减少，结肠保持正常结构（图6A-B）。组织学评分明确区分了接受STA-5326的动物和接受赋形剂治疗的动物，抑制作用呈剂量依赖性，在4 mg/kg剂量下显著降低，在10 mg/kg剂量下抑制作用更强（图6C）。计算出的结肠与体重比与组织学评分一致，显示出STA-5326治疗的剂量依赖性衰减（图6D）。STA-5326不仅在整个实验过程中给药时有效，而且在第30天开始给药时也有效，此时疾病明显可测量但不是最大值（D.Z.，J.C.，未发表的数据，2002年1月）。此外，本研究中对小鼠来源的LPMC细胞因子的离体分析表明，载体对照的LP细胞产生了增强的IFN-γ水平和检测不到的IL-4水平。STA-5326动物体内IFN-γ的产生大大减少，表明口服STA-5326下调了该炎症性肠病动物模型中的体内Th1反应（图6E）。

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用Apilimod（STA-5326）治疗的小鼠血清中IL-12 p40水平降低。口服5mg/kg或20mg/kg的Apilimod (STA-5326)可在第14天和第18天减轻EAU的严重程度。此外，组织病理学分析显示，用20mg/kg STA-5326治疗的小鼠EAU严重程度显著降低。尽管通过ELISA分析，STA-5326处理的小鼠引流淋巴结细胞的IFN-γ产生增加，但产生IFN-γ的细胞比例没有显著改变。然而，在STA-5326处理的小鼠中，IL-17的产生和产生IL-17的细胞比例显著降低。此外，在效应期口服STA-5326可减轻EAU的严重程度。 结论：这些结果表明，口服IL-12/IL-23抑制剂Apilimod（STA-5326）可有效抑制EAU模型中的炎症，并减少IL-17产生细胞的扩增。STA-5326可能代表了一种治疗人类难治性葡萄膜炎的新方法[2]。

LPMCs的分离和细胞因子的测定[1]
新鲜获得的结肠在无钙/镁的HBSS中洗涤，并在含有EDTA（0.75 mM）、DTT（1 mM）和抗生素（2.5μg/mL两性霉素、50μg/mL庆大霉素）的HBSS在37°C下孵育两次，持续15分钟。组织在37°C下在含有0.5 mg/mL胶原酶D、0.01 mg/mL DNase I和抗生素的RPMI中消化。然后将固有层（LP）细胞分层在40%至100%的Percoll梯度上，并在40%至100%的界面上分离出富含淋巴细胞的群体作为固有层单核细胞（LPMC）。如上所述，在“体内Th1和Th2反应”下，用抗CD3和抗CD28抗体孵育细胞。24小时后取出上清液，使用ELISA试剂盒评估IFN-γ。

体外试验[1]
使用NycoPrep分离人和猴PBMC。使用RosetteSep纯化人单核细胞，通过用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF；100ng/mL）和IL-4（20ng/mL）培养9天，将树突状细胞从单核细胞中分化出来。通过表型分析，单核细胞和树突状细胞的纯度分别超过70%的CD14+和CD1a+。使用OptiPrep分离小鼠PBMC，并使用ACK裂解缓冲液制备脾细胞。人PBMCs、THP-1细胞和猴PBMCs用人IFN-γ（400 U/mL）预处理22小时，然后用1μg/mL LPS或0.025%SAC刺激18小时。为了研究从头合成的要求，在SAC之前2小时或之前加入环己酰亚胺（CHX）。人外周血单个核细胞也受到抗CD3（0.2μg/mL）和抗CD28（1μg/mL）抗体或ConA（1μg/mL）的刺激。用小鼠IFN-γ（100ng/mL）和SAC（0.05%）的组合刺激小鼠细胞22小时Apilimod（STA-5326）在DMSO中制备；将所有培养物（包括无化合物对照）中的最终DMSO浓度调节至0.25%。
使用抗IL-23 p19多克隆抗体和生物素化山羊抗人p40抗体检测IL-23，并使用重组IL-23计算。使用p40 ELISA试剂盒测定总p40蛋白。使用人IL-12 p70酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒测量猴IL-12 p7。使用Quantikine HS ELISA试剂盒测量SAC单独诱导的IL-12。使用ELISA试剂盒或Bio-Plex测定法测量其他细胞因子。

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IL-12启动子驱动的萤光素酶测定[1]
为了构建人IL-12 p35和p40启动子/萤光素酶报告子构建体，我们通过聚合酶链式反应（PCR）从人外周血单个核细胞中获得的基因组DNA产生了p35（-1.5kb/+3bp）和p40（-1.3kb/+56bp）启动子片段。将得到的PCR产物连接到pGL3-Basic载体中萤光素酶基因的上游。所有构建体均通过DNA测序进行验证。使用SuperFect转染试剂瞬时转染RAW267.4细胞。用IFN-γ（100 ng/mL）刺激细胞10小时，然后在有或没有测试化合物的情况下用LPS（1μg/mL）刺激细胞16小时。用pCMVβ载体共转染细胞以监测转染效率。根据萤光素酶检测系统和发光β-gal检测系统测定萤光素酶和β-半乳糖苷酶活性。然后使用β-半乳糖苷酶值对萤光素酶活性进行归一化。

CD4+CD45Rbhigh T细胞转移治疗SCID小鼠炎症性肠病[1]
从雌性BALB/c小鼠脾细胞中分离CD4+ T细胞，使用抗B220 (RA3-6B2)、CD11b (M1/70)和CD8α (53-6.72)抗体进行阴性选择，并用FITC标记的抗CD45RB (16A)和PE标记的抗CD4抗体进行标记。CD4+CD45RBhigh细胞定义为CD45Rb染色阳性CD4+细胞的前40%，并通过流式细胞术进行分选。将收集的细胞腹腔注射到雌性CB-17 SCID小鼠体内，每只小鼠注射4 × 10⁵个细胞。从转移后的第二天开始，每天一次口服给予Apilimod (STA-5326)或载体，每周5天。
结肠组织用10%中性缓冲福尔马林固定，并包埋于石蜡中。取升结肠、横结肠和降结肠的切片（4 μm），用苏木精-伊红染色。选取受累最严重区域的原始图像，分别以40倍和200倍放大倍率进行数字显微照片分析。结肠炎症程度采用盲法，根据4项组织学指标（隐窝延长、炎性细胞浸润、隐窝脓肿数量和杯状细胞减少）进行0至3分的评分。对照组被视为基线状态，评分为0分。1分、2分和3分分别代表：隐窝延长增加2至3倍、4至6倍和超过6倍；炎性细胞浸润轻度、中度和重度；每段结肠隐窝脓肿数量分别为 1 至 2 个、3 至 5 个以及超过 5 个；杯状细胞减少伴上皮增生或炎症浸润的程度分为轻度、中度和重度。每只动物的总评分是升结肠、横结肠和降结肠各段在所有 4 个类别中的平均评分之和。

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口服 Apilimod (STA-5326) [2]
在大多数实验中，免疫后第 0 天至第 14 天，每周 6 天，每天一次口服 5 mg/kg 或 20 mg/kg 的 Apilimod (STA-5326) 或仅口服赋形剂（0.5% 羧甲基纤维素）。在效应阶段实验中，免疫后第9天至第14天，每天一次口服20 mg/kg的Apilimod (STA-5326)或载体。

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免疫后Apilimod (STA-5326)治疗组或载体治疗组小鼠血清中IL-12的产生[2]
小鼠按上述方法免疫，免疫后第0天至第14天，每天一次口服5 mg/kg或20 mg/kg的Apilimod (STA-5326)或载体。免疫后第18天处死STA-5326治疗组或载体治疗组小鼠，并收集每只小鼠的血清，使用Quantikine ELISA试剂盒测定IL-12 p40。

Apilimod (STA-5326) 的患者特征、安全性和耐受性。
本试验纳入了 29 名符合条件的患者。研究患者的疾病特征在 Apilimod 治疗组和安慰剂治疗组之间无显著差异（见补充表 1，可在《关节炎与风湿病》网站 http://onlinelibrary.wiley.com/journal/10.1002/(ISSN)1529-0131 获取），两组患者接受的甲氨蝶呤 (MTX) 平均每周剂量分别为 21.1 mg 和 22.5 mg。由于我们在第一阶段观察到了良好的安全性和药代动力学（MTX 和 apilimod）特征（数据未显示），因此研究继续进行至第二阶段，随后进入第三阶段。在第一阶段，9 名接受 apilimod 治疗的患者中有 8 名完成了研究，而 1 名患者因出现副作用（严重头痛）于第 29 天退出研究。尽管安全性和临床评估已完成，但该患者拒绝接受第二次关节镜检查。第二阶段所有接受治疗的患者均完成了研究。在第三阶段（每日两次，每次 100 mg），5 名接受 apilimod 治疗的患者中有 3 名持续治疗至第 57 天，其中 1 名决定将治疗延长至第 85 天。另有 2 名患者因副作用在第 57 天前退出研究。在第一阶段和第二阶段，17 名接受 apilimod 治疗的患者中有 15 名（88%）仅观察到轻微不良事件（主要为胃肠道反应）。在第3阶段，所有接受阿匹莫德治疗的患者以及接受安慰剂的患者均出现了副作用（表1）。不良事件的详细列表见补充表2，该表可在《关节炎与风湿病》杂志网站http://onlinelibrary.wiley.com/journal/10.1002/(ISSN)1529-0131上查阅。[Arthritis Rheum. 2012 Jun;64(6):1750-5]

目的：研究口服白细胞介素-12 (IL-12)/IL-23 抑制剂甲磺酸阿匹莫德 (STA-5326) 在类风湿关节炎 (RA) 患者中的安全性、耐受性、药代动力学和疗效。方法：我们开展了一项 IIa 期随机、双盲、安慰剂对照的概念验证研究，评估阿匹莫德 (STA-5326) 联合甲氨蝶呤治疗 29 例活动性 RA 患者的疗效（阿匹莫德治疗组与安慰剂组的比例为 3:1），研究分为 3 个阶段。患者分别接受阿匹莫德 100 mg/天或安慰剂治疗 4 周（第一阶段）或 8 周（第二阶段）。在第三阶段，患者接受阿匹莫德 100 mg 每日两次或安慰剂治疗 8 周，并可选择延长 4 周。在整个研究过程中，我们评估了临床疗效（28个关节疾病活动度评分[DAS28]和美国风湿病学会[ACR]标准）；在基线和第29天（1期和2期）或第57天（3期）采集滑膜组织样本，并进行细胞标志物和细胞因子的免疫组织化学分析。
结果：虽然在1期和2期仅观察到轻微不良事件，但在3期，所有患者均出现头痛和/或恶心。在接受阿匹莫德治疗（100 mg/天）的患者中，与基线相比，第29天和第57天的DAS28评分均有小幅但显著的降低。仅有6%的患者在第29天达到ACR20缓解，25%的患者在第57天达到ACR20缓解，与安慰剂组的缓解率相似。增加剂量（100 mg，每日两次）并未提高临床疗效。与临床结果一致，apilimod 对滑膜生物标志物的表达没有影响。重要的是，我们也没有观察到 apilimod 对滑膜 IL-12 和 IL-23 表达的影响。结论：我们的结果不支持 apilimod 通过抑制 IL-12/IL-23 能够显著改善类风湿关节炎 (RA) 临床症状的观点。
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22170479/

[1]. Selective abrogation of Th1 response by STA-5326, a potent IL-12/IL-23 inhibitor. Blood. 2007 Feb 1;109(3):1156-64.

[2]. Therapeutic effect of the potent IL-12/IL-23 inhibitor STA-5326 on experimental autoimmune uveoretinitis. Arthritis Res Ther. 2008;10(5):R122.

Apilimod (STA 5326) 是一种强效的 IL-12/IL-23 抑制剂，可强烈抑制 IFNγ/SAC 刺激的人外周血单核细胞 (PBMC) 和 SAC 处理的猴 PBMC 中的 IL-12。Apilimod 是一种强效且高选择性的 PIKfyve 抑制剂。

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药物适应症
正在研究用于治疗克罗恩病、银屑病及银屑病相关疾病。

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白细胞介素-12 (IL-12) 细胞因子可诱导初始 T 细胞分化为 1 型辅助性 T 细胞 (Th1) 表型，是 Th1 介导的免疫疾病发病机制的重要组成部分。IL-23 是 IL-12 家族中较新的成员，与 IL-12 共享 p40 蛋白亚基，并在效应记忆 T 细胞和 IL-17 产生 T 细胞的生成中发挥关键作用。我们介绍了一种新型化合物STA-5326，它能在转录水平下调IL-12 p35和IL-12/IL-23 p40的表达，并抑制IL-12和IL-23细胞因子的产生。口服STA-5326可抑制小鼠的Th1免疫反应，但对Th2免疫反应无影响。利用CD4⁺CD45Rb^high T细胞转移诱导的严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠炎症性肠病模型进行的体内研究表明，口服STA-5326可显著减轻结肠的炎症组织病理学改变。在体外培养STA-5326治疗组小鼠固有层细胞时，观察到干扰素-γ（IFN-γ）的产生显著降低，表明STA-5326可下调Th1反应。这些结果表明，STA-5326 具有治疗 Th1 相关自身免疫性疾病或免疫性疾病的潜力。目前，STA-5326 正在克罗恩病和类风湿性关节炎患者中进行 II 期临床试验。[1] STA-5326 是首个通过化合物库筛选发现的高效选择性 IL-12/IL-23 抑制剂。该化合物独特的作用机制及其在 Th1 介导的动物疾病模型中的体内疗效表明，STA-5326 有望用于治疗慢性炎症性疾病。注射识别 IL-12 和 IL-23 共有的 p40 亚基的单克隆抗体已在银屑病和克罗恩病患者的临床试验中显示出积极结果。该抗体通过中和已产生的IL-12和IL-23蛋白发挥作用，而STA-5326则通过选择性地抑制p35和p40基因的转录发挥作用。目前，STA-5326抑制转录的具体机制仍在研究中。STA-5326目前正在多项临床研究中进行评估。该化合物在健康志愿者中显示出安全性，并且在体外实验中证实了其对IL-12产生的抑制作用（JC，未发表数据，2004）。我们已完成一项针对克罗恩病患者的STA-5326 II期开放标签临床试验，结果显示该口服化合物具有初步的临床疗效。 STA-5326 目前正在一项双盲、安慰剂对照的 2b 期克罗恩病研究中进行测试，并在一项 2a 期研究中评估其对类风湿性关节炎和常见变异型免疫缺陷病 (CVID) 的疗效，CVID 是一种以 IL-12 水平升高为特征的疾病。[1]

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引言：本研究旨在确定口服白细胞介素 (IL) 12/IL-23 抑制剂 STA-5326 是否对实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎 (EAU) 有效。方法：用人视网膜间质视黄醇结合蛋白肽 (IRBP 1-20) 免疫 C57BL/6J 小鼠。从第0天到第14天，每天一次，连续6天，通过口服途径给予小鼠STA-5326（剂量分别为5 mg/kg或20 mg/kg）或仅给予载体。在免疫后第14天和第18天进行眼底检查。在第18天处死小鼠，并摘除眼球进行组织病理学检查。用IRBP 1-20刺激体内致敏的引流淋巴结细胞，收集培养上清液，通过ELISA检测干扰素（IFN）-γ和IL-17的含量。通过流式细胞术评估培养的引流淋巴结细胞中CD4+ T细胞内IFN-γ和IL-17的表达。检测接受免疫的STA-5326治疗组或载体治疗组小鼠血清中IL-12 p40的水平。 [2]口服STA-5326可有效抑制EAU模型中的炎症，并降低血清IL-12/IL-23 p40水平和IL-17产生细胞的扩增。STA-5326代表了一种治疗人类难治性葡萄膜炎的新型有前景的治疗方法。[2]

C23H26N6O2

418.4915

418.211

C, 66.01; H, 6.26; N, 20.08; O, 7.65

541550-19-0

Apilimod mesylate;870087-36-8; 870151-86-3; 541550-19-0; 1383916-59-3; 870087-37-9 (HCl); 870087-41-5 (besylate)

10173277

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

655.1±65.0 °C at 760 mmHg

350.0±34.3 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.637

4.04

84.76

1

8

8

31

544

0

CC1=CC(=CC=C1)/C=N/NC2=CC(=NC(=N2)OCCC3=CC=CC=N3)N4CCOCC4

HSKAZIJJKRAJAV-KOEQRZSOSA-N

InChI=1S/C23H26N6O2/c1-18-5-4-6-19(15-18)17-25-28-21-16-22(29-10-13-30-14-11-29)27-23(26-21)31-12-8-20-7-2-3-9-24-20/h2-7,9,15-17H,8,10-14H2,1H3,(H,26,27,28)/b25-17+

N-[(E)-(3-methylphenyl)methylideneamino]-6-morpholin-4-yl-2-(2-pyridin-2-ylethoxy)pyrimidin-4-amine

Apilimod; 541550-19-0; STA 5326; STA-5326; Apilimod [INN]; UNII-GFW2K84S4L; GFW2K84S4L; STA5326;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~238.95 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 3.33 mg/mL (7.96 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。