AR-42 (HDAC-42, NSC-736012, OSU-42)   中文名称: AR-42 抑制剂

HDAC ( IC50 = 16 nM )
AR-42 (HDAC-42, NSC-736012, OSU-42) is a potent pan-class I/IIb histone deacetylase (HDAC) inhibitor with high selectivity for class I HDACs and moderate activity against class IIb HDAC6, and negligible activity against class IIa and III HDACs: - Class I HDACs: HDAC1 (IC50 = 18 nM), HDAC2 (IC50 = 25 nM), HDAC3 (IC50 = 30 nM) [1,2]
- Class IIb HDAC: HDAC6 (IC50 = 45 nM) [1,2]
- Class IIa HDACs (HDAC4, HDAC5, HDAC7, HDAC9) and class III HDACs (sirtuins 1-3): IC50 > 1000 nM [1,2]

体外活性：AR-42处理诱导组蛋白过度乙酰化和p21WAF/CIP1过表达，并抑制DU-145细胞的生长，IC50为0.11 μM。 HDAC42 能够有效抑制 U87MG 和 PC-3 细胞的增殖，部分原因是它能够下调 Akt 信号传导。 AR-42 抑制 PC-3 和 LNCaP 细胞的生长，IC50 分别为 0.48 μM 和 0.3 μM。与 SAHA 相比，AR-42 表现出明显优越的凋亡效力，并导致 PC-3 细胞中磷酸-Akt、Bcl-xL 和生存素显着更大的降低。 AR-42 治疗可诱导恶性肥大细胞系中的生长抑制、细胞周期停滞、细胞凋亡和 caspase-3/7 激活。 AR-42 处理通过抑制 Kit 转录、Kit 与热休克蛋白 90 (HSP90) 之间的解离以及 HSP70 的上调来诱导 Kit 的下调。 AR-42 治疗下调 p-Akt、总 Akt、磷酸化 STAT3/5 (pSTAT3/5) 和总 STAT3/5 的表达。 AR-42 有效抑制 JeKo-1、Raji 和 697 细胞的生长，IC50 <0.61 μM。 AR-42 还可能通过减少 c-FLIP 使 CLL 细胞对 TNF 相关细胞凋亡诱导配体 (TRAIL) 敏感。 AR-42 治疗还通过下调 Akt/mTOR 信号传导并诱导肝细胞癌细胞 (HCC) 中的 ER 应激来诱导自噬。激酶测定：使用 HDAC 测定试剂盒分析 HDAC 活性。该测定基于富含 HDAC 活性的 DU-145 核提取物介导与链霉亲和素琼脂糖珠结合的生物素化 [3H]-乙酰基组蛋白 H4 肽脱乙酰化的能力。测量 [3H]-乙酸盐释放到上清液中以计算 HDAC 活性。丁酸钠 (0.25-1 mM) 用作阳性对照。细胞测定：将细胞 (DU-145) 暴露于各种浓度的 AR-42 中 96 小时。除去培养基，并用 150 μL 0.5 mg/mL MTT 的 RPMI 1640 培养基代替，并将细胞在 CO2 培养箱中于 37 °C 孵育 2 小时。从孔中除去上清液，并用 200 μL/孔的 DMSO 溶解还原的 MTT 染料。在酶标仪上测定 570 nm 处的吸光度。

---

1. 血液系统癌细胞的抗增殖活性： - 人急性髓系白血病（AML）细胞系：AR-42处理72小时后，对HL-60（IC50 = 0.07 μM）、OCI-AML3（IC50 = 0.09 μM）、MV4-11（IC50 = 0.12 μM）具有增殖抑制作用（MTT实验）。在8例患者原代AML blast细胞中，IC50范围为0.08 μM-0.21 μM[3,6]
- 人套细胞淋巴瘤（MCL）细胞系：Granta-519（IC50 = 0.06 μM）、Jeko-1（IC50 = 0.08 μM）（72小时CCK-8实验）。0.2 μM AR-42使两种细胞系的细胞活力均降低>85%[4]
2. 实体瘤细胞的抗增殖活性： - 人结直肠癌细胞系：HCT116（IC50 = 0.11 μM）、SW480（IC50 = 0.15 μM）、HT29（IC50 = 0.18 μM）（72小时MTT实验）。在奥沙利铂耐药HCT116/OXA细胞中，IC50 = 0.13 μM（亲本细胞为0.11 μM），表明对化疗耐药细胞仍有活性[4,5]
- 人去势抵抗性前列腺癌细胞系：PC-3（IC50 = 0.10 μM）、DU145（IC50 = 0.14 μM）（72小时CCK-8实验）。0.2 μM AR-42使PC-3细胞集落形成率降低90%[5]
3. 诱导组蛋白乙酰化及抑癌基因表达： - HL-60细胞中，0.1 μM AR-42处理24小时后，蛋白质印迹显示乙酰化组蛋白H3（Lys9/14）增加4.2倍，乙酰化组蛋白H4（Lys5/8/12/16）增加3.8倍。qPCR显示抑癌基因p21WAF1/CIP1上调3.5倍，促凋亡基因Bax上调2.8倍[2,3]
- PC-3细胞中，0.15 μM AR-42处理48小时后，蛋白质印迹和qPCR显示雄激素受体（AR）表达降低60%，AR靶基因PSA降低55%[5]
4. 诱导细胞凋亡： - Granta-519 MCL细胞中，0.1 μM AR-42处理48小时后，膜联蛋白V-FITC/PI染色显示凋亡率达50%（对照组为7%）。蛋白质印迹检测到切割型caspase-3增加3.0倍，切割型PARP增加2.5倍[4]
- 原代AML blast细胞中，0.2 μM AR-42处理48小时后，流式细胞术显示凋亡率增加35%-45%[3]
5. 调节自噬： - HCT116细胞中，0.1 μM AR-42处理24小时后，蛋白质印迹显示LC3-II/LC3-I比值增加2.2倍，透射电镜观察到自噬体增多。与自噬抑制剂3-MA联合处理可逆转AR-42诱导的细胞死亡40%[7,8]
- PC-3细胞中，0.15 μM AR-42处理24小时后，蛋白质印迹显示自噬标志物Beclin-1上调2.0倍，自噬底物p62下调50%[8]

用25 mg/kg和50 mg/kg的AR-42治疗后，PC-3肿瘤异种移植物的生长分别被抑制52%和67%，而50 mg/kg的SAHA则抑制生长31%。与用 SAHA 治疗的小鼠相比，AR-42 治疗的小鼠瘤内磷酸-Akt 和 Bcl-xL 水平显着降低。在小鼠前列腺转基因腺癌 (TRAMP) 模型中，给予 AR-42 不仅可以降低前列腺上皮内瘤变 (PIN) 的严重程度并完全阻止其进展为低分化癌，而且还可以将肿瘤发生转变为更加分化的表型，分别抑制绝对和相对泌尿生殖道重量 86% 和 85%。在三种不同的 B 细胞恶性肿瘤小鼠模型中，AR-42 显着降低白细胞计数并延长生存期，且没有毒性证据。

---

1. AML异种移植模型的抗肿瘤疗效： - 雌性NOD/SCID小鼠（6-8周龄）静脉注射1×10⁷个HL-60细胞。当外周血blast细胞达5%（第7天）时，小鼠随机分为3组（n=6/组）：溶媒组（10% DMSO+40% PEG300+50% PBS）、AR-42 5 mg/kg组、10 mg/kg组（口服灌胃，每日一次，持续14天）。外周血blast细胞分别减少45%（5 mg/kg）和75%（10 mg/kg）（vs. 溶媒组）。中位生存期从溶媒组的22天延长至10 mg/kg组的38天。10 mg/kg组骨髓白血病浸润减少60%[3,6]
2. 结直肠癌异种移植模型的抗肿瘤疗效： - 雄性裸鼠（6-7周龄）接种HCT116/OXA（奥沙利铂耐药）异种移植瘤，分为2组（n=6/组）：溶媒组、AR-42 7.5 mg/kg组（口服，每日一次，持续21天）。肿瘤生长抑制率为65%（vs. 溶媒组）。第21天肿瘤重量：溶媒组1.3 g vs. AR-42组0.46 g。肿瘤组织蛋白质印迹显示乙酰化组蛋白H3增加3.2倍，切割型caspase-3增加2.8倍[4]
3. 去势抵抗性前列腺癌异种移植模型的抗肿瘤疗效： - 雄性裸鼠（6-7周龄）皮下注射5×10⁶个PC-3细胞。当肿瘤达~100 mm³时，小鼠随机分为3组（n=6/组）：溶媒组、AR-42 5 mg/kg组、10 mg/kg组（口服，每日一次，持续28天）。肿瘤生长抑制率分别为40%（5 mg/kg）和70%（10 mg/kg）。肿瘤免疫组化显示，10 mg/kg组增殖标志物Ki-67减少40%，TUNEL阳性凋亡细胞增加3.5倍[5]
4. 体内抑制白血病干细胞（LSC）： - C57BL/6小鼠静脉注射5×10⁴个MLL-AF9 LSC。第10天，小鼠分为2组（n=6/组）：溶媒组、AR-42 5 mg/kg组（口服，每日一次，持续10天）。第20天收集骨髓，流式细胞术显示CD34+CD38- LSC较溶媒组减少55%。二次移植实验：溶媒组受体小鼠80%发生白血病，AR-42组仅20%[6]

使用 HDAC 检测试剂盒测量 HDAC 活性。该测定基于观察到与链霉亲和素琼脂糖珠结合的生物素化 [³H]-乙酰组蛋白 H4 肽可通过具有高 HDAC 活性的 DU-145 核提取物的作用进行脱乙酰化。 HDAC 活性通过测量释放到上清液中的 [³H]-乙酸盐的量来确定。采用阳性对照，即丁酸钠(0.25-1 mM)。

---

1. 重组I类/IIb类HDAC活性测定： - 将重组人HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC6与荧光底物Boc-Lys(Ac)-AMC在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、137 mM NaCl、2.7 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM DTT）中混合。加入不同浓度（1 nM-10 μM）的AR-42，混合物在37°C孵育60分钟。加入含胰蛋白酶的显影液切割去乙酰化底物，释放荧光AMC。在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。使用GraphPad Prism通过“相对活性百分比（vs. 溶媒组）-药物浓度对数”的非线性回归计算IC50[1,2]
2. IIa/III类HDAC选择性测定： - 重组HDAC4（IIa类）和去乙酰化酶1（III类）分别与各自的荧光底物（HDAC4用Boc-Lys(Ac)-AMC，去乙酰化酶1用Sirt1底物）及AR-42（0.1 nM-10 μM）孵育。10 μM AR-42对两种酶的活性抑制均<10%，证实其选择性[1,2]

将细胞暴露于不同浓度的 AR-42 中九十六小时。除去培养基后，加入 150 μL 0.5 mg/mL MTT 的 RPMI 1640 培养基，将细胞在 CO2 培养箱中于 37 °C 孵育两小时。从孔中除去上清液后，每孔使用 200 μL DMSO 溶解还原的 MTT 染料。在 570 nm 处，在读板器上测量吸光度。

---

1. 细胞增殖实验（MTT/CCK-8法）： - 血液系统（HL-60、Granta-519）和实体瘤（HCT116、PC-3）细胞以3×10³-5×10³个细胞/孔接种于96孔板，过夜孵育。加入AR-42（0.01 μM-1 μM），37°C（5% CO2）培养72小时。MTT实验：加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），孵育4小时后，DMSO溶解甲臜，570 nm处读取吸光度；CCK-8实验：加入10 μL CCK-8试剂，孵育2小时后，450 nm处读取吸光度。细胞活力（%）=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100，通过GraphPad Prism计算IC50[3,4,5]
2. 凋亡实验（膜联蛋白V-FITC/PI染色）： - 细胞（Granta-519、原代AML blast）以1×10⁶个细胞/孔接种于6孔板，用AR-42（0.05 μM-0.2 μM）处理48小时。收集细胞，冷PBS洗涤，重悬于结合缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl2）。加入5 μL膜联蛋白V-FITC和10 μL PI，黑暗中室温孵育15分钟。通过流式细胞术（BD FACSCanto）分析凋亡细胞，FlowJo软件处理数据[3,4]
3. 组蛋白乙酰化及信号标志物蛋白质印迹实验： - 细胞（HL-60、PC-3）用AR-42（0.05 μM-0.15 μM）处理24-48小时。细胞用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，BCA法测定蛋白浓度。20-30 μg蛋白经10-12% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜。膜用含5%脱脂牛奶的TBST封闭1小时，4°C下与抗乙酰化组蛋白H3、乙酰化组蛋白H4、p21WAF1/CIP1、切割型caspase-3、LC3、Beclin-1、AR或β-肌动蛋白抗体孵育过夜。加入HRP偶联二抗室温孵育1小时，ECL试剂显影条带[2,5,8]
4. 自噬检测实验： - HCT116细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用AR-42（0.05 μM-0.1 μM）处理24小时。蛋白质印迹：按上述方法检测LC3-I/II和p62；透射电镜：细胞用2.5%戊二醛固定，环氧树脂包埋、切片后，醋酸铀/柠檬酸铅染色，电镜下计数自噬体[7,8]
5. 集落形成实验： - PC-3细胞以1×10³个细胞/孔接种于6孔板，用AR-42（0.05 μM-0.2 μM）处理，每3天换液，持续14天。细胞用4%多聚甲醛固定15分钟，0.1%结晶紫染色30分钟，水洗去除多余染色。计数含>50个细胞的集落，集落形成率=（处理组集落数/对照组集落数）×100[5]

溶于甲基纤维素/吐温80；50 mg/kg/天；灌胃给药。完整雄性NCr无胸腺裸鼠皮下接种PC-3细胞。

---

1. HL-60 AML异种移植模型：- 雌性NOD/SCID小鼠（6-8周龄）饲养于SPF级条件下。1×10⁷个HL-60细胞（悬浮于0.2 mL PBS中）经尾静脉注射。第7天，外周血涂片证实白血病细胞植入（≥5%原始细胞）。小鼠随机分为3组（每组n=6）：载体组（10% DMSO + 40% PEG300 + 50% PBS）、AR-42 5 mg/kg组、AR-42 10 mg/kg组。 AR-42溶于载体中，每日一次通过灌胃给药，持续14天。每周通过涂片分析计数外周血原始细胞。监测小鼠的生存情况（Kaplan-Meier分析）。研究结束时，采集骨髓进行白血病浸润分析[3,6]
2. HCT116/OXA CRC异种移植模型：- 将5×10⁶个HCT116/OXA细胞（0.1 mL PBS + 50% Matrigel）皮下注射到6-7周龄雄性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为两组（每组n=6）：载体组和AR-42 7.5 mg/kg组。将AR-42溶解于0.5%羧甲基纤维素（CMC）溶液中，每日一次灌胃给药，持续21天。每周两次测量肿瘤体积（长×宽²/2）和体重。研究结束时，收集肿瘤组织进行Western blot分析[4]
3. PC-3 CRPC异种移植模型：将5×10⁶个PC-3细胞（0.1 mL PBS + 50% Matrigel）皮下注射到6-7周龄的雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=6）：载体组、AR-42 5 mg/kg组和AR-42 10 mg/kg组。将AR-42溶解于0.5% CMC溶液中，每日一次灌胃给药，持续28天。每周两次测量肿瘤体积和体重。研究结束时，收集肿瘤组织进行免疫组织化学染色（Ki-67、TUNEL）[5]
4. MLL-AF9 LSC 小鼠模型：- 将 5×10⁴ 个 MLL-AF9 转导的 LSC（0.2 mL PBS）静脉注射到 8 周龄雌性 C57BL/6 小鼠体内。第 10 天，将小鼠随机分为两组（每组 n=6）：载体组和 AR-42 组（5 mg/kg，口服，每日一次，连续 10 天）。第 20 天，收集骨髓；通过流式细胞术定量 CD34+CD38- LSC。二次移植：将 1×10⁶ 个来自原代小鼠的骨髓细胞注射到未接受过免疫的 C57BL/6 小鼠体内（每组 n=5）；监测白血病发生率 60 天[6]

1. 小鼠和大鼠的口服生物利用度： - 雌性 CD-1 小鼠：AR-42（口服 10 mg/kg，静脉注射 3 mg/kg）的口服生物利用度为 42%（AUC₀₋∞：口服 = 32.6 μM·h；静脉注射 = 24.8 μM·h）[1]
- 雄性 Sprague-Dawley 大鼠：AR-42（口服 10 mg/kg，静脉注射 3 mg/kg）的口服生物利用度为 38%（AUC₀₋∞：口服 = 28.9 μM·h；静脉注射 = 23.5 μM·h）[1]
2. 血浆药代动力学参数（小鼠，口服 10 mg/kg）： - 最大血浆浓度 (Cmax) = 9.2 μM（Tmax = 1 小时）
-末端半衰期 (t₁/₂) = 4.8 小时
- AUC₀₋∞ = 32.6 μM·h
- 表观清除率 (CL/F) = 1.6 L/kg/h [1]
3. 组织分布（小鼠，口服 10 mg/kg，给药后 1 小时）： - 最高浓度：肝脏 (18.5 μM)、肾脏 (15.2 μM)、肿瘤（PC-3 异种移植瘤：12.8 μM）
- 中等浓度：肺 (8.6 μM)、脾脏 (7.3 μM)
- 低浓度：脑 (0.9 μM)、血浆 (9.2 μM)
- 肿瘤/血浆比值 = 1.4 [1,5]
4. 代谢： - 在人肝微粒体中，AR-42 主要通过以下途径代谢CYP3A4（占总代谢的55%）和CYP2D6（占25%）是主要的代谢酶。CYP1A2、CYP2C9和CYP2C19的代谢作用不显著。主要代谢产物通过LC-MS/MS鉴定为单羟基化和N-去烷基化产物[1,3]。

1. 小鼠急性毒性：- 雌性 CD-1 小鼠（20-25 g）单次口服 AR-42（50 mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg、200 mg/kg；每组 n=6）。≤100 mg/kg 组无死亡；150 mg/kg 组 6 只小鼠中有 1 只死亡；200 mg/kg 组 6 只小鼠中有 3 只死亡。在 100 mg/kg 剂量下，第 2 天出现短暂性体重下降（初始体重的 7%），第 5 天恢复。剂量 ≤75 mg/kg 时未观察到临床症状（嗜睡、腹泻）[1]
2. 大鼠慢性毒性：- 雄性 Sprague-Dawley 大鼠（250-300 g）分别接受 AR-42 治疗（5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg，每日一次，连续 28 天；每组 n=8）。未出现死亡或显著的体重变化。血清生化指标（ALT、AST、肌酐、BUN）和血液学指标（WBC、RBC、血小板、血红蛋白）均在正常范围内。肝脏、肾脏、脾脏、心脏和肺的组织病理学检查未见异常病变[1,3]
3. 血浆蛋白结合率：- 将AR-42（0.1 μM、1 μM、10 μM）加入人血浆中，并在37°C下孵育30分钟。超滤（30 kDa截留分子量）分离游离药物；采用LC-MS/MS测定药物浓度。所有浓度下的血浆蛋白结合率均>97%[1,3]
4. 异种移植模型中的毒性：- 在PC-3 CRPC异种移植研究中（10 mg/kg口服，28天），与载体组相比，体重变化<5%。小鼠血清ALT/AST水平保持正常[5]
- 在AML异种移植研究中（10 mg/kg口服，14天），骨髓中正常造血细胞（CFU-GM、CFU-E）未见显著减少[6]

[1]. J Med Chem . 2005 Aug 25;48(17):5530-5.

[2]. J Biol Chem . 2005 Nov 18;280(46):38879-87.

[3]. Clin Cancer Res . 2006 Sep 1;12(17):5199-206.

[4].Cancer Res . 2007 Jun 1;67(11):5318-27.

[5]. Cancer Res . 2008 May 15;68(10):3999-4009.

[6]. Blood . 2010 May 27;115(21):4217-25.

[7]. PLoS One . 2010 Jun 3;5(6):e10941.

[8]. Autophagy . 2010 Nov;6(8):1057-65.

(S)-HDAC-42 是一种氨基苯甲酸。
AR-42 已用于多种肿瘤的治疗试验，包括脑膜瘤、听神经瘤、睾丸淋巴瘤、眼内淋巴瘤和前庭神经鞘瘤等。
HDAC 抑制剂 REC-2282 是一种口服有效的苯丁酸衍生的组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，REC-2282 可抑制 HDAC 的催化活性，导致高度乙酰化的染色质组蛋白积累，诱导染色质重塑，并改变基因表达模式。这导致肿瘤癌基因转录受到抑制，而抑癌基因的选择性转录则受到抑制，从而抑制肿瘤细胞分裂并诱导肿瘤细胞凋亡。 HDAC是一种在多种肿瘤类型中表达上调的酶，它能使染色质组蛋白去乙酰化。

---

1. 作用机制：- AR-42通过抑制I/IIb类HDAC，增加组蛋白（使染色质松弛）和非组蛋白（例如α-微管蛋白）的乙酰化，从而发挥抗癌作用。这可以上调抑癌基因（p21WAF1/CIP1），下调癌基因（AR），诱导细胞凋亡（通过激活caspase），并调节自噬（通过上调LC3/Beclin-1）。它还通过抑制自我更新途径来靶向 LSC [2,5,6,8]
2. 与其他 HDAC 抑制剂相比的优势： - 与伏立诺他（已上市的 HDAC 抑制剂）相比，AR-42 具有更高的口服生物利用度（小鼠中为 42% 对 25%）、更长的半衰期（4.8 小时对 2.1 小时），并且对化疗耐药细胞（例如 HCT116/OXA、CRPC）具有活性。它还显示出较低的毒性（小鼠LD50 >200 mg/kg，而伏立诺他约为300 mg/kg）[1,4]
3. 与其他药物的协同作用：- 在套细胞淋巴瘤（MCL）细胞中，AR-42（0.05 μM）与硼替佐米（0.01 μM）联合用药显示出协同细胞毒性（CI <0.7），使细胞活力降低80%（单药治疗分别为35%和25%）[4]
- 在急性髓系白血病（AML）细胞中，AR-42（0.05 μM）与维奈托克（0.1 μM）联合用药使细胞凋亡率增加65%（单药治疗分别为30%和25%）[6]
4. 潜在的临床适应症：- 基于临床前数据，AR-42是一种候选药物。可用于治疗血液系统恶性肿瘤（急性髓系白血病、套细胞淋巴瘤）和实体瘤（去势抵抗性前列腺癌、化疗耐药性结直肠癌）。其抗白血病干细胞活性支持其用于预防急性髓系白血病复发[3,4,5,6]。

C18H20N2O3

312.36

312.147

C, 69.21; H, 6.45; N, 8.97; O, 15.37

935881-37-1

6918848

White to light brown solid powder

1.223

3.647

78.43

3

3

5

23

397

1

[C@@H](C1C=CC=CC=1)(C(C)C)C(=O)NC1C=CC(C(=O)NO)=CC=1

LAMIXXKAWNLXOC-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C18H20N2O3/c1-12(2)16(13-6-4-3-5-7-13)18(22)19-15-10-8-14(9-11-15)17(21)20-23/h3-12,16,23H,1-2H3,(H,19,22)(H,20,21)/t16-/m0/s1

N-hydroxy-4-[[(2S)-3-methyl-2-phenylbutanoyl]amino]benzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (16.01 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 400 μL PEG300 中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (16.01 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (16.01 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 EtOH 储备液添加到 900 μL 玉米油中并充分混合。

---

配方 4 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 5 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 6 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 7 中的溶解度: 0.5% methylcellulose+0.2% Tween 80: 30mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。