| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1) – binds to latent PAI-1 with KD of 0.29 μM (ITC at 35°C) and 0.19 μM (SPR at 25°C); no measurable binding to active PAI-1 [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
在显色底物测定中，AZ3976 对 PAI-1 的抑制作用 IC50 为 26 μM，且在 100 μM 浓度下对 tPA 单独使用无抑制作用 [1]。
在添加 PAI-1 的人血浆凝块溶解试验中，AZ3976 表现出促纤溶活性，IC50 为 16 μM [1]。 在显色底物测定中，当浓度为 100 μM 时，AZ3976 在等摩尔浓度的玻连蛋白 (VN) 存在下不抑制 PAI-1 [1]。 在显色底物测定中，100 μM 浓度的 AZ3976 对大鼠 PAI-1 无抑制作用 [1]。 |
| 酶活实验 |
高通量筛选显色法：将化合物预先分装于384孔板中。加入10 μL浓度为48 nM的PAI-1（终浓度12 nM）测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4，100 mM NaCl，0.01% Tween 20，0.1% BSA），室温孵育15分钟。然后加入20 μL浓度为16 nM的tPA（终浓度8 nM），继续孵育20分钟。随后加入10 μL显色底物Pefachrome tPA（终浓度250 μM）。分别在0分钟和25分钟时测定405 nm处的吸光度，以确定残余tPA活性。以diaplasin（最大效应）和DMSO（最小效应）为参照计算效应百分比。 IC50 值采用四参数 S 型曲线拟合的非线性回归计算 [1]。
等温滴定量热法 (ITC)：滴定在 35°C 下进行。对于潜伏型 PAI-1，将 50 μM 糖基化潜伏型 PAI-1（溶于 50 mM 磷酸钠缓冲液，pH 7.4，含 100 mM NaCl 和 2% DMSO）用 1 mM AZ3976 进行滴定，每次滴定 1 μL，共 20 次。对于活性 PAI-1 制剂（比活性 75%），将 45 μM 活性 PAI-1 用 1 mM AZ3976 进行滴定，每次滴定 0.5 μL，共 20 次。每次滴定间隔 90 秒。数据拟合到单一位点结合模型，以获得KD、ΔG、ΔH、-TΔS和化学计量比(n)[1]。 表面等离子共振(SPR)直接结合：将AZ3976从100 mM DMSO储备液稀释到PBSTD缓冲液（50 mM磷酸钠，100 mM NaCl，pH 7.4，0.005% Tween 20，1% DMSO）中，浓度范围为20 μM至27.4 nM（3倍稀释）。将该化合物以30 μL/min的流速注入到固定在CM5传感器芯片上的糖基化潜在或活性PAI-1上，温度为25°C。结合过程监测90秒，解离过程监测4分钟。无需再生。采用 1:1 结合模型拟合数据以确定 kon、koff、KD 和 Rmax [1]。 SPR 竞争实验用于研究潜伏期转变：将活性 PAI-1 (10 nM) 与不同浓度的 AZ3976 在 20°C 下预孵育不同时间，然后注入固定化的玻连蛋白 (VN) 或捕获的 tPA。测量初始结合速率（前 10 秒内的 ΔRU/Δt）随孵育时间的变化。活性 PAI-1 结合的衰减符合单指数函数。反应速率常数随化合物浓度线性增加，在 20°C 下得到二级反应速率常数为 14 M⁻¹ s⁻¹ [1]。 使用抗体 H4B3（特异性识别潜伏型非糖基化 PAI-1）进行表面等离子共振 (SPR) 分析：将非糖基化活性 PAI-1 (10 nM) 与 20 μM AZ3976 在 20°C 下孵育 1 小时，然后注入到捕获的 H4B3 抗体上。化合物孵育后，PAI-1 与 H4B3 的结合显著增加，这与 tPA 活性的丧失相关 [1]。 X 射线晶体学：将潜伏型 PAI-1 与 AZ3976 共结晶，并使用 PDB 代码 1DVN 通过分子置换法解析了 2.4 Å 分辨率的结构。配体结合于由α螺旋A、B、D、E、β折叠1A和2A以及连接环构成的空腔内。关键相互作用包括与Tyr-37、Asp-95（三个氢键）、Arg-76的氢键，以及与Tyr-79的π-π堆积相互作用[1]。 |
| 细胞实验 |
人血浆凝块溶解试验：将血浆解冻后于 37°C 孵育约 1 小时。将化合物分装于 96 孔板中（10 个浓度点，2 倍稀释，最高终浓度 82 μM）。加入 45 μL 试验缓冲液（10 mM Hepes，pH 7.4，0.15 M NaCl，33.3 mM CaCl₂）。然后加入 45 μL 含有 tPA（终浓度 1.2 nM）和 PAI-1（终浓度 0.65 nM）的血浆以启动反应。在 37°C 下，每隔 2 分钟监测 405 nm 波长处的吸光度，持续 10 小时，以监测纤维蛋白的形成。凝块溶解时间定义为负斜率振幅减半所需的时间减去正斜率振幅减半所需的时间。最大效应（100%）为未添加 PAI-1 时的裂解时间，最小效应（0%）为未添加化合物时的裂解时间。IC50 通过非线性回归计算 [1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AZ3976是一种小分子PAI-1抑制剂，通过高通量筛选发现。它是一种中性分子，具有良好的成药性[1]。
作用机制：AZ3976不与活性PAI-1结合，但能以亚微摩尔级的亲和力与潜伏型PAI-1结合。它能加速活性PAI-1的潜伏期转变，推测其机制是通过与一种与活性PAI-1处于平衡状态的PAI-1前潜伏期形式结合。该化合物在 20°C 下使活性 PAI-1 向潜伏型 PAI-1 的转化率提高了约 23 倍（t₁/₂ 从缓冲液中的 15 小时降至 20 μM AZ3976 存在下的 40 分钟）[1]。 物种特异性：在显色测定中，100 μM AZ3976 对大鼠 PAI-1 没有影响，并且人与大鼠之间结合配体 5 Å 范围内的五个残基存在差异 [1]。 玻连蛋白保护作用：玻连蛋白可保护 PAI-1 免受 AZ3976 的中和作用；该化合物在显色测定中不抑制 PAI-1-VN 复合物，在 SPR 实验中也不破坏该复合物 [1]。 结合位点：结合口袋位于 α-螺旋 D 和 β-链 2A 之间，距离糖基化位点 Asn-209 和 Asn-265 约 20 Å。该区域被称为柔性连接区[1]。 与其他抑制剂的比较：与其他小分子PAI-1抑制剂（例如PAI-039、AR-H029953xx）不同，AZ3976优先结合潜伏型PAI-1，并通过加速潜伏期转变发挥抑制作用[1]。 潜在的治疗意义：由于血浆中大部分循环PAI-1与VN结合（VN可保护PAI-1免受AZ3976的影响），因此该化合物可能对细胞内或血小板来源的PAI-1（未与VN结合）更有效。长期给药可能在PAI-1释放前使其在血小板中储存时失活[1]。 |
| 分子式 |
C15H19N5O3
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|---|---|
| 分子量 |
317.34
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| 精确质量 |
317.148
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| CAS号 |
1418747-15-5
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| PubChem CID |
135566649
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.42±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
490.3±55.0 °C
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| LogP |
0.5
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| tPSA |
95.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
522
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC(C)(C)OC(=O)N1CC(C1)NC2=NC3=C(C=CC=N3)C(=O)N2
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| InChi Key |
CKUDSTVQYFRZJW-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H19N5O3/c1-15(2,3)23-14(22)20-7-9(8-20)17-13-18-11-10(12(21)19-13)5-4-6-16-11/h4-6,9H,7-8H2,1-3H3,(H2,16,17,18,19,21)
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| 化学名 |
1-Boc-3-(4-Oxo-3,4-dihydro-pyrido[2,3-d]pyrimidin-2-ylamino)-azetidine
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| 别名 |
AZ-3976 AZ 3976 AZ3976
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~315.12 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1512 mL | 15.7560 mL | 31.5119 mL | |
| 5 mM | 0.6302 mL | 3.1512 mL | 6.3024 mL | |
| 10 mM | 0.3151 mL | 1.5756 mL | 3.1512 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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