| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在较宽的剂量范围内，BAM 15 可以提高耗氧量而不增加活性氧（ROS）水平。尽管 BAM 15 和 FCCP 的结构存在差异，但低剂量（100 nM 至 1 μM）的 BAM 15 仍能以类似于 FCCP 的方式提高细胞耗氧率（OCR）。然而，在较高浓度（1 μM 至 50 μM）下，BAM 15 还能在多种细胞系中维持较高的解偶联呼吸速率。在寡霉素存在的情况下，BAM 15 能够提高成肌细胞和肝细胞的线粒体呼吸，且其作用浓度范围比 FCCP 更广。BAM 15 引起的线粒体增大表明它是一种质子载体。当浓度高达 50 μM 时，BAM15 处理的细胞比 FCCP 处理的细胞更具活力 [1]。体外实验：BAM15（100 nM – 50 µM）在多种细胞类型（L6 成肌细胞、大鼠原代心肌细胞、小鼠 C2C12 成肌细胞、正常小鼠肝细胞和人原代成纤维细胞）中，均在较宽的浓度范围内提高了耗氧率 (OCR)，并且在浓度 >1 µM 时，其维持解偶联呼吸的速率高于 FCCP [1]。
BAM15（0.1–10 µM）在 ATP 合酶抑制剂寡霉素存在的情况下，能够完全刺激线粒体呼吸，表明其具有真正的解偶联活性 [1]。 BAM15（1 µM 和 10 µM）使 L6 细胞的线粒体膜电位去极化。通过四甲基罗丹明 (TMRM) 荧光测定，其效果与 FCCP 相当 [1]。 在分离的小鼠肝线粒体中，BAM15 (1–64 µM) 以与 FCCP 相似的效力增加复合物 I 底物（丙酮酸+苹果酸）和复合物 II 底物（琥珀酸+鱼藤酮）的耗氧量 [1]。 BAM15 (5 µM) 不改变分离线粒体中复合物 I、II、III 或 IV 的电子流，如依次注射鱼藤酮、琥珀酸、抗霉素 A 和 TMPD/抗坏血酸所示 [1]。 BAM15 (10 µM) 在含有缬氨霉素的等渗醋酸钾缓冲液中诱导质子依赖性线粒体肿胀，证实了其质子载体活性 [1]。 BAM15 (1 µM) 增加即使在腺嘌呤核苷酸转位酶 (ANT) 抑制剂羧基阿曲西苷存在的情况下，透化 C2C12 细胞的呼吸作用仍然存在，表明其解偶联作用与 ANT 无关 [1]。 BAM15（1 µM 和 10 µM）不改变质膜电生理特性：在 L6 细胞中，电压钳制下未引起内向电流，电流钳制下未引起膜去极化，这与 FCCP 诱导的显著变化相反 [1]。 在高达 50 µM 的宽浓度范围内，BAM15 对 NMuLi、L6、C2C12 和原代心肌细胞的细胞毒性低于 FCCP，这通过 MTT 或结晶紫染色法测定 [1]。 在筛选浓度 (0.5 ng/µL) 下，BAM15 不会增加 L6 细胞中活性氧 (ROS) 的产生，这通过 MTT 或结晶紫染色法测定。 CM-H₂OCFDA荧光[1]。 |
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| 体内研究 (In Vivo) |
与接受载体处理的小鼠相比，接受 BAM 15 处理的小鼠肾脏损伤得到保护。此外，缺血后 24 小时和 48 小时，这些小鼠的血浆肌酐水平较低，肾小管阻塞和免疫细胞浸润减少，肾小管坏死减少，刷状缘绒毛减少。
体内实验：雄性 C57BL/6 小鼠（8 周龄）在双侧肾脏缺血（26 分钟）前 1 小时预先腹腔注射 BAM15（1 或 5 mg/kg），随后进行 24 小时或 48 小时的再灌注。 BAM15呈剂量依赖性地保护肾脏免受损伤：与载体对照组相比，再灌注后24小时和48小时血浆肌酐水平显著降低[1]。 再灌注后48小时的组织学分析显示，BAM15预处理可减少急性近端肾小管坏死，减少刷状缘绒毛的减少，减轻近端肾小管阻塞，并减少白细胞（CD45+细胞）向肾髓质的浸润[1]。 假手术组小鼠接受了相同的手术，但不进行肾蒂钳夹，结果显示肾功能正常[1]。 |
| 细胞实验 |
细胞检测：非定量耗氧量检测：将L6成肌细胞（500,000个细胞/孔）接种于含有氧敏感钌染料的96孔氧生物传感器板中。将细胞与化合物库（5 µg/mL）或溶剂（DMSO）孵育，并在37 °C下记录45-90分钟的荧光强度（激发波长485 nm/发射波长630 nm）。FCCP用作阳性对照[1]。
活性氧（ROS）生成检测：将L6成肌细胞与7.5 µM CM-H₂OCFDA和0.5 ng/µL待测化合物在含有25 mM葡萄糖的Krebs-Ringer磷酸盐缓冲液中于37 °C下共孵育1小时。洗涤后，测量荧光强度（激发波长495 nm/发射波长530 nm）。100 mM H₂O₂用作阳性对照。导致活性氧（ROS）水平升高超过20%的化合物被排除[1]。 Seahorse XF24/96 分析：将细胞（NMuLi、C2C12、L6、原代心肌细胞、人成纤维细胞）接种于 XF 培养板中，并使其贴壁培养24小时。在进行检测前，将培养基更换为含有丙酮酸和谷氨酰胺的无缓冲 DMEM 培养基（pH 7.4）。注入化合物后，以2分钟为间隔测量耗氧率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）。对于分离的线粒体，将 5 µg 线粒体蛋白溶于 MAS 缓冲液中，加入 XF24 孔板，以 2000×g 离心 15 分钟，然后与底物和解偶联剂孵育 [1]。 细胞线粒体膜电位：将 L6 细胞用 125 nM TMRM 孵育 30 分钟，然后用 BAM15 或 FCCP 处理 10 分钟，之后进行流式细胞术分析（PE 通道）[1]。 分离线粒体中的线粒体膜电位：将分离的肝脏线粒体与 200 nM TMRM 在 MASₛᵣ₀ 缓冲液（补充 10 mM 琥珀酸、1 µM 鱼藤酮、1 µM 寡霉素）中于 25 °C 孵育 20 分钟，然后离心并重悬。加入解偶联剂并孵育 20 分钟后，离心线粒体，并测量上清液中 TMRM 荧光强度（激发波长 545 nm/发射波长 580 nm）[1]。 线粒体肿胀实验：将分离的肝线粒体（0.25 mg/mL）加入等渗乙酸缓冲液（145 mM 乙酸钾、5 mM Tris-HCl、0.5 mM EDTA、3 µM 缬氨霉素、1 µM 鱼藤酮，pH 7.4）。在加入 10 µM 解偶联剂前后，分别测量 600 nm 处的吸光度 60 秒。肿胀表明质子载体活性[1]。 质膜电生理：使用硼硅酸盐玻璃膜片钳电极（3–5 MΩ）和 Axopatch 200B 放大器，对 L6 细胞进行全细胞电压钳和电流钳记录。内液：120 mM KCH₂SO₃、4 mM NaCl、1 mM MgCl₂、0.5 mM CaCl₂、10 mM HEPES、10 mM EGTA、3 mM ATP-Mg、0.3 mM GTP-Tris（pH 7.2）。浴液：140 mM NaCl、3 mM KCl、2 mM MgCl₂、2 mM CaCl₂、10 mM HEPES、10 mM 葡萄糖（pH 7.3）。电压钳制实验中，细胞钳制在 -70 mV，每 10 秒施加一个持续 750 ms 的斜坡电压，从 -150 mV 升至 +80 mV。电导测量范围为 -130 mV 至 -60 mV。对于电流钳制实验，细胞在静息膜电位下进行记录[1]。 细胞毒性试验：将细胞（NMuLi、L6、C2C12 细胞 5000 个/孔；原代心肌细胞 10000 个/孔）接种于 96 孔板中，并用化合物处理 48 小时。采用 MTT 或结晶紫（0.5% w/v，溶于 50% 甲醇）染色法检测细胞活力，并读取吸光度值。结果以 DMSO 处理对照组的百分比表示[1]。 |
| 动物实验 |
动物实验方案：雄性C57BL/6小鼠（8周龄，购自美国国家癌症研究所）经腹腔注射氯胺酮（120 mg/kg）、赛拉嗪（12 mg/kg）和阿托品（0.324 mg/kg）麻醉。通过夹闭双侧肾蒂26分钟诱导双侧肾脏缺血再灌注损伤，随后进行24小时或48小时的再灌注。手术期间维持小鼠核心体温在34–36 °C，术后恢复期间置于30–32 °C的保温箱中。BAM15溶于3% DMSO和50% PEG400的混合溶液中，于缺血前1小时以1或5 mg/kg的剂量腹腔注射。对照组小鼠注射相同溶液。假手术组小鼠接受相同的手术操作，但不进行肾蒂夹闭。血浆肌酐采用比色法测定。组织学方面，肾脏组织经高碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，并进行苏木精-伊红（H&E）染色。急性肾小管坏死程度采用盲法评分，根据外髓管内粉红色管型的百分比进行评分：1级（<10%），2级（10-25%），3级（25-75%），4级（>75%）。肾脏白细胞含量采用流式细胞术分析，使用抗CD45抗体和其他标记物，分析前进行酶消化[1]。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性/毒代动力学：体外细胞毒性：在浓度高达 50 µM 的宽剂量范围内，BAM15 对 NMuLi、L6、C2C12 和原代大鼠心肌细胞的细胞毒性均低于 FCCP；在相同浓度下，BAM15 处理的细胞活力高于 FCCP [1]。体内耐受性：在肾脏缺血再灌注研究中，腹腔注射 1 或 5 mg/kg BAM15 的小鼠未出现明显的毒性或不良反应；所有小鼠均存活至实验结束，且行为正常 [1]。在筛选浓度下，该化合物未增加 L6 细胞中活性氧的产生，表明其氧化应激风险较低 [1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
补充信息：BAM15是一种结构新颖的线粒体质子载体解偶联剂，与FCCP或DNP无关。它与FCCP具有相同的效力，但有效浓度范围更广，不会使质膜去极化，且细胞毒性更低。其解偶联活性不依赖于腺嘌呤核苷酸转位酶（ANT），也不会改变复合物I-IV的电子传递。BAM15在急性肾脏缺血再灌注损伤的小鼠模型中显示出体内疗效，可降低血浆肌酐水平、肾小管坏死和免疫细胞浸润。这些特性使得BAM15成为研究线粒体功能且无脱靶效应的宝贵工具，并有望成为治疗涉及线粒体氧化应激疾病（如缺血再灌注损伤、肥胖和神经退行性疾病）的候选药物[1]。
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| 分子式 |
C16H10F2N6O
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|---|---|
| 分子量 |
340.29
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| 精确质量 |
340.088
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| CAS号 |
210302-17-3
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| PubChem CID |
565708
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
421.7±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
208.9±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.728
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| LogP |
4.19
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| tPSA |
88.8
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
409
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
OEGJBRZAJRPPHL-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H10F2N6O/c17-9-5-1-3-7-11(9)19-13-14(20-12-8-4-2-6-10(12)18)22-16-15(21-13)23-25-24-16/h1-8H,(H,19,21,23)(H,20,22,24)
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| 化学名 |
5-N,6-N-bis(2-fluorophenyl)-[1,2,5]oxadiazolo[3,4-b]pyrazine-5,6-diamine
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| 别名 |
BAM-15 BAM 15 BAM15
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~146.93 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9387 mL | 14.6933 mL | 29.3867 mL | |
| 5 mM | 0.5877 mL | 2.9387 mL | 5.8773 mL | |
| 10 mM | 0.2939 mL | 1.4693 mL | 2.9387 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT04634409 | COMPLETEDWITH RESULTS | Drug: Bamlanivimab Drug: Etesevimab Drug: Placebo |
COVID-19 | Eli Lilly and Company | 2020-10-29 | Phase 2 |
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