Azadirachtin B

别名: Azadirachtin B; Azadirachtinol deacetyl; Azadirachtin-B; azadirachtin B; 106500-25-8; Deacetylazadirachtinol; AZADIRACHTIN B(SH); 3-Tigloylazadirachtol; Azadirachtinol deacetyl; UNII-X5T1RMZ28I; X5T1RMZ28I; Deacetylazadirachtinol 印楝素B;印楝素 B
目录号: V9410 纯度: ≥98%
印楝素 B 是从印楝种子仁中提取的柠檬苦素类化合物。
Azadirachtin B CAS号: 106500-25-8
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
印楝素 B 是从印楝种子仁中提取的柠檬苦素类化合物。印楝素 B 增加碱性磷酸酶 (ALP) 活性并刺激成骨细胞分化。 Azadirachtin B 对 Epstein-Barr 病毒早期抗原 (EBV-EA) 具有活性。印楝素 B 具有杀虫、杀线虫、抗癌、抗炎、抗病毒和成骨特性。
生物活性&实验参考方法
靶点
Antiviral; Epstein-Barr virus early antigen (EBV-EA); anticancer, insecticidal, nematocidal, anti-inflammatory
体外研究 (In Vitro)
用印楝素 B(1 pM-100 µM;48 小时)处理的成骨细胞在 10 nM 和 100 pM 剂量下增殖最多 [1]。与对照相比,印楝素B在10nM时使RunX-2表达增强约2.5倍,在10nM和100pM时使ALP表达增强约2.8倍,在10nM时使OCN表达增强约2.5倍。次[1]。小菜蛾 (Plutella xylostella) 对印楝素 B(化合物 4)有毒,92 小时内的 LD50 为 4.85-1.06 µg/g 体重 [2]。 Epstein-Barr 病毒早期抗原 (EBV-EA) 被十四烷酰佛波醇 13 乙酸酯 (TPA) 激活,并被印楝素 B(化合物 21)中度或强效抑制(IC50 摩尔比为 384/32 pmol TPA)[3]。
体内研究 (In Vivo)
使用小鼠皮肤肿瘤测试化合物21(口服)印苦楝素B的抗肿瘤启动作用,所述小鼠皮肤肿瘤使用TPA作为促进剂和过氧亚硝酸盐(ONOO-;PN)作为引发剂分两个阶段产生。研究结果表明,有较强的抑制活性[3]。
酶活实验
碱性磷酸酶活性(ALP)测定:[1]
将成骨细胞接种于96个孔培养板中孵育,达到50-70%的融合度。然后更换培养基,用不同浓度化合物的分化培养基孵育细胞48h。48h后,更换培养基,PBS洗涤,-800C冷冻。对于ALP测定,我们使用我们以前发表的方案。在405nm处测定吸光度[1]。
矿化度测定:[1]
成骨细胞用含有1%青霉素/链霉素50µg/ml抗坏血酸和10 mM β-甘油磷酸酯的α-MEM化合物和培养液在370C下处理。12 d后,4%多聚甲醛固定细胞30 min, 40mM茜素红S染色。钙沉积结节呈红色。通过测量405nM处的吸光度来确定钙沉淀的提取率[1]。
RNA制备与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR): [1]
用TRIzol试剂分离细胞总RNA,用RevertAidcDNA合成试剂盒进行RT-PCR,总RNA为2µg,反应体积为20µl。GAPDH作为内控基因(内控基因)。正义和反义寡核苷酸引物的设计基于Universal ProbeLibrary上已发表的cDNA序列。Q-PCR采用Light Cycler 480扩增cDNA。引物描述如表1所示。
细胞实验
细胞增殖测定[1]
细胞类型: 成骨细胞
测试浓度: 1 pM、100 pM、10 nM、1 µM、100 µM
孵育持续时间:48小时
实验结果:成骨细胞在10 nM和100 pM浓度下表现出最高的增殖能力。
从印楝种子提取物中分离得到31个北三萜,其中28个为柠檬酮(1-28),3个为降解柠檬酮(29-31),1个为二萜(32)。其中6个为新化合物,其结构分别为15-羟基氮杂二酮(3)、7-苯甲酰-17-羟基苯甲酚(5)、23-脱氧氮杂二酚内酯(12)、limocin E(13)、23-epilimocin E(14)和7-乙酰氧基-3-氧异柯帕-1,13-二烯-15-酸(32)。在对化合物1-32对B16黑色素瘤细胞黑色素生成的评价中,化合物20、26、27、29和31表现出明显的抑制作用(25微克/毫升时黑色素含量降低74-91%),对细胞没有或几乎没有毒性。7种化合物1、6、9、10、18、20和26对小鼠TPA诱导炎症(1 μ g/耳)的抑制作用,除化合物26外,其余化合物均表现出显著的抗炎活性(ID(50)值为0.09 ~ 0.26 mg/耳)。此外,32种化合物对TPA诱导的eb病毒早期抗原(EBV-EA)活化均表现出中等或强抑制作用(IC(50)值为230 ~ 501 mol /32 pmol TPA)。此外,印楝素B(21)对过氧亚硝酸盐(ONOO-)诱导小鼠皮肤肿瘤两期癌变的抑瘤活性评价;PN)作为引发剂,TPA作为启动子,这表现出明显的抑制活性。[3]
动物实验
体内剂量测定:将15只1~2日龄的幼鼠随机分为5组,每组4只,连续3天皮下注射化合物(0.5、1.0、5.0和10.0 mg/kg/天)或等体积的赋形剂(生理盐水)。治疗结束后,处死幼鼠,取出每只幼鼠的颅骨,轻轻刮除附着的组织。提取总RNA,并按照先前描述的方法[1]进行ALP、RunX-2和COL1的定量PCR检测。
参考文献

[1]. Azadirachta indica triterpenoids promote osteoblast differentiation and mineralization in vitro and in vivo. Bioorg Med Chem Lett. 2016 Aug 1;26(15):3719-24.

[2]. Azadirachtin derivatives from seed kernels of Azadirachta excelsa. J Nat Prod. 2005 Jul;68(7):1047-50.

[3]. Melanogenesis inhibitory, anti-inflammatory, and chemopreventive effects of limonoids from the seeds of Azadirachta indicia A. Juss. (neem). J Oleo Sci. 2009;58(11):581-94.

其他信息
已有报道称,印度楝树(Azadirachta indica)和高大楝树(Azadirachta excelsa)中含有去乙酰楝素,并有相关数据可供参考。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C33H42O14
分子量
662.685
精确质量
662.257
元素分析
C, 59.81; H, 6.39; O, 33.80
CAS号
106500-25-8
PubChem CID
21725521
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.5±0.1 g/cm3
沸点
780.5±60.0 °C at 760 mmHg
闪点
246.6±26.4 °C
蒸汽压
0.0±6.1 mmHg at 25°C
折射率
1.628
LogP
1.31
tPSA
189
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
14
可旋转键数目(RBC)
8
重原子数目
47
分子复杂度/Complexity
1490
定义原子立体中心数目
16
SMILES
C/C=C(\C)/C(=O)O[C@@H]1C[C@@H]([C@]23CO[C@@H]([C@H]2[C@]([C@@H]([C@H]4[C@H]3[C@@]1(CO4)C(=O)OC)O)(C)[C@@]56[C@@H]7C[C@H]([C@@]5(O6)C)[C@]8(C=CO[C@H]8O7)O)C(=O)OC)O
InChi Key
USRBWQQLHKQWAV-ZGKQVQOISA-N
InChi Code
InChI=1S/C33H42O14/c1-7-14(2)24(36)45-17-11-16(34)30-12-44-20(25(37)40-5)21(30)28(3,23(35)19-22(30)31(17,13-43-19)26(38)41-6)33-18-10-15(29(33,4)47-33)32(39)8-9-42-27(32)46-18/h7-9,15-23,27,34-35,39H,10-13H2,1-6H3/b14-7+/t15-,16+,17-,18+,19-,20+,21+,22-,23-,27+,28+,29+,30-,31+,32+,33+/m1/s1
化学名
dimethyl (2aR,2a1R,3S,4S,4aR,5S,7aS,8S,10R,10aS)-3,8-dihydroxy-4-((1aR,2S,3aS,6aS,7S,7aS)-6a-hydroxy-7a-methyl-3a,6a,7,7a-tetrahydro-2,7-methanofuro[2,3-b]oxireno[2,3-e]oxepin-1a(2H)-yl)-4-methyl-10-(((E)-2-methylbut-2-enoyl)oxy)octahydro-1H,7H-naphtho[1,8-bc
别名
Azadirachtin B; Azadirachtinol deacetyl; Azadirachtin-B; azadirachtin B; 106500-25-8; Deacetylazadirachtinol; AZADIRACHTIN B(SH); 3-Tigloylazadirachtol; Azadirachtinol deacetyl; UNII-X5T1RMZ28I; X5T1RMZ28I; Deacetylazadirachtinol
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~75.45 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.5090 mL 7.5450 mL 15.0900 mL
5 mM 0.3018 mL 1.5090 mL 3.0180 mL
10 mM 0.1509 mL 0.7545 mL 1.5090 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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