Asaraldehyde (Asaronaldehyde)   中文名称: 细辛醛

COX-2
Asaraldehyde targets cyclooxygenase-2 (COX-2), an enzyme involved in the production of prostaglandins and other inflammatory mediators. It is a natural COX-2 inhibitor with an IC50 value of 100 µg/mL. It exhibits 17-fold selectivity for COX-2 over COX-1. By inhibiting COX-2, it reduces the production of pro-inflammatory prostaglandins. This mechanism underlies its anti-inflammatory activity.

阿司匹林醛（2,4,5-三甲氧基苯甲醛，简称2,4,5-TMBA）是一种天然存在的COX-2抑制剂，分离自胡萝卜（Daucus carota L.）种子。在100 μg/mL浓度下，其对环氧合酶II（COX-2）活性的抑制作用显著优于三种市售非甾体抗炎药（IC50值分别为180、2.52和2.06 μg/mL）。在3T3-L1脂肪细胞中，天然的环氧合酶-2抑制剂2,4,5-TMBA能够抑制脂肪生成并促进脂肪分解。研究表明，在100 μg/mL浓度下，存在于植物根、种子和叶片中的2,4,5-三甲氧基苯甲醛（2,4,5-TMBA）能够显著抑制环氧合酶-2（COX-2）的活性。鉴于COX-2与前脂肪细胞发育相关，本研究将小鼠3T3-L1细胞在100 μg/mL的2,4,5-TMBA存在下进行培养，分别在细胞完全分化期间和分化后进行，以检测该化合物对脂肪分解和脂肪生成的影响。结果发现，2,4,5-TMBA抑制了分化过程中脂滴的形成，这通过Red O染色和甘油三酯测定得到证实。此外，2,4,5-TMBA 可下调脂肪生成信号分子和转录因子的蛋白水平，包括 MAP 激酶激酶 (MEK)、细胞外信号调节激酶 (ERK)、CCAAT/增强子结合蛋白 (C/EBP)α、β 和 δ、过氧化物酶体增殖激活受体 (PPAR)γ、脂肪细胞决定和分化依赖因子 1 (ADD1) 以及脂质合成的限速酶乙酰辅酶 A 羧化酶 (ACC)。用 2,4,5-TMBA 处理完全发育的脂肪细胞 72 小时后，通过上调激素敏感性脂肪酶 (HSL) 和抑制脂滴包被蛋白 (perilipin A) 促进甘油三酯水解，从而显著减少脂质积累。用 100 μg/mL 的 2,4,5-TMBA 处理完全分化的 3T3-L1 脂肪细胞 24、48 或 72 小时，细胞活力分别下降 8.35%、15.54% 和 27.26%。在加入分化培养基前，用 100 μg/mL 的 2,4,5-TMBA 处理前体细胞 24 小时，可使前体细胞活力降低 26.46%[1]。其中最主要的成分是 2,4,5-三甲氧基苯甲醛 (TMBA)，它是一种 COX-2 抑制剂，在其天然宿主——金合欢木 (C. kanehirae) 木材及其培养液中均未检测到。在子实体中，2,4,5-三甲氧基苯甲醛（TMBA）是主要成分[2]。

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在共培养研究（分化期）中，100 μg/mL 的2,4,5-三甲氧基苯甲醛（阿沙醛）显著抑制了3T3-L1前脂肪细胞中磷酸化MEK和ERK1（但不抑制ERK2）的表达； JNK 和 p38MAPK 也受到抑制，但未达到统计学显著性[1]。
在分化过程中，它下调了转录因子 C/EBPβ、C/EBPδ、C/EBPα、PPARγ1、PPARγ2（对 PPARγ2 的影响不显著）和 ADD1 的蛋白水平[1]。
2,4,5-三甲氧基苯甲醛（阿沙醛） 在分化过程中显著抑制了甘油三酯的积累，抑制率达 27.64%（油红 O 染色和甘油三酯测定）[1]。
在分化过程中，它抑制了 COX-2 的表达；轻微下调了 perilipin A 的表达（不显著）；对丙酮酸脱氢酶 (PD)、丙酮酸羧化酶 (PC) 或柠檬酸合酶 (CS) 没有显著影响；但显著抑制了乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的表达[1]。
在完全分化的脂肪细胞中，用100 μg/mL处理72小时后，脂质积累减少了26.47%，甘油释放增加了22.91%，表明脂肪分解增强[1]。
它显著抑制了成熟脂肪细胞中脂肪滴蛋白A的表达，并上调了激素敏感性脂肪酶（HSL）的表达[1]。
处理使瘦素分泌减少了27.11%，也抑制了脂联素的分泌（无统计学意义）[1]。
体外实验表明，阿沙醛显著抑制COX-2活性，IC50值为100 µg/mL。它对COX-2的选择性比COX-1高17倍。在 100 µg/mL 的浓度下，该化合物对 COX-1 有轻微抑制作用（3.32%），但对 COX-2 有显著抑制作用（52.69%）。与三种市售非甾体抗炎药（IC50 值分别为 180、2.52 和 2.06 µg/mL）相比，该化合物显示出显著的抑制活性。这些体外研究证实了其作为选择性 COX-2 抑制剂的作用机制。

在体内，已对3T3-L1脂肪细胞中的阿沙醛进行了研究。作为一种天然的COX-2抑制剂，它具有潜在的抗炎作用。然而，标准综述中并未详细记录具体的体内研究结果。其抗炎活性已在体外得到证实，提示其可能具有体内疗效。

阿沙醛的非细胞酶活性测定通常涉及测量其对COX-2活性的抑制作用。这些测定使用纯化的COX-2酶和分光光度法或放射性法底物，在不同浓度的阿沙醛存在下测量酶促反应速率。通过测定半数抑制浓度（IC50）来评估化合物抑制COX-2的能力。此类测定对于表征其作为COX-2抑制剂的效力和选择性至关重要。

采用 MTT 法评估细胞活力。将 3T3-L1 前脂肪细胞或完全分化的脂肪细胞用 100 μg/mL 的 2,4,5-三甲氧基苯甲醛（阿沙醛）处理指定时间（24-72 小时或整个 8 天分化期），然后用 0.5 mg/mL 的 MTT 孵育 4 小时。将生成的甲臜溶解于 DMSO 中，并在 570 nm 处测定吸光度 [1]。
采用油红 O 染色法观察脂滴形成。将细胞用 10% 甲醛固定 1 小时，用油红 O 溶液（0.35% 异丙醇溶液，用水稀释）在室温下染色 15 分钟，洗涤后拍照。为进行定量分析，将染色的脂滴溶解于异丙醇中，并在 520 nm 处读取吸光度 [1]。
使用脂肪分解测定试剂盒（比色法）测定培养基中甘油的释放量 [1]。
Western 印迹：将细胞裂解于含有 1% Nonidet P-40、150 mM NaCl 和 50 mM Tris-HCl (pH 7.5) 的缓冲液中。裂解液先以 10,000×g 离心 30 分钟，再以 105,000×g 离心 60 分钟。对上清液蛋白进行定量，通过凝胶电泳分离，转移至PVDF膜，用5%脱脂奶粉（溶于TBST缓冲液）封闭，与一抗（抗PPARγ、抗HSL、抗C/EBPα/β/δ、抗aP2、抗MEK、抗JNK、抗p38MAPK、抗ERK、抗ACC、抗COX-2、抗perilipin A等）孵育3小时，然后与HRP标记的二抗在室温下孵育1小时。采用增强化学发光法检测信号[1]。
使用收集的培养基，通过针对每种脂肪因子的ELISA试剂盒测定瘦素和脂联素的分泌[1]。
使用多种细胞系进行体外细胞实验，以评估阿沙醛对前列腺素生成和炎症的影响。将细胞用该化合物处理后，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测前列腺素E2水平。还可以评估其对细胞活力和增殖的影响。这些实验对于在细胞水平上验证其作用机制至关重要。

标准综述中并未详尽记录阿沙醛的体内动物研究。作为一种具有COX-2抑制活性的天然产物，它具有抗炎应用潜力。然而，需要开展具体的体内疗效研究来验证其治疗潜力。

阿萨洛醛的分子量为196.20 g/mol，是一种小分子亲脂性化合物。作为一种天然产物，其药代动力学性质尚未得到充分研究。目前，它可作为研究化合物用于COX-2抑制的研究。

MTT 实验表明，用 100 μg/mL 的 2,4,5-三甲氧基苯甲醛（阿沙醛）处理完全分化的 3T3-L1 脂肪细胞 24、48 和 72 小时后，细胞活力分别下降了 8.35%、15.54% 和 27.26%。当在分化前用 100 μg/mL 的阿沙醛处理 24 小时后，前脂肪细胞活力下降了 26.46%。在 8 天的分化期内进行共培养，最终细胞活力下降了 25.82% [1]。
由于阿沙醛是一种天然产物和研究化合物，因此关于其全面的毒理学数据有限。它是一种选择性 COX-2 抑制剂，具有潜在的抗炎活性。与所有研究用化学品一样，在处理阿沙醛时应采取适当的安全预防措施。

[1]. 2,4,5-TMBA, a natural inhibitor of cyclooxygenase-2, suppresses adipogenesis and promotes lipolysis in 3T3-L1 adipocytes. J Agric Food Chem. 2012 Jul 25;60(29):7262-9.

[2]. Production of a COX-2 inhibitor, 2,4,5-trimethoxybenzaldehyde, with submerged cultured Antrodia camphorata. Lett Appl Microbiol. 2007 Apr;44(4):387-92.

2,4,5-三甲氧基苯甲醛是一种米色粉末。(NTP, 1992)
2,4,5-三甲氧基苯甲醛是一种羰基化合物。
据报道，2,4,5-三甲氧基苯甲醛存在于高良姜（Alpinia flabellata）、糙毛木霉（Mosla scabra）和其他具有相关数据的生物体中。

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2,4,5-三甲氧基苯甲醛（阿沙醛）（也称为2,4,5-三甲氧基苯甲醛，TMBA）是一种天然的环氧合酶-2 (COX-2) 抑制剂。它被鉴定为樟芝（一种药用真菌）子实体中最丰富的挥发性成分，通过气相色谱-质谱联用（GC-MS）分析，其峰面积为21.07% [2]。在樟芝的液体培养液和肉桂（Cinnamomum kanehirae）的木材中未检测到该成分。在培养基中添加香草醛（1 g/L）或酸消化的 C. kanehirae 木屑，4 周后分别产生了 3.32 mg/L 和 2.60 mg/L 的 2,4,5-三甲氧基苯甲醛（阿沙罗醛），表明该化合物来源于木质素降解产物或以香草醛为前体 [2]。在子实体中，还检测到了其他相关化合物，例如 1,2,3,4-四甲氧基苯和 3,4,5-三甲氧基苯甲酸甲酯 [2]。樟芝子实体中存在这种 COX-2 抑制剂，与该蘑菇的传统抗炎和抗癌用途相符 [2]。
阿沙罗醛（阿沙罗醛，2,4,5-三甲氧基苯甲醛）是一种从胡萝卜种子中分离得到的天然 COX-2 抑制剂。阿沙罗醛能显著抑制COX-2活性，IC50值为100 µg/mL，且对COX-2的选择性比COX-1高17倍。阿沙罗醛并非获批药物，仅作为研究化合物用于研究COX-2抑制和炎症反应。

C10H12O4

196.2

196.073

4460-86-0

20525

White to off-white solid powder

1.1±0.1 g/cm3

334.7±37.0 °C at 760 mmHg

112-114 °C(lit.)

149.0±26.5 °C

0.0±0.7 mmHg at 25°C

1.525

1.62

44.76

0

4

4

14

183

0

IAJBQAYHSQIQRE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C10H12O4/c1-12-8-5-10(14-3)9(13-2)4-7(8)6-11/h4-6H,1-3H3

2,4,5-trimethoxybenzaldehyde

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (19.11 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 37.5 mg/mL的澄清EtOH储备液加入到400 μL PEG300中并混合均匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (19.11 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 37.5 mg/mL 澄清乙醇储备液添加到 900 μL 玉米油中并充分混合。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.74 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。