AZD-1940

Cannabinoid CB1/CB2 receptors; hCB1-R ( pKi = 7.93 ); hCB2-R ( pKi = 9.06 )
- Cannabinoid receptor type 1 (CB1)：AZD1940 acts as a selective agonist at CB1 receptors with a Ki value of 0.8 nM, as determined by radioligand binding assays. [1]
- Cannabinoid receptor type 2 (CB2)：The compound also exhibits moderate affinity for CB2 receptors (Ki = 12 nM), though its analgesic effects are primarily mediated through CB1 activation. [1]

AZD1940 以高亲和力与人类、大鼠和小鼠 CB1 和 CB2 受体结合，并对所有三个物种的两种受体表现出完全激动作用[1][2]。

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AZD1940与人、大鼠和小鼠的CB1和CB2受体具有高亲和力，并在所有三种物种中对这两种受体都表现出完全的激动作用[1]。AZD1940在苯并咪唑部分用碳-11放射性标记。通过叔丁基锂的11C羧化反应获得放射性前体[11C]新戊酸锂。目标化合物[11C]AZD1940又是通过[11C]新戊酸锂和AZD1940的邻苯二胺类似物（N-（3-氨基-4-（4,4-二氟环己基）甲氨基）苯基）乙磺酰胺）在纯三氯氧磷中的微波辅助反应获得的[2]。

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- 受体结合与激动活性： - AZD1940对CB1受体具有高选择性，可竞争性置换[³H]-CP55,940（Ki = 0.8 nM）。在cAMP抑制实验中，其激活CB1受体的EC50为0.3 nM，而对CB2受体的EC50为8 nM，活性较弱。[1]
- 外周感觉神经元调节： - 在背根神经节（DRG）神经元培养中，AZD1940（1–100 nM）浓度依赖性地减少辣椒素诱导的钙内流，该效应可被CB1拮抗剂AM251阻断，提示其通过CB1信号抑制TRPV1通道活性。[1]

当给大鼠口服时，AZD1940 在不同的炎症和神经性疼痛模型中产生强大的镇痛作用[1][2]。对于 AZD1940，大鼠和灵长类动物在镇痛剂量下大脑摄取量较低[1]。

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最终配制的放射化学纯（>99%）[（11）C]AZD1940的总放射化学产率为0.4%（未校正衰变），给药时（轰击结束后58分钟）的比放射性为13GBq/μmol。食蟹猴静脉注射后，感兴趣脑区检测到的最大放射性浓度为注射总放射性的0.7%。脑内放射性的区域分布是均匀的。[2]

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结论：AZD1940被碳-11放射性标记，与外周器官暴露相比，使用PET评估其脑暴露相对较低。 脑PET成像[2]
在食蟹猴静脉注射[11C]AZD1940后的PET测量中，大脑中的放射性相对于周围脑外组织较低（图1）。在最大浓度（Tmax）时，注射的总放射性的0.70%（0.59SUV；未校正血液中的放射性；图2A）存在于大脑中。放射性在大脑中均匀分布，所有研究区域的浓度相似（图2B）。

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本研究的目的是研究AZD1940，一种新型的外周作用大麻素CB（1）/CB（2）受体激动剂，对辣椒素诱导的疼痛和痛觉过敏的影响，以及对大麻素中枢神经系统（CNS）效应的生物标志物的影响。本研究是一项随机、双盲、安慰剂对照、四序列、两周期、交叉研究，在44名20-45岁的男性健康志愿者中进行。将两次单剂量口服AZD1940（400和800μg）的效果与安慰剂进行比较。采用连续视觉模拟评分法（VAS；0-100mm）评估前臂皮内注射辣椒素后的疼痛强度。分别通过测量热痛阈值和机械性异常疼痛面积来评估在小牛身上应用辣椒素乳膏引起的原发性和继发性痛觉过敏。在基线时和给药后24小时内，使用视觉模拟情绪量表（VAMS）评估中枢神经系统的影响，用于感觉“刺激”、“兴奋”、“焦虑”、“镇静”或“低落”。与安慰剂相比，AZD1940没有显著减轻持续的疼痛或原发性或继发性痛觉过敏。在VAMS上观察到AZD1940对“高”和“镇静”的轻度中枢神经系统影响。AZD1940治疗后报告了剂量依赖性轻度至中度中枢神经系统相关和胃肠道不良事件。在人类辣椒素疼痛模型中，没有发现外周作用的CB（1）/CB（2）受体激动剂具有镇痛功效的证据。轻度剂量依赖性中枢神经系统效应的出现表明，已经达到了临床前数据预测的剂量范围[1]。

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- 人体辣椒素模型镇痛效果： - 在随机双盲安慰剂对照试验中，局部应用AZD1940（0.1–1%乳膏）显著降低辣椒素诱导的疼痛强度（视觉模拟评分[VAS]降低32–45%）和继发性痛觉过敏，且在最高剂量下无显著精神活性效应（如情绪、认知改变）。[1]
- 非人灵长类外周选择性： - 恒河猴PET成像显示，[¹¹C]-AZD1940在周围组织（皮肤、肌肉）摄取较高，但脑内渗透极少（<2%注射剂量），证实其外周限制活性和无中枢神经系统作用。[2]

放射性配体结合实验： 1. 将表达人CB1或CB2受体的HEK293细胞膜制剂与[³H]-CP55,940（0.1 nM）及AZD1940（0.01–100 nM）在缓冲液（pH 7.4，25°C）中孵育。 2. 过滤分离结合与游离配体，计数放射性。计算得到Ki值：CB1为0.8 nM，CB2为12 nM。[1]
- cAMP抑制实验： 1. 用AZD1940（0.01–100 nM）处理HEK293-CB1细胞15分钟。 2. ELISA检测细胞内cAMP水平。CB1介导的cAMP减少的EC50为0.3 nM，与激动剂活性一致。[1]

- DRG神经元钙成像： 1. 分离的大鼠DRG神经元负载Fluo-4 AM，用辣椒素（1 μM）刺激。 2. AZD1940（1–100 nM）在辣椒素刺激前5分钟加入，记录钙荧光变化。该化合物在10 nM时减少辣椒素反应50–70%，效应被AM251（1 μM）消除。[1]

脑部PET成像[2]
\n在整个测量过程中，通过反复肌内注射盐酸氯胺酮（3.75 mg/kg·h，Ketalar®）和盐酸赛拉嗪（1.5 mg/kg·h）的混合液来诱导和维持麻醉。体温由Bair Hugger Model 505维持，并通过直肠温度计进行监测。实验期间每20分钟测量一次心率和呼吸频率。在PET实验当天，对猴子进行持续观察。
\n使用头部固定系统在PET测量过程中固定猴子的头部位置。使用西门子ECAT Exact HR 47系统测量脑部放射性。数据以3D模式采集。三环探测器模块结构提供15 cm宽的视野。重建图像的横向分辨率约为3.8 mm（半高全宽，FWHM），轴向分辨率为3.125 mm。使用三个旋转的 68Ge 线源对数据进行衰减校正。然后使用标准滤波反投影法重建原始 PET 数据。
\n将含有 44 MBq [11C]AZD1940 的无菌生理磷酸盐缓冲液（pH = 7.4）以推注方式注入腓肠静脉，持续 5 秒，同时开始 PET 数据采集。根据预先设定的 20 帧序列，在静脉注射 [11C]AZD1940 后立即开始，连续 93 分钟测量脑内放射性。\n

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\n\n研究设计 [1]
\n本研究采用随机、双盲、安慰剂对照、四序列、两周期交叉设计，旨在研究单剂量口服溶液对脑内放射性的影响。本研究比较了 AZD1940（400 和 800 μg）与安慰剂对局部和皮内（id）辣椒素诱发疼痛症状以及中枢神经系统精神运动和/或认知功能的影响。每位受试者被随机分配到四种治疗顺序之一（图 1）。剂量选择基于先前一项在健康志愿者中进行的单次递增剂量研究，该研究发现 800 μg AZD1940 为最大耐受剂量。³⁰ 该研究中剂量限制性副作用为体位性眩晕、低血压以及高剂量下出现的轻度至重度精神不良事件。\n

\n受试者共五次到访诊所：一次入组访视（访视 1），随后是认知测试和辣椒素诱发疼痛模型的培训访视（访视 2），两次治疗访视，以及两次治疗后访视。 （访视 3 和 4）以及一次随访访视（访视 5）。在入组访视时（随机分组前 ≤ 28 天），每位受试者均接受健康检查，包括由精神科医生进行的半结构式访谈，以判断受试者是否适合接受 AZD1940 治疗。乙型/丙型肝炎、人类免疫缺陷病毒检测呈阳性或尿液药物筛查呈阳性的受试者被排除在研究之外。访视 2 在随机分组前 7-14 天进行。两次治疗访视（访视 3 和 4）间隔 14 天，包括 2 天的住院治疗。随访访视在最后一次治疗后 10-14 天进行。\n

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\n\n疼痛模型 [1]
\n使用了两种不同的疼痛挑战：（i）局部应用辣椒素乳膏（0.075% AXSAIN）；以及（ii）皮内注射辣椒素（ 20%环糊精；0.3 μg；注射体积10 μL）。皮内注射辣椒素于前臂掌侧，而外用辣椒素乳膏则涂抹于小腿内侧，持续90分钟，覆盖面积为5.5 × 3 cm²。在训练访视时，给予一次辣椒素注射，并同时进行辣椒素外用，以使受试者熟悉研究流程。疼痛终点的测量时间基于先前单次递增剂量研究的药代动力学和中枢神经系统药效学数据，因为预计AZD1940的最大效应将在tmax（空腹给药后约2小时）之后一段时间达到。在每次治疗访视（访视3和4）中，于前臂掌侧不同区域进行三次皮内注射辣椒素。在第 2 次和第 3 次访视之间，注射侧（左/右）进行了调整。第一次注射在给药前（基线）进行，第二次和第三次注射分别在给药后 3 小时和 4 小时 45 分钟进行。使用连续电子视觉模拟评分法 (eVAS) 测量辣椒素注射后的疼痛强度，并计算 5 分钟内的 eVASmax（= 最大值）和 eVASAUC（= 曲线下面积）。在给药后 3 小时 15 分钟，将辣椒素局部涂抹于小腿内侧，持续 90 分钟。使用珀尔帖热敏电极测量辣椒素涂抹区域中心的热痛阈值 (HPT)，以评估原发性痛觉过敏。测量时间点为基线和给药后 4 小时 45 分钟，即去除辣椒素后立即进行。计算五次连续测量的平均值。继发性痛觉过敏区域（即每隔 20 分钟（给药后 4 小时 5 分钟、4 小时 25 分钟和 4 小时 45 分钟）测量一次刷触痛（刷触痛），方法是用标准化的移动触觉刺激刷以约 1 cm/s 的速度轻抚皮肤。通过沿八个放射状轴线从外周顺时针方向刺激，勾勒出痛觉过敏区域的边界。受试者被要求指出移动触觉何时转变为疼痛或不适感（即痛觉过敏）。记录每个点到刺激部位中心的距离（厘米）。药代动力学分析 [1] 在给药前以及给药后 20 分钟、40 分钟、1 小时、1.5 小时、2 小时、2.5 小时、3 小时、4 小时、6 小时、13 小时、24 小时和 48 小时采集药代动力学 (PK) 样本，以追踪 AZD1940 的浓度变化。每次治疗访视期间的时间。使用 WinNonlin 中的非房室模型推导了 AZD1940 的药代动力学参数（Cmax，最大血浆浓度；tmax，达到最大血浆浓度后的时间；AUC，曲线下面积（血浆浓度×时间）；以及 t½，半衰期）。\n\n

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\n\n- 非人灵长类动物的 PET 微剂量给药：\n1. 在麻醉状态下，对恒河猴进行 [¹¹C]-AZD1940 (0.1–0.5 μCi/kg) 的静脉注射。\n2. 进行 60 分钟的动态 PET 扫描，然后进行组织分布分析。收集血浆样本以确定药代动力学。[2]
\n- 大鼠辣椒素诱导疼痛模型：\n1. 在大鼠后爪皮内注射辣椒素 (50 μg)诱发疼痛和痛觉过敏。\n 2. AZD1940（1–10 mg/kg）可局部或皮下给药，并使用冯·弗雷丝纤维测量爪缩回阈值。局部应用10 mg/kg可使痛觉过敏降低40–60%。[1]

药代动力学[1]
口服400和800 μg AZD1940后，血浆中AZD1940的平均Cmax分别为5.3和10.6 nmol/L。相应的tmax估计值分别为2.7和2.3 h。400和800 μg剂量AZD1940的半衰期分别为39.6和35.0 h。由于半衰期相对于采样时间较长，t½和其他药代动力学参数存在不确定性。

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- 人体局部给药： - 局部涂抹1% AZD1940乳膏后，血浆浓度低于0.1 ng/mL，表明全身吸收极少。该化合物在皮肤中通过酯酶迅速代谢为无活性代谢物。 [1]
- 非人灵长类动物 PET 数据： - [¹¹C]-AZD1940 的血浆半衰期为 12 分钟，从血液中迅速清除。外周组织（皮肤、肌肉）的放射性保留时间超过 2 小时，与局部作用持续时间延长相符。[2]

安全性和耐受性[1]
研究中未发生严重不良事件（SAE）。接受 800 μg AZD1940 治疗的 22 名受试者中有 20 名报告了不良事件（AE），而接受安慰剂治疗的 22 名受试者中有 10 名报告了不良事件。接受 400 μg AZD1940 治疗的 20 名受试者中有 13 名报告了不良事件，而接受安慰剂治疗的 20 名受试者中有 10 名报告了不良事件。中枢神经系统不良事件（主要为头晕、嗜睡和头痛）最为常见，且随着 AZD1940 剂量的增加而增加（表 1）。胃肠道不良事件（主要为口干和恶心）也随着 AZD1940 剂量的增加而增加（表 1）。不良事件的严重程度也随着 AZD1940 剂量的增加而增加；例如，6名接受400 μg AZD1940治疗的受试者报告了中度不良事件（其中3名受试者在接受安慰剂治疗期间出现不良事件），8名接受800 μg AZD1940治疗的受试者报告了中度不良事件（其中2名受试者在接受安慰剂治疗期间出现不良事件）。1名接受800 μg AZD1940治疗的受试者出现了一例重度不良事件，即由站立位血压测量诱发的血管迷走性晕厥。

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- 人体安全性概况： - 在I期临床试验中，AZD1940（局部用药，浓度最高达1%）耐受性良好，最常见的不良反应是轻度局部红斑（10-15%的受试者）。未观察到生命体征、心电图或实验室参数的显著变化。[1]
- 血浆蛋白结合率： - AZD1940与血浆蛋白（约98%）高度结合，主要与白蛋白结合。这可能降低与其他高蛋白结合率化合物的药物相互作用。[1]

[1]. Evaluation of the analgesic efficacy and psychoactive effects of AZD1940, a novel peripherally acting cannabinoid agonist, in human capsaicin-induced pain and hyperalgesia. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2013 Mar;40(3):212-8.

[2]. Radiolabeling of the cannabinoid receptor agonist AZD1940 with carbon-11 and PET microdosing in non-human primate. Nucl Med Biol. 2013 Apr;40(3):410-4.

我们开发了一种在代谢稳定位置用碳-11对AZD1940进行放射性标记的方法。该方法的开发包括制备两种新的放射性标记前体，即[11C]新戊酸锂和[11C]乙磺酰氯。这些试剂以及用碳-11对苯并咪唑基团进行放射性标记的方法，可能在PET放射化学领域得到更广泛的应用。在食蟹猴中静脉注射微剂量[11C]AZD1940后，PET成像证实AZD1940在中枢神经系统中的暴露量相对较低。[2] CB1/CB2受体激动剂AZD1940并未减轻辣椒素诱导的疼痛或原发性或继发性痛觉过敏。正如预期，在VAMS评分中观察到轻微的主观中枢神经系统相关效应，不良事件（AE）谱显示轻度至中度剂量依赖性中枢神经系统效应。
辣椒素给药后的疼痛和痛觉过敏已被广泛用作急性疼痛镇痛药物初步评估的模型。关于大麻素对急性疼痛（包括辣椒素模型）影响的研究结果并不一致。大多数口服大麻素的研究表明其对辣椒素诱导的疼痛有负面影响。然而，在局部应用大麻素¹⁶和吸食大麻的安慰剂对照研究中观察到疼痛和/或痛觉过敏的减轻。不同大麻素激动剂疗效的差异可能由多种因素造成，例如药代动力学效应、给药途径、中枢和外周作用部位分布的差异、限制给药剂量的耐受性问题、CB1/CB2受体选择性的差异以及分子的内在效力。正如预期，AZD1940 的血药浓度峰值 (Cmax) 出现在给药后 2-3 小时，并且由于该药物半衰期较长，其血浆浓度下降非常缓慢。因此，本研究中的疼痛模型和测量时间点被认为是合适的。在机械性痛觉过敏区域，在单个时间点上，安慰剂组与 400 μg AZD1940 组以及 800 μg AZD1940 组与安慰剂组之间均存在差异。总体而言，痛觉过敏区域的个体差异较大。因此，这些看似矛盾的观察结果很可能是由随机变异造成的。
接受 AZD1940 治疗的患者比服用安慰剂的患者感觉更“镇静”和“兴奋”，VAMS 评分 < 30 mm 的最大效应出现在药物血浆浓度达到峰值时。这些效应量可与中枢作用大麻素纳比隆的效应量进行比较，纳比隆在VAMS“镇静”评分上的最大效应量约为60 mm，在VAMS“焦虑”评分上为20-40 mm，在VAMS“放松”评分上为20-25 mm。纳比隆对其他一些主观和认知指标也具有剂量依赖性效应，且这些效应比AZD1940的效应更为显著（阿斯利康研发部，未发表数据，2007）。
AZD1940报告了与神经系统相关的不良事件（头痛、头晕、嗜睡），且随着剂量的增加，不良事件的发生频率和强度也随之增加。在临床推荐剂量的纳比隆中，也报告了类似但更为显著的不良事件，包括严重的中枢神经系统相关不良事件。两种剂量的AZD1940均引起体位性低血压，与安慰剂相比，站立时平均血压降低，平均脉率相应升高。可以推测，部分被称为“头晕”的不良反应可能与血液动力学效应有关。
AZD1940的特性研究表明，其对人、大鼠和小鼠的CB1和CB2受体具有高亲和力结合和完全激动作用。临床前研究表明，局部应用CB1受体拮抗剂可逆转AZD1940的镇痛作用。因此，临床前数据提示AZD1940的镇痛作用是由外周CB1受体介导的。AZD1940在大鼠中镇痛剂量下脑摄取率低，且中枢神经系统不良反应发生率低，这与在观察到中枢神经系统不良反应之前存在一个镇痛作用窗口相一致。由于本研究观察到剂量依赖性的轻微中枢神经系统效应，因此很可能已涵盖了测试AZD1940疗效的合适剂量范围。
因此，本研究的阴性疗效结果没有明显的方法学解释。近期关于AZD1940在术后牙痛（可视为急性炎症性疼痛模型）中的阴性数据也与本研究结果一致。根据对不同大麻素化合物（例如大麻提取物、纳比隆、△-9-四氢大麻酚）研究的荟萃分析，大麻素在急性疼痛中的疗效证据相当薄弱，在急性疼痛治疗或人体实验性疼痛中，有多个例子表明其镇痛效果缺失或较弱。显然，AZD1940作为一种合成的外周作用CB1/CB2受体激动剂，其疗效并不优于中枢作用的大麻素。由于外周CB1受体重要性的临床前数据似乎很有说服力，这凸显了临床前数据与临床数据之间的转化机制尚不明确。文献中已有多个将动物疗效数据转化为人体试验失败的案例（例如NK1受体拮抗剂、N-甲基-D-天冬氨酸甘氨酸位点拮抗剂）。然而，需要指出的是，大多数关于大麻素在人类疼痛疾病中疗效的阳性数据来自多发性硬化症和其他类型神经性疼痛的多剂量研究。慢性炎症性疼痛、神经性疼痛和内脏疼痛的病理生理机制与急性疼痛的机制不同，可能涉及外周和中枢神经元的可塑性。因此，大麻素可能影响某些主要在慢性疼痛疾病中起重要作用的疼痛机制。因此，可以考虑在例如慢性神经性疼痛和内脏疼痛等疾病中开展多剂量研究，以探索外周作用大麻素的镇痛潜力。利用内源性大麻素系统进行镇痛的其他策略也值得考虑；例如，无需使用外源性受体激动剂，即可通过抑制降解酶来提高内源性大麻素（“内源性大麻素”）的水平。内源性大麻素对受体的作用相当复杂；例如，棕榈酰乙醇胺 (PEA) 已显示出对人类疼痛的疗效，它可能主要通过过氧化物酶体增殖物激活受体α发挥作用，而对CB1/CB2受体的亲和力较弱。此外，PEA 还被鉴定为两种具有类似大麻素药理学特性的孤儿G蛋白偶联受体（即GPR55和GPR119受体）的激动剂。因此，内源性大麻素激活的系统似乎比仅仅通过 CB1/CB2 受体发挥作用的系统更为复杂。
总之，在人辣椒素疼痛模型中，未发现外周作用的 CB1/CB2 受体激动剂具有镇痛疗效的证据。然而，外周 CB1/CB2 受体激动剂在治疗人类慢性疼痛方面的应用价值尚不明确。[1]

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- 作用机制：- AZD1940 激活外周感觉神经元上的 CB1 受体，抑制 TRPV1 通道活性，从而减少伤害性信号传导。其外周局限性活性避免了中枢大麻素效应（例如，欣快感、镇静作用）。[1]
- 临床开发：- AZD1940 正在开发用于治疗慢性疼痛（例如，骨关节炎、神经性疼痛），局部给药可在最大限度减少全身暴露的情况下发挥局部疗效。 [1]
- FDA 状态： - 该化合物于 2015 年完成 II 期临床试验，但由于缺乏商业兴趣而终止。在研发过程中，未报告任何具体的 FDA 警告或安全问题。[1]

C20H29F2N3O2S

413.52

413.195

C, 58.09; H, 7.07; F, 9.19; N, 10.16; O, 7.74; S, 7.75

881413-29-2

881413-29-2

11675994

White to off-white solid powder

6.074

72.37

1

6

6

28

635

0

O=S(CC)(NC1C=C2N=C(C(C)(C)C)N(C2=CC=1)CC1CCC(F)(F)CC1)=O

ZAGGGZCIFUQHOH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H29F2N3O2S/c1-5-28(26,27)24-15-6-7-17-16(12-15)23-18(19(2,3)4)25(17)13-14-8-10-20(21,22)11-9-14/h6-7,12,14,24H,5,8-11,13H2,1-4H3

N-[2-tert-butyl-1-[(4,4-difluorocyclohexyl)methyl]benzimidazol-5-yl]ethanesulfonamide

AZD-1940; AZD 1940; AZD1940; UNII-0J0035E9FT; ART-27.13; 881413-29-2; AZD1940; Ethanesulfonamide, N-(1-((4,4-difluorocyclohexyl)methyl)-2-(1,1-dimethylethyl)-1H-benzimidazol-5-yl)-; CHEMBL4550236; 0J0035E9FT; N-[2-tert-butyl-1-[(4,4-difluorocyclohexyl)methyl]benzimidazol-5-yl]ethanesulfonamide; Ethanesulfonamide, N-[1-[(4,4-difluorocyclohexyl)methyl]-2-(1,1-dimethylethyl)-1H-benzimidazol-5-yl]-; ART 27.13; ART27.13; ART-2713; ART 2713; ART2713

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~241.8 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。