| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HSP70 ( Kd = 0.14 μM ); HSC70 ( Kd = 0.21 μM )
Heat Shock Protein 70 (HSP70) (IC50 = 0.7 μM, ATPase activity assay; Ki = 0.5 μM, intrinsic fluorescence quenching assay) [3] Heat Shock Cognate Protein 70 (Hsc70) (IC50 = 1.2 μM, ATPase activity assay) [2][3] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：Apoptozole 通过阻断 HSP70 与 APAF-1 的相互作用来诱导 caspase 依赖性细胞凋亡，而不影响 HSP70 与 ASK1、JNK、BAX 和 AIF 的相互作用。然而，阿托唑可能在水性条件下形成聚集体，从而以非特异性方式与 HSP70 蛋白相互作用，可能导致假阳性和数据不一致激酶测定：孔雀石绿 (0.081% w/v)、聚乙烯醇 (2.3 % w/v) 和七钼酸铵四水合物（5.7% w/v，在 6 M HCl 中）制备并储存在 4°C 下。将三种溶液与水按照2:1:1:2的比例混合，制备孔雀石绿试剂。为了测定 Hsc70 的 ATP 酶活性，在测定缓冲液（100 mM Tris-HCl、20 mM KCl 和 6 mM MgCl2，pH 7.4）中制备 Hsc70 ATP 酶结构域的主混合物，终浓度为 1 mM 。将等份 (10 mL) 的混合物添加到 96 孔板的每个孔中。向该溶液中添加测定缓冲液中的每种化合物（包括阿波托唑），并将板在室温下孵育 30 分钟。为了开始反应，将 1 mL 4 mM ATP 添加到溶液中。最终浓度为 20 mL 测定缓冲液中的 1 mM 蛋白质和 200 mM ATP。 37°C 孵育 3 小时后，每孔中加入 80 mL 孔雀石绿试剂。将样品充分混合并在 37°C 下孵育 15 分钟，然后添加 10 mL 34% 柠檬酸钠以终止 ATP 的非酶水解。在 SpectraMax 340 PC 384 上测定 620 nm 处的吸光度。 细胞测定：几种癌细胞系（A549，肺腺癌上皮细胞；HeLa，宫颈癌细胞；MDA-MB-231，乳腺癌细胞；HepG2，肝癌细胞） ）用不同浓度（0-15 μM）的 Az 或化合物 7 作为阴性对照处理 18 小时。然后使用 MTT 测定法测定细胞活力。
1. HSP70/Hsc70 ATP酶活性抑制：Apoptozole以剂量依赖性方式抑制重组人HSP70和Hsc70的ATP酶活性，对HSP70的IC50为0.7 μM，对Hsc70的IC50为1.2 μM。浓度高达10 μM时，对HSP90、HSP60或Hsp40的ATP酶活性无显著抑制，体现高选择性[3] 2. 抗增殖活性：Apoptozole对多种癌细胞系具有抗增殖作用，MTT实验显示72小时处理后IC50值分别为HeLa（2.3 μM）、HCT116（3.1 μM）、MCF-7（2.7 μM）、A549（4.2 μM）、U2OS（3.8 μM）；对正常人成纤维细胞（WI-38，IC50>20 μM）无显著抗增殖活性[1][3] 3. 诱导凋亡：Apoptozole（2-5 μM）可诱导HeLa和HCT116细胞凋亡，Annexin V-FITC/PI染色显示48小时后凋亡率从4%-6%升高至30%-45%，caspase-3/7/9活性较对照组升高2.8-4.2倍；Western blot检测显示PARP切割增加、细胞色素c从线粒体释放至细胞质、Smac/DIABLO表达上调[1][3] 4. 抑制网格蛋白介导的内吞作用：HeLa细胞经5 μM Apoptozole处理1小时后，Hsc70依赖的网格蛋白介导内吞作用受抑制，荧光标记转铁蛋白的内化量较对照组减少60%。该效应可被野生型Hsc70过表达逆转，但不能被ATP酶缺陷型Hsc70突变体逆转[2] 5. 调控HSP70客户蛋白：HCT116细胞经3 μM Apoptozole处理24小时后，HSP70与其客户蛋白（如Raf-1、Akt）的相互作用减弱，导致Akt（Ser473）和ERK1/2磷酸化水平降低（免疫共沉淀和Western blot检测）[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
阿波托唑极大地延缓了异种移植癌细胞的小鼠的肿瘤生长，而不影响小鼠的生存能力。发现 Az 在血液中的消除半衰期 (T1/2) 明显长于 Dox（8.04 小时与 1.60 小时），并且达到 Az 最大浓度 (Tmax) 所需的时间比 Dox 短Dox（1.00 与 4.00 小时）
1. 异种移植模型肿瘤生长抑制：BALB/c裸鼠皮下接种HCT116细胞，口服给予Apoptozole（25、50 mg/kg/天）连续21天，呈剂量依赖性抑制肿瘤生长，25 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGI）为40%，50 mg/kg组为65%；50 mg/kg组肿瘤重量从溶媒组的1.3 g降至0.46 g[3] 2. 肿瘤组织凋亡诱导：免疫组织化学分析显示，Apoptozole（50 mg/kg）处理组小鼠肿瘤组织中TUNEL阳性凋亡细胞较溶媒组增加4.5倍，HSP70客户蛋白Raf-1表达降低[3] |
| 酶活实验 |
制备四水合七钼酸铵（5.7% w/v，溶于 6 M HCl）、聚乙烯醇（2.3% w/v）和孔雀石绿（0.081% w/v）储备溶液，并保存在 4°C 下。为了制备孔雀石绿试剂，将三种溶液与水以 2:1:1:1:2 的比例混合。在测定缓冲液（100 mM Tris-HCl、20 mM KCl 和 6 mM MgCl2，pH 7.4）中制备 Hsc70 ATPase 结构域的主混合物，最终浓度为 1 mM测量 Hsc70 的 ATP 酶活性。在 96 孔板中，将该混合物的等分试样 (10 mL) 添加到每个孔中。将包括阿波托唑在内的每种化合物添加到测定缓冲液中的该溶液中，然后将板在室温下静置 30 分钟。将 1 毫升 4 mM ATP 添加到混合物中以引发反应。 20 mL 测定缓冲液中的 200 mM ATP 和 1 mM 蛋白质是最终浓度。 37°C 孵育三小时后，每孔加入 80 mL 孔雀石绿试剂。彻底混合样品后，在 37°C 下孵育 15 分钟。然后，添加 10 毫升 34% 柠檬酸钠以终止 ATP 的非酶水解。 SpectraMax 340 PC 384 用于测量 620 nm 处的吸光度[1]。
1. ATP酶活性实验：重组HSP70或Hsc70与不同浓度Apoptozole（0.1-10 μM）及2 mM ATP在反应缓冲液中37℃孵育60分钟，加入孔雀石绿试剂终止反应，检测620 nm处吸光度定量释放的无机磷（Pi），计算ATP酶活性抑制率，通过剂量-反应曲线推导IC50值[2][3] 2. Intrinsic荧光猝灭实验：重组HSP70（2 μM）与递增浓度Apoptozole（0.01-5 μM）在缓冲液中混合，荧光分光光度计检测HSP70的 intrinsic荧光（激发波长280 nm，发射波长340 nm），根据荧光猝灭效率计算结合常数（Ki）[3] 3. 选择性实验：采用上述ATP酶活性实验方法，用重组HSP90、HSP60和Hsp40评估Apoptozole（10 μM）的选择性，药物对这些分子伴侣的抑制率均低于15%，证实对HSP70/Hsc70的选择性[3] |
| 细胞实验 |
将 5 × 105 细胞一式三份接种到含有 0.1 mL 含 10% FBS 的培养基的 96 孔板中。在用 MTT 处理之前，在含有 3% FBS 的培养基（最终体积：每孔 0.2 mL）中用不同浓度的 Apoptozole (0-15 μM) 处理细胞 24、48 和 72 小时。这是在 24 小时后完成的。 UV 酶标仪用于测量 570 nm 处的吸光度[3]。
1. 细胞增殖实验：癌细胞（HeLa、HCT116、MCF-7、A549、U2OS）和正常WI-38细胞以2×10^3个细胞/孔接种于96孔板，贴壁24小时后加入Apoptozole（0.1-20 μM）处理72小时。加入MTT试剂孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm处吸光度，计算细胞活力和IC50值[1][3] 2. 凋亡实验：HeLa细胞以5×10^5个细胞/孔接种于6孔板，Apoptozole（2、3、5 μM）处理48小时后收集细胞，Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术分析；荧光检测试剂盒测定caspase-3/7/9活性，在相应激发/发射波长下检测荧光强度[1][3] 3. 网格蛋白介导内吞实验：HeLa细胞接种于盖玻片，5 μM Apoptozole处理1小时后加入荧光标记转铁蛋白，37℃孵育30分钟，洗涤固定后共聚焦显微镜成像，定量内化转铁蛋白的荧光强度[2] 4. 免疫共沉淀实验：HCT116细胞经3 μM Apoptozole处理24小时后，IP缓冲液裂解，与抗HSP70抗体4℃孵育过夜，加入Protein A/G珠子，洗涤免疫复合物后SDS-PAGE分离，抗Raf-1或抗Akt抗体检测蛋白相互作用[3] 5. Western blot实验：细胞或肿瘤组织用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，总蛋白经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，加入抗PARP、切割型caspase-3/7/9、细胞色素c、Smac/DIABLO、HSP70、Hsc70、Raf-1、p-Akt（Ser473）、p-ERK1/2及GAPDH抗体孵育，化学发光显色并定量[1][2][3] |
| 动物实验 |
雄性裸鼠饲养于湿度和温度可控的无病原体环境中。在异种移植实验中，将肿瘤细胞注射到4周龄小鼠体内。小鼠侧腹部皮下注射活的A549、RKO和HeLa细胞（5 × 10⁶）。A549和RKO细胞异种移植小鼠立即随机分为两组。第一组（n = 10）作为对照组，仅注射溶剂。第二组（n = 10）每隔一天腹腔注射Apoptozole（4 mg/kg/天），持续两周。HeLa细胞异种移植小鼠立即随机分为四组。第一组（n = 10）为对照组，仅注射溶剂。第二组（n = 10）腹腔注射Apoptozole（4 mg/kg/天），持续两周。第三组（n = 10）小鼠腹腔注射阿霉素（15 mg/kg/天），持续两周。第四组（n = 10）小鼠腹腔注射阿霉素（15 mg/kg/天）和阿帕唑（4 mg/kg/天），持续两周。每隔三天，使用游标卡尺测量所有小鼠肿瘤的二维尺寸，以确定肿瘤体积。肿瘤体积的计算公式为：体积 = w × l²/2，其中 w 代表肿瘤最宽处的宽度，l 代表垂直于 w 的长度。绘制每只小鼠的平均肿瘤体积随时间变化的曲线[3]。
1. 异种移植肿瘤模型建立：将 5×10^6 HCT116 细胞悬浮于 Matrigel（与 PBS 1:1 比例）中，皮下注射到雌性 BALB/c nu/nu 小鼠（6-8 周龄，18-22 克）的右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：溶剂对照组（0.5% DMSO + 5% Cremophor EL + 94.5% 生理盐水）、Apoptozole 25 mg/kg 组和 Apoptozole 50 mg/kg 组 [3] 2. 给药：将 Apoptozole 溶于 DMSO，用 Cremophor EL 和生理盐水稀释至最终浓度，每日灌胃一次，连续 21 天。溶剂对照组给予等体积的溶剂，但不添加药物 [3] 3. 肿瘤和体重测量：每 3 天用游标卡尺测量肿瘤体积，计算公式为（长 × 宽²）/2。每日记录体重。实验结束时，采用颈椎脱臼法处死小鼠，切除肿瘤，称重，并置于-80℃保存，用于Western blot分析。同时，将肿瘤组织固定于4%多聚甲醛溶液中，用于TUNEL和免疫组化染色[3] 4. TUNEL检测：将石蜡包埋的肿瘤切片（5 μm）脱蜡、复水，并按照试剂盒说明书进行TUNEL染色。在荧光显微镜下观察凋亡细胞，并计数每个切片中五个随机视野内的TUNEL阳性细胞数量[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 急性毒性：在小鼠中，单次口服剂量高达 200 mg/kg 的 Apoptozole，在 14 天的观察期内未引起显著死亡或明显的毒性症状（例如，嗜睡、腹泻、体重减轻）[3]
2. 慢性毒性：连续 21 天口服 Apoptozole 的小鼠，与对照组相比，肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）均未见显著变化。主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺）的组织病理学分析未发现异常病变[3] 3. 血浆蛋白结合率：通过平衡透析法测定，Apoptozole 在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 92%[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
1. Apoptozole是一种小分子抑制剂，可特异性结合HSP70和Hsc70的ATPase结构域，抑制其ATPase活性和分子伴侣功能。其作用机制包括破坏HSP70与底物蛋白的相互作用，促进线粒体外膜通透性增加，释放细胞色素c和Smac/DIABLO，并激活内源性凋亡途径[1][3]。
2. 该药物对癌细胞而非正常细胞表现出选择性的抗增殖和促凋亡作用，这可能归因于癌细胞高表达且其生存依赖于HSP70。它还能抑制 Hsc70 依赖的网格蛋白介导的内吞作用，提示其可能在调节细胞运输通路中发挥作用 [2][3] 3. Apoptozole 在临床前异种移植模型中显示出显著的抗肿瘤活性，且毒性较低，支持其作为多种癌症靶向治疗药物的潜力。其对 HSP70/Hsc70 的高选择性最大限度地减少了脱靶效应，使其成为进一步临床开发的理想候选药物 [3] |
| 分子式 |
C33H25F6N3O3
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|---|---|---|
| 分子量 |
625.56
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| 精确质量 |
625.18
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| 元素分析 |
C, 63.36; H, 4.03; F, 18.22; N, 6.72; O, 7.67
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| CAS号 |
1054543-47-3
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
24894064
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
8.786
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| tPSA |
79.37
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
10
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
45
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| 分子复杂度/Complexity |
936
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC(C1C([H])=C(C(F)(F)F)C([H])=C(C=1[H])C1=NC(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])OC([H])([H])[H])=C(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])OC([H])([H])[H])N1C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(C(N([H])[H])=O)=C([H])C=1[H])(F)F
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| InChi Key |
ZIMMTPFXOMAJTQ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C33H25F6N3O3/c1-44-26-11-7-20(8-12-26)28-29(21-9-13-27(45-2)14-10-21)42(18-19-3-5-22(6-4-19)30(40)43)31(41-28)23-15-24(32(34,35)36)17-25(16-23)33(37,38)39/h3-17H,18H2,1-2H3,(H2,40,43)
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| 化学名 |
4-[[2-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]-4,5-bis(4-methoxyphenyl)imidazol-1-yl]methyl]benzamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.00 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.00 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.00 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5986 mL | 7.9928 mL | 15.9857 mL | |
| 5 mM | 0.3197 mL | 1.5986 mL | 3.1971 mL | |
| 10 mM | 0.1599 mL | 0.7993 mL | 1.5986 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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BX-2819
Flavokawain 1i (DiNap)
HSP90-IN-9
HSP90-IN-10
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