| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PknG (protein kinase G of Mycobacterium tuberculosis) – no IC50/Ki/EC50 values provided in these references; a radiometric ATP consumptive assay was performed but specific IC50 not reported. [2]
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| 体外研究 (In Vitro) |
AX20017 是一种高选择性的小分子蛋白激酶 G (PknG) 抑制剂，IC50 值为 0.39 μM。结核分枝杆菌等分枝杆菌的致病性与其在宿主巨噬细胞内生存的能力密切相关。蛋白激酶 G (PknG) 是分枝杆菌胞内生存的关键毒力因子，它是一种由致病性分枝杆菌表达的真核生物样丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，能够阻断分枝杆菌在溶酶体中的胞内降解。在 PknG 与 AX20017 复合物的 2.4 Å X 射线晶体结构中，化合物 AX20017 抑制剂结合在 PknG 结构域叶间裂隙形成的狭窄口袋深处。 PknG-AX20017的结构进一步揭示，该抑制剂深埋于腺苷结合位点内，靶向激酶结构域的活性构象。值得注意的是，尽管该激酶结构域的拓扑结构与真核生物激酶相似，但AX20017的结合口袋是由一组独特的氨基酸侧链构成的，这些侧链在任何人类激酶中都不存在。对特定残基进行定向诱变导致化合物抑制效力显著降低。结果解释了AX20017的特异性作用机制，并表明与宿主分子高度同源的毒力因子可以作为靶点，成功阻断结核分枝杆菌的增殖。
激酶活性测定：体外磷酸化实验使用PknG (0.5 μg)，反应体系为25 mM Tris (pH 7.5)、2 mM MnCl2和0.5 μCi。在有或无试剂的情况下，测定[γ-32P]ATP。为监测PknGΔN的激酶活性，将该蛋白与等量的全长PknG激酶失活突变体PknG-K181M混合。为分析PknG-I87S/A92S和PknG-C/S的激酶活性，加入PknG的N端片段（2 μg）。磷酸化蛋白经12.5% SDS-PAGE分离，并通过放射自显影分析或PhosphorImage分析进行定量。IC50值采用放射性ATP消耗测定法测定。在每项激酶测定中，测试了浓度范围为5 × 10⁻⁵ M至1.5 × 10⁻¹⁰ M的12个AX20017浓度。 细胞实验：将 J774 细胞在指定浓度的 AX20017 (0, 10, 20 μM) 存在下孵育 30 分钟后，分析其吞噬作用。随后，在抑制剂持续存在的情况下，将细胞与乳胶微珠以 10:1 的比例孵育 2 小时，最后按所述方法用 3% 多聚甲醛固定。使用 Axiophot 显微镜和 63 倍物镜观察细胞。通过掺入氚标记的胸苷 (0.1 μCi) 12 小时来分析 J774 细胞的增殖情况，具体方法与之前在有或无 AX20017 (0、10、20 μM) 的情况下孵育 48 小时的细胞相同。 AX20017 (25 μM) 在体外抑制野生型 PknG 激酶活性；PknG-I87S/A92S 双突变导致抑制能力丧失 50% 以上（图 3C）。[2] 浓度高达 100 μM 的 AX20017 对 J774 巨噬细胞的蛋白质合成、吞噬作用或增殖均无影响。[2] |
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| 体内研究 (In Vivo) |
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| 酶活实验 |
体外激酶活性测定：将 PknG (0.5 μg) 与 25 mM Tris (pH 7.5)、2 mM MnCl₂、0.5 μCi [γ-³²P]ATP 在有或无 AX20017 (25 μM) 的条件下孵育。反应混合物经 12.5% SDS-PAGE 电泳分离，并通过放射自显影或 PhosphorImage 定量分析。对于 PknG-I87S/A92S 突变体，加入 PknG 的 N 端片段 (2 μg)。[2]
IC50 测定：采用放射性 ATP 消耗测定法（³³PanQinase 活性测定）。每个激酶活性测定均测试了 12 个浓度的 AX20017，浓度范围从 5×10⁻⁵ M 到 1.5×10⁻¹⁰ M。（未报告具体的 IC50 值）。[2] 进行了有限蛋白水解和结构域定位以鉴定 PknG 结构域。[2] |
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| 细胞实验 |
本研究使用J774小鼠巨噬细胞。蛋白质合成：将细胞与0.4 μCi的³⁵S-甲硫氨酸/半胱氨酸在AX20017（1、10、100 μM）存在下孵育9小时，裂解细胞，并测定TCA沉淀物计数。吞噬作用：将细胞与1、10或100 μM的AX20017孵育30分钟，然后加入乳胶微珠（10:1微珠/细胞）孵育2小时，固定后观察。增殖：将细胞与1、10或100 μM的AX20017孵育48小时，然后加入0.1 μCi的氚标记胸苷孵育12小时，并测定其掺入量。即使浓度达到 100 μM，也未观察到对蛋白质合成、吞噬作用或增殖的影响。[2]
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| 动物实验 |
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
AX20017在浓度高达100 μM时对J774细胞无毒性（对蛋白质合成、吞噬作用或增殖无影响）。[2]
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| 参考文献 |
Bioinformation.2011;7(1):1-4. Epub 2011 Aug 20.Proc Natl Acad Sci U S A.2007 Jul 17;104(29):12151-6. Epub 2007 Jul 6.
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| 其他信息 |
PknG 与 AX20017 复合物的 X 射线晶体结构（PDB ID 2PZI，分辨率 2.4 Å）显示，该抑制剂结合于激酶结构域腺苷结合口袋的深处。关键的相互作用残基包括 Glu233、Val235、Ile87、Ala92 等。Ile165、Val179、Gly236 和 Ile292 这四个残基的组合是 PknG 所特有的，在任何人类激酶中都未发现，这解释了 AX20017 的高特异性。[2] 在一项分子对接研究（参考文献 1）中，AX20017 的 GlideScore 为 -5.6，并与 PknG 的 Glu233 和 Val235 形成氢键。[1]
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| 分子式 |
C₁₃H₁₆N₂O₂S
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|---|---|---|
| 分子量 |
264.34
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| 精确质量 |
268.12
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| 元素分析 |
C, 58.18; H, 7.51; N, 10.44; O, 11.92; S, 11.95
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| CAS号 |
329221-38-7
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
673481
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| LogP |
3.235
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| tPSA |
101.97
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
18
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| 分子复杂度/Complexity |
370
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
S1C(=C(C(N([H])[H])=O)C2=C1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C2([H])[H])N([H])C(C1([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O
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| InChi Key |
IEETZPYULYBOCV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H20N2O2S/c14-11(16)10-8-3-1-2-4-9(8)18-13(10)15-12(17)7-5-6-7/h7-10,13H,1-6H2,(H2,14,16)(H,15,17)
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| 化学名 |
2-(Cyclopropanecarbonylamino)-2,3,3a,4,5,6,7,7a-octahydro-1-benzothiophene-3-carboxamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.03.00
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 53~130 mg/mL ( 200.49~491.79 mM )
Ethanol : ~3 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (12.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 32.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 配方 2 中的溶解度: 10% DMSO+90% Corn Oil: ≥ 3.25 mg/mL (12.29 mM) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.7830 mL | 18.9150 mL | 37.8301 mL | |
| 5 mM | 0.7566 mL | 3.7830 mL | 7.5660 mL | |
| 10 mM | 0.3783 mL | 1.8915 mL | 3.7830 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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