| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CCR1
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| 体外研究 (In Vitro) |
研究人员比较了几种研究得很好的CCR1拮抗剂，包括AZD4818、BX471、CCX354、CP-481715、MLN-3897和PS899877，以确定它们在体外使用RPMI 8226细胞制备的膜抑制[（125）I]-CCL3结合的能力，RPMI 8226细胞是一种内源性表达CCR1的人类多发性骨髓瘤细胞系。此外，使用RPMI 8226细胞评估拮抗剂调节CCL3介导的CCR1内化和CCL3介介导的细胞迁移的能力。由于许多GPCR通过与G蛋白驱动的途径分离和不同的β-arrestin依赖途径发出信号，研究人员还评估了这些化合物改变β-rarestin易位的能力。
关键结果：CCR1拮抗剂在抑制CCL3与骨髓瘤细胞结合的能力以及抑制G蛋白依赖性和非依赖性功能反应的能力方面存在明显差异。
结论和意义：我们的研究表明，组织表型似乎与CCR1有关。此外，对于CCR1拮抗剂，抑制β-arrestin易位不一定与趋化性或受体内化有关[2]。
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| 酶活实验 |
结合分析[2]
如前所述（Gilchrist等人，1998），膜由HEK_CCR1或RPMI 8226细胞制备，并在-80°C下等分储存，直至需要。对于竞争试验，将膜悬浮在由50 mM HEPES、pH 7.5、1 mM EDTA和5 mM MgCl2组成的HEM缓冲液中，浓度为10μg mL-1。将化合物在HEM缓冲液中连续稀释至10倍浓度，然后加入膜混合物中。加入终浓度为2 pM[125I]-CCL3的试管，在37°C下振荡培养2小时。进行初步实验以确定在2小时的时间点已达到平衡（数据未显示）。通过Whatman GF/C滤纸过滤，分离结合和游离的放射性配体，该滤纸浸泡在由20 mm Tris-HCl、pH 7.4、0.5 mm EDTA和5 mm MgCl2组成的TEM2缓冲液中，并补充0.3%聚乙烯亚胺和20 mg·mL-1 BSA，使用组织采集器。用冰冷的TEM2缓冲液洗涤过滤器两次，然后使用Packard Gamma计数器计数（每个样品1分钟）。结合试验进行了两次，通过在某些样品中同时加入冷CCL3（100 nM）和放射性配体来确定非特异性结合。通过非线性回归分析对结合实验的数据进行分析，以确定IC50值。对于饱和实验，我们使用10μg mL-1的HEK_CCR1或RPMI 8226细胞制备的膜，并在有和没有冷CCL3（100 nM）的情况下增加[125I]-CCL3（0-100 pM）的浓度，以确定非特异性结合。在37°C下进行2小时的结合实验，使用GraphPad Prism 6.0版确定KD和Bmax值。如表2所示，重复进行两次实验。 PathHunterβ-arrestin易位测定[2] 为了定量评估β-arrestin易位，我们使用了DiscoveRx Corporation的酶片段互补形式，其中CCR1与源自β-半乳糖苷酶的ProLink™肽融合，β-arrestin2与β-半乳糖酶的N端缺失突变体[酶受体（EA）]融合。添加CCL3后，β-arrestin-EA融合蛋白结合活化的CCR1-ProLink。PathHunter hCCR1_CHO细胞在Optimem中以每孔1×104个细胞的比例铺在96孔半体积白色板上，并允许其附着过夜。初步实验确定CCL3的EC50为200 pM。在Optimem中制备拮抗剂的连续稀释液，并将其加入三个孔中。将平板在37°C下与5%CO2一起孵育90分钟，然后加入浓度逐渐增加的CCL3，并在37°℃下与5%二氧化碳一起孵育另外60分钟。加入检测试剂，并在室温下孵育平板60分钟。使用DTX800多模读板器上的发光设置读取板。pKB值是在GraphPad Prism 6.0版上使用Gaddum-Schild方程确定的。实验按表3所示进行三次并重复。 |
| 细胞实验 |
受体内化试验[2]
使用流式细胞术进行受体内化实验。按照PE偶联抗CCR1和FITC偶联抗CCR5的制造商的建议对表面CCR1和CCR5进行染色）。简而言之，将5×106个RPMI 8226细胞悬浮在含有1%FBS的RPMI 1640培养基中，并与不同浓度的拮抗剂一起孵育。15分钟后，用CCL3（1 nM）激活细胞，并在37°C下孵育2小时。用含有1%FBS的RPMI 1640培养基洗涤后，将细胞悬浮在含有1%FBS和10μL每种mAb的PBS中。此后，细胞在4°C的黑暗中孵育30分钟。用含1%FBS的PBS洗涤两次后，使用Cell Quest软件在BD FACScalibur流式细胞仪上分析样品。至少获得了10000个活动。健康人群在FITC与PE图上进行了识别和门控。对于细胞表面表达图，没有暴露于CCL3的左上象限（高CCR1/低CCR5）的细胞百分比设置为1.0，显示了仅1 nM CCL3（对照）和1 nM CCR3随CCR1拮抗剂浓度增加的荧光倍数变化。为了计算IC50值（表3），将含有1 nM CCL3（无拮抗剂）的样品设置为1.0，并使用GraphPad Prism 6.0版进行非线性回归分析。如表3所示，重复实验。 趋化性测定[2] 所有趋化性实验均使用孔径为8μm的MultiScreen®迁移侵入和趋化性滤板。我们利用荧光染料Calcein AM标记RMPI 8226细胞。用补充了10 mM HEPES（HHBSS）的HBSS洗涤细胞一次，并将其悬浮在4×106个细胞mL−1。加入钙黄绿素AM（2μM），在37°C下孵育细胞30分钟。然后用HHBSS洗涤细胞两次，然后以2×106个细胞mL−1的浓度悬浮在HHBSS中。将标记细胞（50μL）与拮抗剂（或载体对照）一起加入顶室。底部腔室包含150μL对照培养基（HHBSS）或化学引诱剂（对照培养基中的1 nM CCL3）。将平板置于37°C的培养箱中3小时。3小时后，从底部腔室中取出50μL含细胞的培养基，并转移到底部透明的96孔黑色平板上。该印版是在DTX800多模印版阅读器上使用EX490/EM520读取的。对于趋化性，每个点进行四次，并减去自发迁移到趋化性缓冲液的细胞数量。趋化指数是通过将拮抗剂存在下迁移的细胞数量除以自发迁移到CCL3的细胞数量来确定的。实验进行了四次，使用非线性回归分析（GraphPad Prism 6.0版）计算IC50值。对于表3，每种化合物的三次重复实验的趋化指数取平均值。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
AZD4818 has been used in trials studying the treatment of Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD).
Using membranes from HEK_CCR1Gqi5 cells, we confirmed that AZD-4818, BX471, CCX354, CP481715 and PS899877 are all potent inhibitors of [125I]-CCL3 binding (Figure 1; Table 2). In the cases of BX471, CP481715 and PS899877, our findings are similar to those previously reported with HEK cells (Anders et al., 2002; Vallet et al., 2007; Merritt et al., 2010). We then examined the compounds using membranes from RPMI 8226 cells ( Figure 2; Table 2;). While two compounds were equally potent with membranes from either cell line (BX471, PS899877), the others had a bias for the recombinant HEK_CCR1 system. In the case of AZD4818, CCX354 and CP481715, the affinity is significantly better with membranes from HEK_CCR1 cells than those from RPMI 8226 cells when tested using an unpaired t-test with Welch's correction (P < 0.05). Furthermore, there was a drastic shift in the rank order of potency between the membranes tested. With HEK_CCR1 membranes we found MLN3879 > CCX354 ≥ AZD4818 > CP481715 = BX471 > PS899877 while with membranes from RPMI 8226 cells we found MLN3879 > BX471 > CP481715 ≥ PS899877 > AZD4818 > CCX354.[1] |
| 分子式 |
C27H32CL2N2O7
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|---|---|
| 分子量 |
567.46
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| 精确质量 |
566.159
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| 元素分析 |
C, 57.15; H, 5.68; Cl, 12.50; N, 4.94; O, 19.74
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| CAS号 |
1003566-93-5
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| 相关CAS号 |
1003566-93-5
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| PubChem CID |
24955007
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
4.317
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| tPSA |
121.05
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
38
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| 分子复杂度/Complexity |
838
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CC(C(O)=O)(OC1=C(Cl)C=C(C(NC)=O)C(OC[C@@H](O)CN2CCC3(CC4=CC(Cl)=CC=C4O3)CC2)=C1)C
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| InChi Key |
HVTUHSABWJPWNK-SFHVURJKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H32Cl2N2O7/c1-26(2,25(34)35)37-23-12-22(19(11-20(23)29)24(33)30-3)36-15-18(32)14-31-8-6-27(7-9-31)13-16-10-17(28)4-5-21(16)38-27/h4-5,10-12,18,32H,6-9,13-15H2,1-3H3,(H,30,33)(H,34,35)/t18-/m0/s1
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| 化学名 |
2-[2-chloro-5-[(2S)-3-(5-chlorospiro[3H-1-benzofuran-2,4'-piperidine]-1'-yl)-2-hydroxypropoxy]-4-(methylcarbamoyl)phenoxy]-2-methylpropanoic acid
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| 别名 |
AZD4818; AZD-4818; AZD-4818; 1003566-93-5; UNII-S5UP6P540K; S5UP6P540K; 2-(2-Chloro-5-(((2S)-3-(5-chloro-2,3-dihydrospiro(benzofuran-2,4'-piperidin)-1'-yl)-2-hydroxypropyl)oxy)-4-((methylamino)carbonyl)phenoxy)-2-methylpropanoic acid; AZD-4818(AZD4818); AZD 4818
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~50 mg/mL (~88.1 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7622 mL | 8.8112 mL | 17.6224 mL | |
| 5 mM | 0.3524 mL | 1.7622 mL | 3.5245 mL | |
| 10 mM | 0.1762 mL | 0.8811 mL | 1.7622 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT00687232 | Completed | Drug: AZD4818 Drug: Placebo |
Healthy | AstraZeneca | January 2008 | Phase 1 |
| NCT00629239 | Completed | Drug: AZD4818 Drug: Placebo |
Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) |
AstraZeneca | January 2008 | Phase 2 |
CCR8 agonist 1
Nebokitug
Denrakibart
Azirkitug
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