Asunaprevir   中文名称: 阿那匹韦

HCV NS3 protease(IC50≈0.2 nM-3.5 nM)
The target of Asunaprevir is hepatitis C virus (HCV) NS3/4A protease complex. It has a Ki value of 0.4 nM against recombinant enzyme of HCV genotype 1a (H77) and 0.24 nM against genotype 1b (J4L6S)[2]
The target of Asunaprevir is HCV NS3 protease[3]
The target of Asunaprevir is HCV NS3/4A protease complex. It has a Ki value of 0.4 nM against recombinant enzyme of HCV genotype 1a (H77) and 0.24 nM against genotype 1b (J4L6S)[4]
The target of Asunaprevir is HCV NS3 protease[5]

体外活性：Asunaprevir (ASV) 抑制基因型 1a（H77 株）和基因型 1b（J4L6S 株）的 NS3 蛋白水解活性，IC50 分别为 0.7 和 0.3 nM。 ASV 针对编码代表基因型 1a、1b 和 4a 的 NS3 蛋白酶结构域的复制子的 EC50 范围为 1.2 至 4.0 nM。使用浓度为 EC50 值的 10 倍和 30 倍（最终浓度分别为 50 或 150 nM）的 asunaprevir 将复制子细胞维持在选择压力下。对于基因型 1b 抗性选择，复制子细胞维持在 EC50 值 10 或 30 倍（最终浓度分别为 30 或 90 nM）的 asunaprevir 存在下。 Asunaprevir 以单剂量或多剂量 200 至 600 mg 每日两次给药，通常具有良好的耐受性，可在慢性感染基因型 1 HCV 的受试者中实现 HCV RNA 水平的快速大幅降低。激酶测定：Asunaprevir (ASV) 抑制基因型 1a（H77 菌株）和基因型 1b（J4L6S 菌株）的 NS3 蛋白水解活性，IC50 分别为 0.7 和 0.3 nM。 ASV 针对编码代表基因型 1a、1b 和 4a 的 NS3 蛋白酶结构域的复制子的 EC50 范围为 1.2 至 4.0 nM。细胞测定：细胞毒性通过将细胞（3,000 至 10,000 个细胞/孔）与连续稀释的测试化合物或 DMSO 一起孵育 5 天（MT-2 细胞）或 4 天（所有其他细胞类型）来确定。使用针对 MT-2 的 MTS 测定或针对 HEK-293、HuH-7、HepG2 和 MRC5 细胞的 Cell-Titer Blue 试剂测定来定量细胞活力，并计算 50% 细胞毒性浓度 (CC50)。对于 HCV 和 BVDV 复制子测定，CC50 是从随后用于确定 EC50 的相同孔中确定的。

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1. 激活先天免疫信号通路：阿舒那韦（Asunaprevir）（1、10、100 nM）以剂量依赖性方式激活Huh 7.5.1细胞中ISRE和IFN-β启动子荧光素酶活性。它可增加STAT1、STAT2和IRF3的表达及磷酸化水平，上调下游干扰素刺激基因（ISG）如MxA和ISG-15的表达，激活JAK-STAT、MAVS和TRIF信号通路[1]
2. 抑制病毒复制：阿舒那韦（Asunaprevir）（1、10、100、250、500 nM）降低Huh 7.5.1和HepG2细胞中登革热病毒2型（DENV-2）NS3的RNA和蛋白水平；降低JFH-1 HCV感染的Huh 7.5.1细胞中HCV RNA水平，抑制HCV和DENV病毒产生。在MAVS敲低细胞中，其抗病毒作用减弱，表明依赖MAVS介导的先天免疫[1]
3. 不抑制登革热病毒蛋白酶：转染Flag-DV2 NS2B3的Huh 7.5.1细胞经阿舒那韦（Asunaprevir）处理后，NS3从NS2B3的加工过程未受影响，表明其不抑制DENV NS2B3蛋白酶活性[1]
1. 抑制HCV蛋白酶活性：阿舒那韦（Asunaprevir）竞争性结合HCV NS3/4A蛋白酶复合物，对GB病毒-B NS3蛋白酶及人丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶无显著活性[2]
2. 抗HCV复制子活性：抑制HCV 1型和4型复制子复制，EC₅₀为1-4 nM；对2型和3型复制子活性较弱（EC₅₀：67-1162 nM）；对其他RNA病毒无活性（EC₅₀ > 12 μM）[2]
3. 联合用药活性：与α-干扰素、利巴韦林、NS5A抑制剂或NS5B抑制剂联合使用时，表现出相加或协同活性[2]
阿舒那韦（Asunaprevir）与NS5A抑制剂达卡他韦或NS5B抑制剂BMS-791325联合使用时，对HCV复制子的抑制表现出相加-协同效应；三联联合治疗相比双联治疗，协同作用增强且耐药发生率降低[3]
1. 抑制HCV蛋白酶活性：阿舒那韦（Asunaprevir）竞争性结合HCV NS3/4A蛋白酶复合物，对GB病毒-B NS3蛋白酶及人丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶无显著活性[4]
2. 抗HCV复制子活性：抑制HCV 1型和4型复制子复制，EC₅₀为1-4 nM；对2型和3型复制子活性较弱（EC₅₀：67-1162 nM）；对其他RNA病毒无活性（EC₅₀ > 12 μM）[4]
3. 联合用药活性：与α-干扰素、利巴韦林、NS5A抑制剂或NS5B抑制剂联合使用时，表现出相加或协同活性[4]
1. HCV复制子耐药性分析：1a型HCV复制子中，NS3蛋白酶主要突变位点R155K、D168G、I170T可产生5-21倍耐药性；1b型中，D168位点突变（D168A/G/H/V/Y）可产生16-280倍耐药性，且复制能力受损[5]
2. 患者来源变异株的敏感性：基线NS3-Q80K多态性在酶学实验中不显著影响对阿舒那韦（Asunaprevir）的敏感性[5]
3. 交叉敏感性：对阿舒那韦（Asunaprevir）耐药的复制子仍对NS5A抑制剂敏感[5]

几种动物体内的血浆和组织暴露表明，Asunaprevir/ASV显示出嗜肝倾向（不同物种的肝脏与血浆比率为40至359倍）。给药24小时后，所有受试物种的肝脏暴露量均≥HCV基因型-1复制子观察到的抑制剂EC（50）的110倍。基于这些病毒学和暴露特性，ASV有望与其他抗HCV药物联合治疗HCV感染患者。[4]

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Asunaprevir（ASV，3-15 mg/kg，口服）在多种动物中表现出亲肝倾向（不同物种的肝脏与血浆比率范围为 40 至 359 倍）。给药后 24 小时，所有测试物种的肝脏暴露量均高于 HCV 基因型 1 复制子观察到的抑制剂 EC50 的 110 倍以上。

萤光素酶测定[1]
为了监测由ISRE引导的IFN信号传导，将表达萤火虫荧光素酶的质粒pISRE-luc（500 ng/孔）和表达肾肾荧光素酶作为内部对照的pRL-TK（50 ng/孔）共转染到Huh 7.5.1细胞中（1×105）。为了监测IFN-β启动子信号传导，使用表达萤火虫荧光素酶的pGL-4 IFNβ-Luc（pIFNβ/FLuc）（500 ng/孔）和表达肾荧光素酶（Renilla荧光素酶）的pRL-TK（50 ng/孔，Chang等人，20062009）作为内部对照。按照制造商的方案，用Lipofectamine 2000转染试剂转染Huh 7.5.1细胞。简而言之，用含有质粒DNA的DNA沉淀转染在12孔板中培养的细胞（数量如所示，并已由载体对照调整为与实验组样品相同）。转染后5小时，用培养基补充细胞，然后孵育不同时间点。通过Promega双荧光素酶报告检测系统评估相对荧光素酶活性。

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基于酶的选择性测定。[2]
为了评估体外选择性，对化合物进行了GBV-B NS3/4A蛋白酶、人中性粒细胞弹性蛋白酶、猪胰腺弹性酶、人α-胰凝乳蛋白酶、人组织蛋白酶A和人肝组织蛋白酶B的复筛。化合物在10%二甲亚砜（DMSO）的测定缓冲液中稀释。如上所述，GBV-B NS3/4A蛋白酶（0.3 nM）在基于FRET的测定中取代了HCV-NS3/4A蛋白酶。所有其他测定均在96孔板中用1%DMSO进行，并在Spectramax平板分光光度计上测量405nm下的连续底物水解。 人中性粒细胞弹性蛋白酶、猪胰腺弹性蛋白酶和人胰腺α-胰凝乳蛋白酶反应混合物分别含有50 mM Tris-HCl（pH 8.0）、50 mM NaCl、0.1 mM EDTA、0.05%吐温20和20 nM人弹性蛋白酶，25 nM猪弹性蛋白酶或1 nM胰凝乳蛋白酶。通过加入底物（弹性蛋白酶、5μM琥珀酰-APV-氨基-4-甲基香豆素（AMC））引发反应；胰凝乳蛋白酶、5μM LLVY-AMC）并在360nm的激发波长（Ex）和480nm的发射波长（Em）下进行荧光监测。组织蛋白酶A测定按照制造商的说明进行，以（7-甲氧基香豆素-4-基）乙酰基RPPGFSAFK（二硝基苯基）-OH为底物；在565/580nm的Ex/Em下监测反应。组织蛋白酶B测定混合物含有50 mM乙酸钠（NaOAc）（pH 5.5）、1 mM三（2-羧乙基）膦、5 nM组织蛋白酶B和2μM Z-FR-AMC作为底物，在360/460 nM的Ex/Em下监测反应。因子XA测定混合物含有100 mM NaPO4（pH 7.5）、0.5%聚乙二醇（PEG）8000、200 mM NaCl、1 nM人因子XA和400μM S-2222作为底物。因子XIA测定混合物含有50 mM HEPES（pH 7.5）、0.1%PEG-8000、5 mM KCl、145 mM NaCl、0.14 nM人因子XIA和250μM S-2366作为底物。因子VIIA测定混合物含有50 mM HEPES（pH 7.5）、150 mM NaCl、5 mM CaCl2、0.1%PEG-8000、1.8 nM因子VIIA 和1 mM S-2288 作为底物。激肽释放酶测定混合物含有50 mM Tris（pH 7.5）、100 mM NaCl、0.5%PEG-8000、0.2 nM激肽释放肽（酶研究实验室）和400μM S-2302 作为底物。凝血酶测定混合物含有100 mM磷酸钠（pH 7.5）、200 mM NaCl、0.5%PEG-8000、0.2 nM凝血酶和200μM S-2366 作为底物。胰蛋白酶测定混合物含有100 mM NaPO4（pH 7.5）、200 mM NaCl、0.5%PEG-8000、0.332 nM胰蛋白酶和200μM S-2222作为底物。

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Asunaprevir (ASV) 抑制基因型 1a（H77 菌株）和基因型 1b（J4L6S 菌株）的 NS3 蛋白水解活性，IC50 分别为 0.7 和 0.3 nM。 ASV 针对编码代表基因型 1a、1b 和 4a 的 NS3 蛋白酶结构域的复制子的 EC50 范围为 1.2 至 4.0 nM。

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1. HCV NS3/4A蛋白酶抑制实验：制备含重组HCV NS3/4A蛋白酶（1a型H77或1b型J4L6S）、荧光底物和不同浓度阿舒那韦（Asunaprevir）的反应体系，在适宜温度下孵育，通过检测荧光变化速率反映蛋白酶活性；利用Lineweaver-Burk图和不同药物浓度下的表观Km值计算Ki值[2]
2. 选择性实验：采用类似蛋白酶抑制实验方法，对GB病毒-B NS3蛋白酶及人丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶面板进行检测，评估阿舒那韦（Asunaprevir）的选择性[2]
1. HCV NS3/4A蛋白酶抑制实验：制备含重组HCV NS3/4A蛋白酶（1a型H77或1b型J4L6S）、荧光底物和不同浓度阿舒那韦（Asunaprevir）的反应体系，在适宜温度下孵育，通过检测荧光变化速率反映蛋白酶活性；利用Lineweaver-Burk图和不同药物浓度下的表观Km值计算Ki值[4]
2. 选择性实验：采用类似蛋白酶抑制实验方法，对GB病毒-B NS3蛋白酶及人丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶面板进行检测，评估阿舒那韦（Asunaprevir）的选择性[4]
患者来源变异株酶学实验：从HCV 1a/1b型感染患者中分离NS3蛋白酶序列（含Q80或K80多态性），表达重组蛋白酶，与阿舒那韦（Asunaprevir）进行抑制实验，比较敏感性差异[5]

细胞培养病毒学检测。[2]
对于含有RLuc报告子的HCV复制子，如前所述测定化合物抗病毒活性（50%有效浓度[EC50]）。对于缺乏报告基因的复制子，如前所述，使用FRET标记的肽底物（10μM）测量活性。如前所述进行BVDV测定（36），不同之处在于孵育保持4天。
通过与一系列稀释的化合物孵育来确定HIV、HRV2和HCoV的抗病毒敏感性。对于表达RLuc的重组HIVs，在感染后5天使用双荧光素酶试剂盒通过荧光素酶测定评估抗病毒活性。将稀释的被动裂解溶液与萤光素酶测定底物和Stop&Glo底物（2:1:1的比例）预混合。向每个抽吸的样品孔中加入40μl混合物，并立即在Wallac TriLux上测量萤光素酶活性。为了测定抗HRV2和HCoV OC43的活性，将化合物和病毒（感染多样性，0.1）与细胞一起孵育96小时，并将细胞保护用作病毒产生的衡量标准。对于细胞保护试验，向每个孔中加入17μl cell Titer Blue试剂。然后将板在室温下孵育2小时，然后使用Spectramax Gemini EM仪器测量荧光，将Ex/EM设置为530/580nm。
细胞毒性是通过用连续稀释的测试化合物或DMSO孵育细胞（3000至10000个细胞/孔）5天（MT-2细胞）或4天（所有其他细胞类型）来确定的。使用MT-2的MTS测定法或HEK-293、HuH-7、HepG2和MRC5细胞的Cell Titer Blue试剂测定法定量细胞存活率，并计算50%的细胞毒性浓度（CC50s）。对于HCV和BVDV复制子检测，CC50是从后来用于确定EC50的相同孔中确定的。

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1. 荧光素酶报告基因实验：Huh 7.5.1细胞共转染pISRE-luc（或pIFNβ/FLuc）和pRL-TK质粒，48小时后用1-100 nM 阿舒那韦（Asunaprevir）处理3-48小时；采用双荧光素酶检测系统测定萤火虫和海肾荧光素酶活性，评估ISRE和IFN-β启动子活性[1]
2. 免疫印迹实验：0.1-50 nM 阿舒那韦（Asunaprevir）处理Huh 7.5.1细胞48小时，裂解细胞后经SDS-PAGE分离蛋白，转移至PVDF膜，用抗STAT1、磷酸化STAT1、STAT2、磷酸化STAT2、MAVS、TRIF、IRF3、磷酸化IRF3、MxA、ISG-15、HCV核心蛋白、HCV NS3、DENV-2 NS3及β-肌动蛋白抗体进行杂交，ECL试剂盒检测信号并进行密度分析[1]
3. 实时定量PCR：Huh 7.5.1或HepG2细胞感染DENV-2或JFH-1 HCV，阿舒那韦（Asunaprevir）处理24小时后提取总RNA，逆转录为cDNA，用DENV-2、HCV特异性引物及内参基因HPRT引物进行qPCR，定量病毒RNA水平[1]
4. siRNA敲低实验：Huh 7.5.1细胞转染MAVS或TRIF siRNA（或阴性对照siRNA）48小时，阿舒那韦（Asunaprevir）处理24小时后，通过免疫印迹或qPCR评估MAVS/TRIF在抗病毒活性中的作用[1]
5. 免疫荧光实验：收集阿舒那韦（Asunaprevir）处理的DENV/HCV感染Huh 7.5.1细胞上清液，感染 naive Huh 7.5.1细胞48小时；固定细胞后，用抗DENV-NS3或抗HCV核心蛋白抗体及DAPI染色，观察荧光信号评估病毒产生情况[1]
6. DENV NS2B3蛋白酶活性实验：Huh 7.5.1细胞转染pcDNA3.1 Flag-DV2 NS2B3（或蛋白酶失活突变体）24小时，阿舒那韦（Asunaprevir）处理24小时后，免疫印迹检测NS3表达，评估蛋白酶活性[1]
1. HCV复制子抑制实验：HCV复制子细胞（1-4型）培养于含系列浓度阿舒那韦（Asunaprevir）的培养基中，孵育特定时间后，检测HCV RNA水平或报告基因活性，计算EC₅₀值[2]
2. 联合用药实验：阿舒那韦（Asunaprevir）与α-干扰素、利巴韦林、NS5A抑制剂或NS5B抑制剂联合处理HCV复制子细胞，采用适宜方法评估联合效应，判断相加或协同活性[2]
3. 选择性实验：12 μM以下浓度阿舒那韦（Asunaprevir）处理多种RNA病毒感染细胞，检测病毒复制情况评估选择性[2]
1. HCV复制子联合实验：1b型HCV复制子细胞用阿舒那韦（Asunaprevir）（NS3抑制剂）与达卡他韦（NS5A抑制剂）或BMS-791325（NS5B抑制剂）以5×、10×、30× EC₅₀浓度联合处理，孵育4周后结晶紫染色观察克隆，评估复制子清除效果[3]
2. 耐药性筛选实验：复制子细胞经抑制剂双联或三联联合处理筛选耐药克隆，分析NS3、NS5A或NS5B基因的基因型变化[3]
1. HCV复制子抑制实验：HCV复制子细胞（1-4型）培养于含系列浓度阿舒那韦（Asunaprevir）的培养基中，孵育特定时间后，检测HCV RNA水平或报告基因活性，计算EC₅₀值[4]
2. 联合用药实验：阿舒那韦（Asunaprevir）与α-干扰素、利巴韦林、NS5A抑制剂或NS5B抑制剂联合处理HCV复制子细胞，采用适宜方法评估联合效应，判断相加或协同活性[4]
3. 选择性实验：12 μM以下浓度阿舒那韦（Asunaprevir）处理多种RNA病毒感染细胞，检测病毒复制情况评估选择性[4]
1. HCV复制子耐药性筛选：1a型和1b型HCV复制子细胞经不同浓度阿舒那韦（Asunaprevir）处理，筛选耐药克隆/群体，对NS3蛋白酶基因测序，鉴定耐药相关突变[5]
2. 瞬时转染敏感性实验：将耐药NS3蛋白酶序列克隆至HCV复制子质粒，转染细胞后用阿舒那韦（Asunaprevir）处理，检测EC₅₀值以确定耐药倍数[5]
3. 复制能力实验：通过动态检测HCV RNA水平，比较耐药复制子与野生型复制子的复制能力[5]

体内暴露研究。[2]
\n\n所有研究均使用阿舒那韦 (ASV) 的无定形游离酸形式。在雄性 FVB 小鼠（20 至 25 g）、雄性 Sprague-Dawley 大鼠（300 至 350 g；Hilltop Lab Animals，Scottsdale，PA）（颈静脉或胆总管内植入留置导管）、雄性比格犬（约 9 至 12 kg）（携带血管通路端口）和雄性食蟹猴（3.1 至 5.7 kg）（携带血管通路端口）中，对血浆和组织暴露情况进行了表征。所有动物实验均按照试验机构动物护理和使用委员会批准的方案进行。在所有研究中，给药后采集的凝血样本在 4°C 下离心（1,500 至 2,000 × g）；血浆样本储存在 -20°C 直至分析。组织样本经冲洗、吸干、称重后冷冻保存。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析血浆和组织样本中的ASV。所有物种血浆样本中ASV的定量下限（LLOQ）为1 nM，小鼠和大鼠组织中为5 nM，犬和猴组织中为50 nM。[2]
\n\n\n小鼠（每组n = 9；禁食过夜）经口灌胃给予ASV（5 mg/kg；PEG-400-乙醇，9:1溶剂）。分别于给药后0.25、0.5、1、3、6、8和24小时，通过眼眶后静脉丛取血（约0.2 ml）。每组分别在 0.25、3 和 24 小时、0.5 和 6 小时、1 和 8 小时各取 3 只动物的血液样本，从而获得综合药代动力学曲线。在终点取样点，还从小鼠中取出肝脏和脑组织。[2]
\n\n\n大鼠（每组 n = 3；禁食过夜）通过灌胃给予溶于 PEG-400-乙醇 (9:1) 的 ASV（无定形游离酸）（3、5、10 和 15 mg/kg）。在给药前（0 小时）和给药后 0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、24 和 48 小时，从颈静脉采集系列血样（约 0.3 ml）。为了评估组织暴露情况，大鼠经口给予ASV（5或15 mg/kg，溶剂同上），并在给药后0.17、0.5、1、2、4、6、8、24、48和72小时采集每组两只大鼠的血液、肝脏和心脏样本。[2]
\n\n\n犬（n = 3；禁食过夜）经口灌胃给予ASV，剂量为3或6 mg/kg（3 mg/ml，溶于85% PEG-400-15%水中）。在给药后0.08、0.167、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、24和48小时，通过血管通路采集系列血样。为了评估组织暴露情况，对六只雄性犬（8.4 至 12.5 kg）口服给予 ASV（6 mg/kg），并在给药后 1、3、7、24、48 和 72 小时分别从每只犬身上采集血液、肝脏和脾脏样本。[2]
\n\n\n猴子（n = 3 只雄性；禁食过夜）通过灌胃给予 ASV，剂量为 3 mg/kg（3 mg/ml，溶于 85% PEG-400–15% 水中）。在给药后 0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8 和 24 小时采集血液样本。为了评估组织暴露情况，对3只雄性和6只雌性食蟹猴（2至5 kg）口服给予ASV（10 mg/kg），并在给药后2、8和24小时分别从一只雄性食蟹猴身上采集血液、肝脏和脾脏样本，并在给药后0.5、2、4、8、24和30小时分别从一只雌性食蟹猴身上采集血液、肝脏和脾脏样本。[2]

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\\n\\n对小鼠（每组n = 9；隔夜禁食；赋形剂：PEG-400-乙醇，9:1）口服给予阿舒那韦（ASV）。在给药后0.25、0.5、1、3、6、8和24小时，通过眼眶后静脉丛取血（-0.2 mL）。为了构建综合药代动力学曲线，每组动物分别在0.25、3和24小时、0.5和6小时、1和8小时各取3只血液样本。在终点取样点，小鼠的肝脏和脑组织也被切除。将无定形游离酸（ASV）以3、5、10和15 mg/kg的剂量，溶于PEG-400-乙醇（9:1）中，经口给予大鼠（每组n=3；隔夜禁食）。在给药前（0小时）以及给药后0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、24和48小时，通过颈静脉抽取系列血样（-0.3 mL）。大鼠经口给予ASV（5或15 mg/kg，溶剂同上），以测定组织暴露量。给药后，分别于 0.17、0.5、1、2、4、6、8、24、48 和 72 小时采集大鼠的肝脏、心脏和血液样本。

吸收、分布和排泄
在临床前研究中，阿舒那韦显示出较高的肝血药浓度与血浆药时曲线下面积比值（AUC）。给药后30分钟内即可迅速吸收。临床药代动力学研究显示，达峰时间（Tmax）为2-4小时。其药代动力学特征呈剂量比例关系，100 mg剂量下，稳态血药浓度峰值（Cmax）和AUC分别为572 ng/ml和1887 ng·h/mL。绝对生物利用度为9.3%。食物可增加阿舒那韦的吸收。
阿舒那韦主要经粪便排泄。给药剂量中，84%主要以代谢物的形式经粪便排出，不到1%的剂量以代谢物的形式从尿液中排出。粪便中回收的未代谢阿舒那韦仅占给药剂量的7.5%。
稳态分布容积为194升。
临床药代动力学研究显示，平均口服清除率为302-491升/小时。

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代谢/代谢物
阿舒那韦在肝脏代谢。其代谢主要通过CYP3A介导的氧化反应进行。阿舒那韦似乎自身代谢较弱，循环剂量中仅有约5%的给药剂量转化为代谢物。阿舒那韦的代谢物是通过单氧化和双氧化、N-去烷基化、异喹啉环脱除和O-去甲基化形成的。所有代谢反应生成约 15 种代谢物，研究表明，主要的代谢活性由 CYP3A4 和 CYP3A5 执行，CYP2A6、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19 和 CYP2D6 也具有一定的活性。

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生物半衰期
临床药代动力学研究表明，平均末端半衰期为 15-20 小时。

蛋白结合
阿舒那韦的蛋白结合率非常高，无论给药剂量如何，其蛋白结合率均可超过给药剂量的99%。体外人Caco-2细胞研究表明，阿舒那韦是P-gp、OATP1B1和OATP2B1的底物。

[1]. Front Microbiol. 2017; 8: 668

[2]. Antimicrob Agents Chemother.2012 Oct;56(10):5387-96.

[3]. Antimicrob Agents Chemother. 2012 Oct;56(10):5230-9.

[4]. Antimicrob Agents Chemother. 2012 Oct;56(10):5387-96.

[5]. Antimicrob Agents Chemother. 2012 Jul;56(7):3670-81.

阿舒那韦是一种寡肽。
阿舒那韦，又名BMS-650032，是一种强效的丙型肝炎病毒（HCV）NS3蛋白酶抑制剂。研究表明，在与达卡他韦联合治疗的HCV基因1b型慢性感染患者中，阿舒那韦具有极高的疗效。该药由百时美施贵宝加拿大公司研发，并于2016年4月22日获得加拿大卫生部批准。一年后，即2017年10月16日，阿舒那韦的商业化申请被取消。
阿舒那韦是一种口服生物利用度高的NS3非结构蛋白抑制剂，具有潜在的抗丙型肝炎病毒（HCV）活性。给药后，阿舒那韦与HCV NS3的活性中心结合，阻止NS3蛋白酶介导的多聚蛋白成熟。这会干扰HCV复制所需的病毒蛋白的加工过程。 NS3 是一种丝氨酸蛋白酶，对 HCV 多聚蛋白内的蛋白水解切割至关重要，并在 HCV 病毒 RNA 复制过程中发挥关键作用。HCV 是一种小型、有包膜的单链 RNA 病毒，属于黄病毒科。

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药物适应症
阿舒那韦与其他药物联合使用，适用于治疗成人慢性丙型肝炎患者，这些患者感染了 1 型或 4 型丙型肝炎病毒，并伴有代偿性肝硬化。丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的肝脏疾病。慢性丙型肝炎占所有病例的 60-80%，其中 20 年内发展为肝硬化的风险约为 15-30%。在美国，1型丙型肝炎病毒是最常见的丙型肝炎病毒类型，也是最难治疗的类型。
慢性丙型肝炎的治疗

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作用机制
阿舒那韦是一种高效的HCV NS3蛋白酶抑制剂。HCV基因组具有正链极性，使其无需进一步转化即可在宿主细胞内翻译成蛋白质。然而，生成的蛋白质需要通过NS3蛋白酶切割成单个蛋白质才能发挥其酶活性或结构作用。因此，由于NS3对病毒复制至关重要，阿舒那韦的抑制作用使其具有强大的抗病毒活性。

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药效学
体外研究表明，阿舒那韦在HCV复制子细胞系统中具有显著的抗病毒活性，对HCV 1a型和1b型的EC50值分别为4 nM和1 nM。这些研究表明，阿舒那韦对2型和3型基因型的活性有限。这一特性使得阿舒那韦成为一种高度选择性的抗HCV药物，对HCV密切相关的病毒无效。阿舒那韦可显著降低HCV 1型基因型感染患者的HCV RNA水平。临床研究表明，阿舒那韦耐受性良好，HCV RNA水平较基线平均最大降幅约为2.87 log10 IU/ml。阿舒那韦单药治疗的临床研究显示，当剂量从10 mg递增至600 mg时，HCV RNA平均最大降幅在0.28-2.87 log10 IU/ml范围内。当阿舒那韦作为联合用药时，83-92% 的患者可获得持续病毒学应答（治疗结束后 24 周仍无病毒血症）。

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阿舒那韦是一种直接抗病毒药物 (DAA)，最初开发为 HCV NS3 蛋白酶抑制剂。它能激活肝癌细胞中 MAVS 依赖性先天免疫，从而发挥其抗 HCV 和 DENV 病毒的活性，且该活性独立于直接抑制 HCV 蛋白酶[1]。
阿舒那韦是一种 HCV NS3 蛋白酶抑制剂，与 α 干扰素和/或达卡他韦联合使用时，对 HCV 基因 1 型慢性感染患者有效。其肝脏趋向性确保了较高的肝脏暴露量，从而支持其抗 HCV 疗效[2]。
阿舒那韦是 HCV 联合 DAA 疗法的一部分。与 NS5A 或 NS5B 抑制剂联合使用可降低耐药性的产生并增强复制子抑制，从而解决单药治疗引起的耐药性问题[3]
阿舒那韦是一种 HCV NS3 蛋白酶抑制剂，与 α 干扰素和/或达卡他韦联合使用时，对 HCV 基因 1 型慢性感染患者有效。其肝脏趋向性确保了较高的肝脏暴露量，从而支持其抗 HCV 疗效[4]
阿舒那韦在与达卡他韦的双联疗法中对 HCV 基因 1b 型感染患者显示出疗效。耐药相关的氨基酸替换因 HCV 基因型而异，并且对 NS5A 抑制剂具有交叉敏感性，这支持其在联合疗法中的应用[5]

C35H46CLN5O9S

748.29

747.27

C, 56.18; H, 6.20; Cl, 4.74; N, 9.36; O, 19.24; S, 4.28

630420-16-5

16076883

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

145-155 ºC

1.616

4.02

201.18

3

10

14

51

1470

5

ClC1C([H])=C([H])C2C(=C([H])N=C(C=2C=1[H])O[C@@]1([H])C([H])([H])N(C([C@]([H])(C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])N([H])C(=O)OC(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)[C@@]([H])(C1([H])[H])C(N([H])[C@]1(C(N([H])S(C2([H])C([H])([H])C2([H])[H])(=O)=O)=O)C([H])([H])[C@@]1([H])C([H])=C([H])[H])=O)OC([H])([H])[H]

XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N

InChI=1S/C35H46ClN5O9S/c1-9-19-16-35(19,31(44)40-51(46,47)22-11-12-22)39-28(42)25-15-21(49-29-24-14-20(36)10-13-23(24)26(48-8)17-37-29)18-41(25)30(43)27(33(2,3)4)38-32(45)50-34(5,6)7/h9-10,13-14,17,19,21-22,25,27H,1,11-12,15-16,18H2,2-8H3,(H,38,45)(H,39,42)(H,40,44)/t19-,21-,25+,27-,35-/m1/s1

1,1-dimethylethyl ((1S)-1-{((2S,4R)-4-(7-chloro-4-methoxyisoquinolin-1-yloxy)-2-({(1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-ethenylcyclopropyl}carbamoyl) pyrrolidin-1-yl)carbonyl}-2,2-dimethylpropyl)carbamate

BMS-650032; BMS 650032; BMS650032; S9X0KRJ00S; 1,1-dimethylethyl ((1S)-1-{((2S,4R)-4-(7-chloro-4-methoxyisoquinolin-1-yloxy)-2-({(1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-ethenylcyclopropyl}carbamoyl) pyrrolidin-1-yl)carbonyl}-2,2-dimethylpropyl)carbamate; trade name in Japan and Russia: Sunvepra

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL ( ~133.63 mM )
Ethanol : 20~100 mg/mL(~26.73 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.34 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: 2 mg/mL (2.67 mM) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
例如，若需制备1 mL的工作液，将100 μL 20.0 mg/mL澄清乙醇储备液加入到400 μL PEG300中并混合均匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 6 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (2.67 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 7 中的溶解度: 10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline: ≥ 2.5 mg/mL (3.34 mM)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。