| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MPS1 (TTK) [1][2][3];
In vitro kinase assay using recombinant human Mps1 catalytic domain (Mps1Cat): IC50 = approximately 35 nM [1]; In vitro inhibition of full-length Mps1 immunoprecipitated from mitotic HeLa cells: IC50 not explicitly stated, but 2 μM AZ3146 effectively inhibited autophosphorylation [1]; Cellular target engagement: inhibition of MPS1 autophosphorylation at T33/S37 in cells: IC50 for wild-type MPS1 = 1.48 μmol/L (MSD assay) [2]; Kinase selectivity panel: at 1 μM, AZ3146 inhibited only FAK, JNK1, JNK2, and KIT by >40% among 50 kinases tested [1]; In HCC cells, AZ3146 targets TTK to reduce cell viability (IC50 values: 7.13 μM in BEL-7404, 28.62 μM in SMMC-7721) [3]. AZ 3146 targets the monopolar spindle 1 (Mps1) kinase, a key regulator of the spindle assembly checkpoint (SAC). It is a selective Mps1 inhibitor with an IC50 of ~35 nM. It is less potent against closely related kinases such as FAK, JNK1, JNK2, and Kit. By inhibiting Mps1, AZ 3146 disrupts the SAC, leading to premature mitotic exit and chromosome missegregation, which can induce cell death in cancer cells. It also inhibits the recruitment of Mad1, Mad2, and CENP-E to kinetochores. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AZ3146 在体外激酶活性测定中抑制人 Mps1Cat 蛋白，IC50 值约为 35 nM。此外，AZ3146 能有效抑制从人细胞中免疫沉淀的全长 Mps1 蛋白的自磷酸化 [1]。AZ3146 是一种 TTK 特异性激酶抑制剂，可抑制 HCC 细胞的生长。为了检测其体外细胞毒性，我们使用了 SMMC-7721 和 BEL-7404 细胞。结果表明，AZ3146 的 IC50 值分别为 7.13 μM (BEL-7404) 和 28.62 μM (SMMC-7721)。连续四天，两种细胞均在 IC50 浓度下接受额外处理，结果显示细胞增殖显著减少 [2]。将HCT116细胞在0.8 μM（GI50）AZ3146浓度下培养10天，然后在2 μM AZ3146浓度下培养3周。在细胞活力检测中，分离出16个克隆，分别命名为AzR1-16，并建立了细胞系。AzR3和AzR4的GI50值约为3 μM（4倍耐药性），而其余克隆的GI50值约为9 μM（11倍耐药性）。所有克隆均对AZ3146诱导的细胞死亡具有耐药性。根据延时显微镜分析有丝分裂的结果[3]，当加入2 μM AZ3146时，亲代细胞系在10分钟内迅速退出有丝分裂。AZ3146抑制细胞中的Mps1激酶活性：用2 μM AZ3146处理2小时后，Phos tag凝胶中迁移较慢的Mps1磷酸化亚型减少[1]。AZ3146（2 μM）可绕过纺锤体组装检查点（SAC），导致细胞过早退出有丝分裂（在HeLa细胞中从约25分钟缩短至约10分钟）[1]。AZ3146抑制O-Mad2向动粒的募集，但不会取代Mad1-C-Mad2核心复合物；在表达Myc-Mad2的HeLa细胞中，AZ3146将着丝粒处的抗Myc信号降低至对照组的45±5%，而SM2.2（Mad2抗体）信号则降低至背景水平[1]。AZ3146还能抑制染色体排列：在monastrol洗脱后，2 μM AZ3146联合MG132处理导致超过85%的细胞出现排列缺陷，延时显微镜观察显示染色体未排列[1]。AZ3146处理（2 μM）使CENP-E在着丝粒的定位降低至对照组的约30%[1]。在HCT116细胞中，AZ3146的GI50为0.8 μmol/L[2]。 AZ3146处理（2 μmol/L）可导致亲代HCT116细胞快速退出有丝分裂（约10分钟），而AZ3146耐药克隆（例如，携带p.S611G突变的AzR1，携带p.I531M突变的AzR3）则维持正常的有丝分裂持续时间（约25分钟）[2]。AZ3146（2 μmol/L）通过流式细胞术检测，可消除亲代HCT116细胞周期谱中的G1期和G2-M期峰值，但在耐药克隆中则无此现象[2]。在 IP 激酶测定中，p.S611G 和 p.I531M MPS1 突变体表现出接近野生型的激酶活性，但对 AZ3146 抑制剂具有抗性（例如，p.S611G 的细胞 IC50 为 19.2 μmol/L，p.I531M 为 3.4 μmol/L，双突变体的自磷酸化 IC50 >25 μmol/L）[2]。在 HCC 细胞系中，AZ3146 抑制细胞增殖：用 7.13 μM AZ3146 处理 BEL-7404 细胞 4 天后，细胞生长受到显著抑制；用 28.62 μM AZ3146 处理的 SMMC-7721 细胞也显示出活力降低 [3]。体外实验表明，AZ 3146 是一种选择性 Mps1 抑制剂，IC50 值约为 35 nM。它抑制 Mad1、Mad2 和 CENP-E 向着丝粒的募集，并干扰染色体排列。它显著降低细胞内 Mps1 的磷酸化水平，并抑制已建立的纺锤体组装检查点 (SAC) 信号通路。它对 FAK、JNK1、JNK2 和 Kit 的抑制作用较弱。这些体外研究证实了其作为 Mps1 抑制剂的作用机制及其对有丝分裂检查点信号通路的影响。
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| 体内研究 (In Vivo) |
关于AZ3146在体内的给药效果，需要通过在人体、小鼠或其他动物模型中进行研究来提供证据。
在体内，AZ3146具有潜在的抗癌活性。它通过抑制Mps1并破坏纺锤体组装检查点（SAC），可以诱导癌细胞发生有丝分裂灾难和细胞死亡。然而，标准综述中并未广泛记录具体的体内研究结果。AZ3146是一种用于研究Mps1在有丝分裂和癌症中作用的试验化合物。其在临床前模型中的疗效需要进一步验证。 |
| 酶活实验 |
将重组Mps1催化结构域（Mps1Cat，氨基酸510-857）与AZ3146在含有25 mM Tris-HCl（pH 7.4）、100 mM NaCl、50 μg/ml BSA、0.1 mM EGTA、0.1% β-巯基乙醇、10 mM MgCl₂、0.5 μg/ml髓鞘碱性蛋白（MBP）、100 μM γ-[³²P]ATP和不同浓度AZ3146的缓冲液中孵育。反应在30°C下孵育20分钟，点样于P81滤纸上，用0.5%磷酸洗涤，并通过闪烁计数法定量放射性。 IC50 测定结果约为 35 nM [1]。
对于免疫沉淀激酶活性测定，HeLa 细胞用诺考达唑阻滞，裂解后，免疫沉淀全长 Mps1。洗涤免疫复合物，并在有或无 2 μM AZ3146 的情况下，用 MBP 和 γ[32P]ATP 进行测定。反应用 SDS 上样缓冲液终止，经 SDS-PAGE 分离，并用磷成像法进行分析 [1]。 激酶选择性分析：使用 1 μM AZ3146，通过商业服务 (SelectScreen) 对 50 种激酶进行测定。计算每种激酶的抑制百分比[1]。 Meso Scale Discovery (MSD) 电化学发光测定：用AZ3146（0 至 32 μmol/L）处理表达 Myc 标记的 MPS1 构建体的细胞，并使用先前描述的基于荧光的激酶测定法定量 T33/S37 处的 MPS1 自磷酸化（Naud 等人，2013）。野生型和突变型MPS1的IC50值由剂量反应曲线计算得出[2]。 重组全长MPS1蛋白（野生型和突变型）经制备后，在AZ3146存在下，采用类似的体外激酶活性测定方法，以MBP和ATP为底物，通过放射自显影或闪烁计数法定量磷酸化，测定其激酶活性[2]。 AZ3146的非细胞酶活性测定通常包括使用纯化酶和肽底物测定其对Mps1激酶活性的抑制作用。在这些测定中，该化合物的IC50值约为35 nM。选择性测定用于评估其对其他激酶（例如Cdk1和Aurora激酶B）的活性。这些测定对于表征该化合物作为Mps1抑制剂的效力和选择性至关重要。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测：将HCT116细胞用AZ3146（0–16 μmol/L）处理4天，并使用CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒检测细胞活力。14天后，使用磺基罗丹明B（SRB）比色法评估克隆形成情况[2]。
流式细胞术：将细胞固定于70%乙醇中，用碘化丙啶和RNase染色，并在流式细胞仪上分析AZ3146处理（例如，1和2 μmol/L处理24小时）后的细胞周期分布[2]。有丝分裂指数测定中，细胞先用抗MPM2抗体染色，再用FITC标记的二抗染色[1]。 免疫荧光：HeLa或HCT116细胞用1%甲醛固定，用PBS-Triton X-100透化，然后用抗MAD2、CDC20、MPS1、磷酸化MPS1 (pT33/pS37)、ACA（着丝粒）或CENP-E的一抗染色，再用荧光标记的二抗和DAPI染色。图像在共聚焦显微镜下采集[1][2]。 延时显微镜：表达组蛋白H2B-mCherry的HeLa或HCT116细胞用AZ3146处理（HCT116细胞为2 μmol/L，HeLa细胞为2 μM），并在37°C的加湿CO2培养箱中，使用带有电动载物台的倒置显微镜进行成像。测定有丝分裂时间[1][2]。 磷酸化标签凝胶电泳：将间期细胞或诺考达唑阻滞细胞用MG132±2 μM AZ3146处理2小时后，提取Mps1蛋白，并在含有25 μM磷酸化标签和50 μM MnCl2的SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离，随后进行免疫印迹分析[1]。 细胞增殖实验（HCC）：将BEL-7404和SMMC-7721细胞接种于96孔板（3×10^3个细胞/孔），用不同浓度的AZ3146（0.1–100 μM）处理3–4天，并使用CCK-8试剂测定细胞活力。 IC50 值采用 Origin 8.0 软件计算 [3]。 Transwell 迁移实验：将 HCC 细胞转染 TTK 或 siRNA 后，饥饿过夜，然后将 1×10⁵ 个细胞悬浮于无血清培养基中，加入到上室（孔径 8 μm），下室加入 10% FBS。48 小时后，固定下室膜上的细胞，用结晶紫染色，并计数 [3]。 软琼脂克隆形成实验：将转染 TTK 或 siRNA 的 HCC 细胞接种于含有 1% 基础琼脂和 0.5% 顶层琼脂的 24 孔板中（2×10³ 个细胞/孔）。 21天后，对菌落进行计数[3]。 xCELLigence实时细胞分析：将HCC细胞用质粒或siRNA转染24小时后，以7.5×10^3个细胞/孔的密度接种于E-plate板中，并使用RTCA-DP仪器每60分钟监测一次，持续6天。记录细胞指数值[3]。 使用癌细胞系进行AZ 3146的体外细胞实验，以评估其对有丝分裂进程和细胞活力的影响。用该化合物处理细胞，并通过免疫荧光显微镜评估其对纺锤体组装检查点、染色体排列和有丝分裂进程的影响。使用MTT或类似方法测量细胞活力。这些实验对于确认其作用机制至关重要。 |
| 动物实验 |
AZ 3146 的体内动物研究通常会采用小鼠异种移植瘤模型来评估其抗肿瘤疗效。研究人员会用该化合物治疗荷瘤小鼠，并监测肿瘤生长情况。然而，目前已发表的关于 AZ 3146 的具体体内研究数据并不详尽。作为一种研究性化合物，其体内疗效需要在临床前模型中进行验证。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
AZ 3146 的分子量为 433.50 g/mol，可溶于 DMSO。作为一种研究化合物，其药代动力学性质，例如吸收、分布、代谢和排泄，尚未得到充分研究。该化合物仅供研究使用。其溶解度和稳定性是其在体外和体内研究中应用的重要因素。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于AZ 3146是一种研究用化合物，因此其全面的毒理学数据有限。该化合物仅供实验室使用，不得用于人体。与所有研究用化学品一样，处理AZ 3146时应采取适当的安全预防措施。其体内安全性尚未得到充分表征。临床开发需要进行标准的毒理学评估。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
AZ3146是一种用于研究有丝分裂中Mps1功能的化学探针；它能够解析Mad2募集的两步机制，表明Mps1活性对于有丝分裂开始时Mad1的定位是必需的，但对于维持Mad1的定位并非必需，并且持续参与O-Mad2的募集[1]。AZ3146已被用于构建HCT116细胞的获得性耐药模型，鉴定出MPS1激酶结构域中的点突变（p.S611G、p.I531M、p.M600T、p.Y568C、p.C604W），这些突变赋予细胞对其他MPS1抑制剂的交叉耐药性，结构研究揭示了空间位阻机制[2]。 AZ3146 还表明，预先存在的耐药突变天然存在于癌细胞和正常细胞中，这已通过液滴数字PCR检测到（例如，在亲代HCT116细胞中p.S611G突变的频率为0.94%）[2]。在肝细胞癌中，AZ3146 治疗证实TTK是一个潜在的治疗靶点，因为抑制TTK可减少HCC细胞的生长，并且该化合物对TTK具有特异性[3]。
AZ 3146是一种强效且选择性的Mps1激酶抑制剂，IC50约为35 nM。它干扰染色体排列，绕过纺锤体组装检查点，并抑制Mad1、Mad2和CENP-E向着丝粒的募集。它具有潜在的抗癌活性。AZ 3146目前尚未获批上市，仅作为研究化合物用于研究有丝分裂检查点信号传导和癌症。 |
| 分子式 |
C24H32N6O3
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|---|---|---|
| 分子量 |
452.55
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| 精确质量 |
452.253
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| CAS号 |
1124329-14-1
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
56973724
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
621.0±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
329.4±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.631
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| LogP |
2.76
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| tPSA |
86.44
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
669
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
YUKWVHPTFRQHMF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H32N6O3/c1-28-12-10-17(11-13-28)33-18-8-9-19(21(14-18)32-3)26-23-25-15-20-22(27-23)30(24(31)29(20)2)16-6-4-5-7-16/h8-9,14-17H,4-7,10-13H2,1-3H3,(H,25,26,27)
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| 化学名 |
9-cyclopentyl-2-(2-methoxy-4-(1-methylpiperidin-4-yloxy)phenylamino)-7-methyl-7H-purin-8(9H)-one
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2097 mL | 11.0485 mL | 22.0970 mL | |
| 5 mM | 0.4419 mL | 2.2097 mL | 4.4194 mL | |
| 10 mM | 0.2210 mL | 1.1049 mL | 2.2097 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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