| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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描述： AA147 是一种 ATF6 模拟物。它作为一种前药，通过局部代谢激活和选择性共价修饰内质网驻留蛋白来优先触发 ATF6 信号通路，从而调节 ATF6 活性。
AA147（ATF6-activator-147，CAS号: 393121-74-9）是一种内质网蛋白质稳态调节剂，化学名称为N-(2-羟基-5-甲基苯基)-3-苯基丙酰胺，分子式为C₁₆H₁₇NO₂，分子量为255.31 。该化合物是一种前体药物，通过局部代谢激活和选择性共价修饰内质网驻留蛋白来优先激活ATF6信号通路，同时也可激活NRF2抗氧化反应通路 。| 靶点 |
Activating Transcription Factor 6 (ATF6) [2]
AA147 primarily targets activating transcription factor 6 (ATF6) and also activates nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (NRF2) . ATF6 pathway: AA147 undergoes metabolic activation to generate a reactive electrophile that selectively modifies ER proteins (including multiple protein disulfide isomerases), thereby activating ATF6 signaling . NRF2 pathway: In neuron-derived cells, AA147 promotes NRF2 activation by covalently modifying KEAP1, leading to upregulation of antioxidant response genes . |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在HT22细胞中，AA147（20-0.078 μM（减半）；6或16小时）可减轻活性氧（ROS）相关的损伤，从而预防谷值诱导引起的氧化毒性[1]。在HT22细胞中，AA147（10 μM；16小时）可共价改变KEAP1，从而促进NRF2的激活[1]。在BPAEC细胞中，AA147可识别ATF6的激活并上调磷酸化cofilin（5、10、15 μM；4、8、16、24、48小时）[2]。在牛肺动脉内皮细胞 (BPAEC) 中，AA147 (10 μM；24 小时) 可减轻脂多糖 (LPS) 引起的内皮屏障破坏 [2]。
AA147 可选择性地诱导牛肺动脉内皮细胞 (BPAEC) 中 ATF6 的激活，且该过程独立于内质网 (ER) 应激。[2] - 用 AA147 (10 μM) 处理 BPAEC 不同时间点 (4、8、16、24 和 48 小时) 可显著增加 ATF6 (cATF6) 的激活。[2] - 在 BPAEC 中，AA147 (10 μM) 处理可上调 Cofilin (pCofilin) 的磷酸化水平。 [2] - 将 BPAEC 暴露于浓度递增的 AA147（5、10、15 μM）24 小时后，ATF6 活化和 Cofilin 磷酸化水平均呈剂量依赖性增加。[2] - 用 AA147（10 μM）预处理 BPAEC 24 小时可拮抗 LPS（1 μg/ml，1 小时）诱导的 ATF6 活化抑制。[2] - 在 LPS 处理的 BPAEC 中，AA147（10 μM）抑制了 Cofilin 和肌球蛋白轻链 2 (MLC2) 的活化，表现为磷酸化水平降低。[2] - AA147（10 μM）降低了 LPS 诱导的 VE-钙黏蛋白磷酸化，这是内皮屏障破坏的关键事件。 [2] - 在采用 FITC-葡聚糖旁细胞通透性测定法，使用生长在 Transwell 小室上的 BPAEC 单层细胞进行实验，结果表明，用 AA147 (10 μM, 24H) 处理可显著抑制 LPS (10 μg/ml, 2H) 引起的通透性增加。[2] - 对用 AA147 (5 μM, 10 μM) 处理的融合 BPAEC 单层细胞进行电细胞-基质阻抗传感 (ECIS) 测量，结果显示跨内皮电阻 (TEER) 值逐渐增加，表明通透性降低，屏障完整性增强。[2] AA147在体外对多种细胞类型具有保护作用。 HT22细胞（神经元模型）：AA147（0.078-20 μM，预处理6或16小时）可剂量依赖性地保护HT22细胞免受谷氨酸诱导的氧化毒性，减少活性氧相关的损伤 。10 μM AA147处理16小时可通过共价修饰KEAP1促进NRF2激活，显著上调抗氧化活性相关基因（如催乳素和谷胱甘肽转移酶）的表达 。 BPAEC细胞（内皮细胞模型）：AA147（5、10、15 μM；4-48小时）可激活ATF6并上调磷酸化cofilin的表达 。10 μM AA147处理24小时可减少LPS诱导的内皮屏障破坏 。 AA28类似物：将AA147的酰胺连接子替换为氨基甲酸酯连接子得到AA28，该类似物在HEK293T细胞中激活ATF6的EC₅₀为2.9 μM（AA147为1.1 μM），并可同等程度地诱导ATF6靶基因BiP的表达 。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
通过激活ATF6，AA147（鞘内注射；单次麻醉，连续三天）可以刺激远端运动神经元表达，抑制运动神经元神经保护作用，并重新平衡重度SMA标本中的XBP1表达[3]。在重度SMA样小鼠中，从出生后第7天（P7）到P10，每日鞘内注射AA147可增加脊髓中Xbp1u mRNA的表达，证实了体内ATF6的激活。[3]
该治疗重新激活了重度SMA样小鼠脊髓中的IRE1α/XBP1通路，表现为Xbp1s及其靶标Bip/Grp78 mRNA水平的升高。重要的是，Chop mRNA水平并未升高，表明未诱导细胞凋亡。 [3] - 体内 ATF6 激活 AA147 后，脊髓中含有外显子 7 的 SMN 转录本 (E7-E8) 显著增加，而 SMN 总 mRNA (E2a-E2b) 并未增加，证实了 SMN 外显子 7 的插入。在蛋白水平上也证实了这一点，AA147 处理的小鼠脊髓中 SMN 蛋白表达增加。[3] - AA147 处理对脊髓运动神经元 (MN) 具有神经保护作用。与对照组相比，载体处理的重度 SMA 样小鼠腹侧脊髓中 ChAT 阳性 MN 减少了 20%，而 AA147 处理的 SMA 小鼠脊髓 MN 的数量与健康对照组相比不再存在统计学差异。 [3] AA147提供的神经保护作用与运动行为的改善相关。与载体对照组相比，AA147治疗的重度SMA样小鼠在出生后第10天（P10）的抓握时间显著增加，并且在开放场测试中，从出生后第8天（P8）到第11天（P11）的探索活动逐渐增加。[3] 载体对照组的重度SMA样小鼠从出生后第8天（P8）到出生后第10天（P10）左右死亡期间体重显著下降，而AA147治疗的重度SMA样小鼠则保持了体重。此外，30%的AA147治疗小鼠的存活时间超过了载体对照组10天的平均寿命。[3] AA147在多种动物模型中显示出体内疗效。 脊髓性肌萎缩症模型：AA147（鞘内注射，单次，连续3天）可通过激活ATF6刺激运动神经元表达，为脊髓性肌萎缩症模型中的运动神经元提供神经保护 。 缺血性脑卒中模型：药代动力学分析显示AA147可穿透血脑屏障。在永久性脑卒中模型中，卒中后给予AA147治疗对短期结局无显著改善，但可改善年轻和老年小鼠的长期功能恢复 。 多发性硬化症模型（EAE模型）：AA147可改善EAE小鼠模型的临床症状，减少内质网应激、少突胶质细胞丢失和脱髓鞘；同时抑制中枢神经系统中的T细胞而不改变外周免疫反应。在少突胶质细胞中，AA147促进ATF6而非NRF2的核转位；在小胶质细胞中则增强ATF6和NRF2靶基因的表达 。 脊髓损伤模型：在脊髓损伤小鼠模型中，AA147可促进神经元存活，减轻神经元凋亡，增强未折叠蛋白反应的三条信号通路，并通过上调过氧化氢酶表达减轻神经元中ROS的积累，同时促进运动功能的恢复 。 视网膜研究：在小鼠视网膜中，AA147可诱导ATF6调节基因的表达，且不引起视网膜细胞死亡、不损害视力、不触发内质网应激 。 心肌缺血/再灌注损伤模型：AA147可保护心脏免受缺血/再灌注损伤，其保护作用依赖于ATF6激活 。 |
| 酶活实验 |
AA147主要通过代谢激活生成活性亲电体，共价修饰内质网蛋白（如KEAP1和蛋白二硫键异构酶）来发挥作用 。
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| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： HT22 细胞 测试浓度： 0.078、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10、20 μM 孵育时间： 6 或 16 小时（预孵育） 实验结果： 结果表明，在谷氨酸刺激前用 AA147 预处理 6 或 16 小时，谷氨酸处理的 HT22 细胞的活力呈剂量依赖性增加（与谷氨酸刺激同时添加 AA147 并未提高谷氨酸处理细胞的活力）。预孵育 16 小时可减少细胞内 ROS 的积累。 细胞活力检测[1] 细胞类型：HT22细胞 测试浓度：10 μM 孵育时间：16小时 实验结果：在神经元模型中，与抗氧化活性相关的基因表达显著增加，包括催乳素和谷胱甘肽转移酶。NRF2的激活机制涉及代谢活化和KEAP1蛋白的共价修饰。 细胞活力检测[2] 细胞类型：BPAEC 测试浓度：5、10 μM 孵育时间：135 小时 实验结果：ATF6 激活降低细胞通透性 细胞活力（MTT 法）：将 BPAEC 以每孔 10,000 个细胞的密度接种于 96 孔板中。然后用溶剂（0.1% DMSO）或递增浓度的 AA147（1、5、10、25、50、100、200 μM）处理细胞 24 小时和 48 小时。处理结束后，向每个孔中加入 MTT（0.5 mg/ml），并孵育 3.5 小时。将甲臜晶体溶解于DMSO中，并在570 nm处测量吸光度以评估细胞活力。[2] - 蛋白质表达的Western印迹分析：培养BPAEC细胞，并用不同条件处理（例如，单独使用AA147或与LPS联合使用）。使用RIPA裂解缓冲液分离蛋白质。将等量的蛋白质通过12% SDS-PAGE凝胶电泳分离，然后转移至硝酸纤维素膜上。将膜在5%脱脂奶粉中封闭，并在4℃下与针对cATF6、pCofilin、Cofilin、pMLC2、MLC2、pVE-cadherin和VE-cadherin等靶标的一抗孵育过夜，以β-actin作为上样对照。与适当的HRP标记二抗孵育后，使用ChemiDoc成像系统显影蛋白质信号。使用ImageJ软件对免疫印迹进行密度分析。 [2] - 细胞旁通透性（FITC-葡聚糖测定）：将BPAEC以每孔20万个细胞的密度接种于24孔培养板的Transwell小室中，使其形成单层细胞。细胞预先用溶剂（0.1% DMSO）或AA147（10 μM）处理24小时。随后，细胞暴露于溶剂（PBS）或LPS（10 μg/ml）中2小时。LPS刺激后，向小室中加入FITC-葡聚糖（70 kDa，1 mg/ml），孵育20分钟。从接收孔中收集培养基样品（100 μl），并使用酶标仪分别在激发波长485 nm和发射波长535 nm处测量荧光强度。 [2] - 跨内皮电阻 (ECIS)：使用电细胞-基质阻抗传感 (ECIS) 系统评估 BPAEC 单层细胞的屏障功能。将细胞培养在 ECIS 阵列上，直至达到至少 800 Ω 的稳态电阻。然后用载体 (0.1% DMSO) 或 AA147 (5 μM, 10 μM) 处理汇合的单层细胞，并在整个实验过程中监测与通透性呈负相关的跨内皮电阻 (TEER) 的实时变化。[2] HT22细胞活力检测：将HT22细胞接种于培养板中，用不同浓度的AA147（0.078、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10、20 μM）预处理6或16小时，然后用谷氨酸（5 mM）刺激24小时。通过MTT法评估细胞活力。结果显示，AA147预处理6或16小时可剂量依赖性地提高谷氨酸处理HT22细胞的活力，而AA147与谷氨酸同时加入则无保护作用 。 细胞凋亡检测：HT22细胞经AA147预处理6或16小时后用谷氨酸（5 mM）刺激24小时，然后用Annexin V和/或碘化丙啶染色，通过流式细胞术量化凋亡细胞比例 。 |
| 动物实验 |
小鼠模型：本研究采用重度脊髓性肌萎缩症（SMA）样小鼠模型。[3]
- 给药途径：AA147采用鞘内注射给药。新生小鼠在出生后第7天（P7）开始，从P7至P10每日注射一次。[3] - 制剂/剂量：文中未提供AA147的具体剂量、赋形剂和制剂详情。[3] - 行为分析： - 抓握力测试：在P10时测量小鼠的抓握时间。[3] - 旷场实验：在旷场中分析小鼠的自发活动。记录P8至P11期间5分钟内小鼠的总穿越次数和外周穿越次数。[3] - 组织采集和分析：在P10时处死小鼠。收集腰段脊髓（L1-L5）用于分子分析（RT-qPCR、Western blot）和免疫组织化学染色。通过计数腰段脊髓腹角中ChAT阳性细胞来评估运动神经元的存活情况。[3] - 存活率和体重监测：每日监测小鼠体重，并记录小鼠的寿命（存活率）。[3] 小鼠模型：本研究采用重度SMA样小鼠模型。[3] - 给药途径：AA147通过鞘内注射给药。出生后第7天（P7）的新生小鼠从P7至P10每日注射一次。[3] - 制剂/剂量：文中未提供AA147的具体剂量、载体和制剂详情。 [3] - 行为分析： - 抓握力测试：在出生后第10天（P10）测量小鼠的抓握时间。[3] - 旷场测试：在旷场中分析小鼠的自发活动。记录P8至P11期间5分钟内小鼠的总穿越次数和外周穿越次数。[3] - 组织采集与分析：在P10处死小鼠。采集腰段脊髓（L1-L5）用于分子分析（RT-qPCR、Western blot）和免疫组织化学分析。通过计数腰段脊髓腹角中ChAT阳性细胞来评估运动神经元的存活情况。[3] - 存活率和体重监测：每日监测小鼠体重，并记录小鼠的寿命（存活率）。[3] EAE小鼠模型（多发性硬化症）：使用实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型评估AA147的疗效。AA147给药后可改善临床症状，减少脱髓鞘和少突胶质细胞丢失。AA147在少突胶质细胞中促进ATF6核转位，在小胶质细胞中激活NRF2通路 。 脊髓损伤模型：建立C57BL/6J小鼠脊髓损伤模型，通过行为学实验评估AA147对运动功能恢复的促进作用 。 脑卒中模型：在永久性脑卒中模型中，卒中后给予AA147治疗，通过行为学和组织学评估长期功能恢复 。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
AA147 经代谢活化生成活性亲电试剂（醌甲基化物 AA147-QM 或醌亚胺 AA147-QI），该过程可能涉及内质网定位的氧化酶，例如细胞色素 P450。这种代谢活化对其生物活性至关重要，这体现在 2-氨基对甲酚部分的必要性以及 P450 抑制剂白藜芦醇的抑制作用。[1]
- 连接酰胺上带有叔胺基团的类似物（AA147N-甲基）不利于氧化生成醌亚胺，其对谷氨酸毒性的保护作用显著降低，并且无法激活荧光素酶报告基因。[1] 药代动力学分析显示AA147可穿透血脑屏障，这一特性使其在中枢神经系统疾病研究中具有应用价值 。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
视网膜研究：在小鼠视网膜中，AA147在诱导ATF6调节基因表达的剂量下不引起视网膜细胞死亡、不损害视力、不触发内质网应激 。
使用 MTT 法在 BPAEC 细胞中评估了 AA147 对细胞活力的影响。浓度为 1 至 50 μM 的 AA147 处理 24 小时以及浓度为 1 至 25 μM 的 AA147 处理 48 小时，均未对细胞活力产生显著影响。然而，较高浓度（例如 100-200 μM）则表现出毒性，导致活细胞数量显著减少。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AA147（N-(2-羟基-5-甲基苯基)-3-苯基丙酰胺）是一种小分子化合物，能够选择性地诱导激活转录因子6 (ATF6) 信号通路，且该过程独立于内质网 (ER) 应激的诱导。[2]
- 其作用机制涉及AA147在内质网驻留酶细胞色素P450的作用下代谢转化为活性化合物，进而选择性修饰内质网蛋白并激活ATF6。[2] - 本研究探讨了AA147介导的ATF6激活对脂多糖 (LPS) 诱导的内皮屏障功能障碍的保护作用。研究结果表明，AA147 通过抑制 LPS 诱导的 Cofilin 和 MLC2 的激活以及 VE-钙黏蛋白的磷酸化，从而支持内皮屏障功能，降低血管通透性。这提示 ATF6 的药理学激活可能是一种治疗血管渗漏相关疾病（如脓毒症和 ARDS）的潜在策略。[2] AA147（CAS: 393121-74-9）是一种内质网蛋白质稳态调节剂，最早由Scripps研究所的Jeffery W. Kelly和R. Luke Wiseman团队发现并报道。该化合物通过代谢激活生成活性亲电体，共价修饰内质网蛋白，从而选择性激活ATF6信号通路 。在神经元来源的细胞中，AA147还可激活NRF2抗氧化反应通路 。AA147及其类似物AA28在缺血性脑卒中、多发性硬化症、脊髓损伤、心肌缺血/再灌注损伤等多种疾病模型中显示出保护作用 |
| 分子式 |
C16H17NO2
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|---|---|
| 分子量 |
255.311684370041
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| 精确质量 |
255.1259
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| 元素分析 |
C, 75.27; H, 6.71; N, 5.49; O, 12.53
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| CAS号 |
393121-74-9
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| PubChem CID |
882909
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| 外观&性状 |
Light brown to brown solid powder
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| LogP |
3.3
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| tPSA |
49.3 Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
19
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| 分子复杂度/Complexity |
287
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(CCC1C=CC=CC=1)NC1C(=CC=C(C)C=1)O
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| InChi Key |
AWHLTHOHBAGPMY-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H17NO2/c1-12-7-9-15(18)14(11-12)17-16(19)10-8-13-5-3-2-4-6-13/h2-7,9,11,18H,8,10H2,1H3,(H,17,19)
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| 化学名 |
N-(2-hydroxy-5-methylphenyl)-3-phenylpropanamide
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| 别名 |
ATF6 activator 147; ATF6-activator 147; 393121-74-9; N-(2-hydroxy-5-methylphenyl)-3-phenylpropanamide; AA147; AA 147; ATF6-activator-147; ATF6 activator-147
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~195.84 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (19.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 5 mg/mL (19.58 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.9168 mL | 19.5840 mL | 39.1681 mL | |
| 5 mM | 0.7834 mL | 3.9168 mL | 7.8336 mL | |
| 10 mM | 0.3917 mL | 1.9584 mL | 3.9168 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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