| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BAM15 targets the mitochondrial electron transport chain by acting as a protonophore uncoupler. It dissipates the mitochondrial membrane potential by transporting protons across the inner mitochondrial membrane, bypassing ATP synthase. This uncoupling of oxidative phosphorylation leads to increased oxygen consumption and reduced ATP production, activating AMPK and promoting fatty acid oxidation and glucose uptake. By reducing the mitochondrial membrane potential, BAM15 also decreases the production of reactive oxygen species (ROS), contributing to its cytoprotective effects.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在较宽的剂量范围内，BAM 15 可以提高耗氧量而不增加活性氧（ROS）水平。尽管 BAM 15 和 FCCP 的结构存在差异，但低剂量（100 nM 至 1 μM）的 BAM 15 仍能以类似于 FCCP 的方式提高细胞耗氧率（OCR）。然而，在较高浓度（1 μM 至 50 μM）下，BAM 15 还能在多种细胞系中维持较高的解偶联呼吸速率。在寡霉素存在的情况下，BAM 15 能够提高成肌细胞和肝细胞的线粒体呼吸，且其作用浓度范围比 FCCP 更广。BAM 15 引起的线粒体增大表明它是一种质子载体。当浓度高达 50 μM 时，BAM15 处理的细胞比 FCCP 处理的细胞更具活力 [1]。体外实验：BAM15（100 nM – 50 µM）在多种细胞类型（L6 成肌细胞、大鼠原代心肌细胞、小鼠 C2C12 成肌细胞、正常小鼠肝细胞和人原代成纤维细胞）中，均在较宽的浓度范围内提高了耗氧率 (OCR)，并且在浓度 >1 µM 时，其维持解偶联呼吸的速率高于 FCCP [1]。
BAM15（0.1–10 µM）在 ATP 合酶抑制剂寡霉素存在的情况下，能够完全刺激线粒体呼吸，表明其具有真正的解偶联活性 [1]。 BAM15（1 µM 和 10 µM）使 L6 细胞的线粒体膜电位去极化。通过四甲基罗丹明 (TMRM) 荧光测定，其效果与 FCCP 相当 [1]。 在分离的小鼠肝线粒体中，BAM15 (1–64 µM) 以与 FCCP 相似的效力增加复合物 I 底物（丙酮酸+苹果酸）和复合物 II 底物（琥珀酸+鱼藤酮）的耗氧量 [1]。 BAM15 (5 µM) 不改变分离线粒体中复合物 I、II、III 或 IV 的电子流，如依次注射鱼藤酮、琥珀酸、抗霉素 A 和 TMPD/抗坏血酸所示 [1]。 BAM15 (10 µM) 在含有缬氨霉素的等渗醋酸钾缓冲液中诱导质子依赖性线粒体肿胀，证实了其质子载体活性 [1]。 BAM15 (1 µM) 增加即使在腺嘌呤核苷酸转位酶 (ANT) 抑制剂羧基阿曲西苷存在的情况下，透化 C2C12 细胞的呼吸作用仍然存在，表明其解偶联作用与 ANT 无关 [1]。 BAM15（1 µM 和 10 µM）不改变质膜电生理特性：在 L6 细胞中，电压钳制下未引起内向电流，电流钳制下未引起膜去极化，这与 FCCP 诱导的显著变化相反 [1]。 在高达 50 µM 的宽浓度范围内，BAM15 对 NMuLi、L6、C2C12 和原代心肌细胞的细胞毒性低于 FCCP，这通过 MTT 或结晶紫染色法测定 [1]。 在筛选浓度 (0.5 ng/µL) 下，BAM15 不会增加 L6 细胞中活性氧 (ROS) 的产生，这通过 MTT 或结晶紫染色法测定。 CM-H₂OCFDA荧光[1]。 体外实验表明，BAM15具有强大的线粒体解偶联活性。它能以浓度依赖的方式降低多种细胞类型（包括肝细胞和肾上皮细胞）的线粒体膜电位（ΔΨm）。通过解偶联氧化磷酸化，BAM15可提高细胞耗氧率（OCR）并降低ATP水平，从而激活AMPK。BAM15通过减少促炎细胞因子的产生发挥抗炎作用。它还具有抗寄生虫活性，并能诱导癌细胞凋亡。在细胞应激和损伤模型中，BAM15的抗衰老和肾脏保护作用已得到证实。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
与接受载体处理的小鼠相比，接受 BAM 15 处理的小鼠肾脏损伤得到保护。此外，缺血后 24 小时和 48 小时，这些小鼠的血浆肌酐水平较低，肾小管阻塞和免疫细胞浸润减少，肾小管坏死减少，刷状缘绒毛减少。
体内实验：雄性 C57BL/6 小鼠（8 周龄）在双侧肾脏缺血（26 分钟）前 1 小时预先腹腔注射 BAM15（1 或 5 mg/kg），随后进行 24 小时或 48 小时的再灌注。 BAM15呈剂量依赖性地保护肾脏免受损伤：与载体对照组相比，再灌注后24小时和48小时血浆肌酐水平显著降低[1]。 再灌注后48小时的组织学分析显示，BAM15预处理可减少急性近端肾小管坏死，减少刷状缘绒毛的减少，减轻近端肾小管阻塞，并减少白细胞（CD45+细胞）向肾髓质的浸润[1]。 假手术组小鼠接受了相同的手术，但不进行肾蒂钳夹，结果显示肾功能正常[1]。 体内研究表明，BAM15在多种动物模型中具有良好的治疗效果。它能保护哺乳动物免受急性肾脏缺血再灌注损伤和冷诱导损伤。在肥胖模型中，BAM15可增加能量消耗，减轻体重，并改善包括胰岛素敏感性和葡萄糖稳态在内的代谢参数。在脓毒症模型中，BAM15可减轻炎症并提高生存率。其抗肥胖作用是通过增加脂肪组织和骨骼肌中的线粒体解偶联来实现的，从而增强脂肪酸氧化并减少脂质积累。BAM15在体内也显示出抗寄生虫活性，并在肿瘤模型中显示出抗肿瘤作用。 |
| 酶活实验 |
体外BAM15酶/受体结合实验侧重于线粒体功能而非特异性酶抑制。主要实验采用荧光探针（如JC-1或四甲基罗丹明甲酯（TMRM））在分离的线粒体或完整细胞中测量线粒体膜电位（ΔΨm）。使用Seahorse XF分析仪测量耗氧率（OCR）以评估线粒体解偶联活性。在AMPK激活研究中，用BAM15处理细胞，并通过Western blot检测AMPK及其下游靶点（ACC）的磷酸化水平。使用荧光探针（如DCFH-DA或MitoSOX）评估活性氧（ROS）的产生。
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| 细胞实验 |
细胞检测：非定量耗氧量检测：将L6成肌细胞（500,000个细胞/孔）接种于含有氧敏感钌染料的96孔氧生物传感器板中。将细胞与化合物库（5 µg/mL）或溶剂（DMSO）孵育，并在37 °C下记录45-90分钟的荧光强度（激发波长485 nm/发射波长630 nm）。FCCP用作阳性对照[1]。
活性氧（ROS）生成检测：将L6成肌细胞与7.5 µM CM-H₂OCFDA和0.5 ng/µL待测化合物在含有25 mM葡萄糖的Krebs-Ringer磷酸盐缓冲液中于37 °C下共孵育1小时。洗涤后，测量荧光强度（激发波长495 nm/发射波长530 nm）。100 mM H₂O₂用作阳性对照。导致活性氧（ROS）水平升高超过20%的化合物被排除[1]。 Seahorse XF24/96 分析：将细胞（NMuLi、C2C12、L6、原代心肌细胞、人成纤维细胞）接种于 XF 培养板中，并使其贴壁培养24小时。在进行检测前，将培养基更换为含有丙酮酸和谷氨酰胺的无缓冲 DMEM 培养基（pH 7.4）。注入化合物后，以2分钟为间隔测量耗氧率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）。对于分离的线粒体，将 5 µg 线粒体蛋白溶于 MAS 缓冲液中，加入 XF24 孔板，以 2000×g 离心 15 分钟，然后与底物和解偶联剂孵育 [1]。 细胞线粒体膜电位：将 L6 细胞用 125 nM TMRM 孵育 30 分钟，然后用 BAM15 或 FCCP 处理 10 分钟，之后进行流式细胞术分析（PE 通道）[1]。 分离线粒体中的线粒体膜电位：将分离的肝脏线粒体与 200 nM TMRM 在 MASₛᵣ₀ 缓冲液（补充 10 mM 琥珀酸、1 µM 鱼藤酮、1 µM 寡霉素）中于 25 °C 孵育 20 分钟，然后离心并重悬。加入解偶联剂并孵育 20 分钟后，离心线粒体，并测量上清液中 TMRM 荧光强度（激发波长 545 nm/发射波长 580 nm）[1]。 线粒体肿胀实验：将分离的肝线粒体（0.25 mg/mL）加入等渗乙酸缓冲液（145 mM 乙酸钾、5 mM Tris-HCl、0.5 mM EDTA、3 µM 缬氨霉素、1 µM 鱼藤酮，pH 7.4）。在加入 10 µM 解偶联剂前后，分别测量 600 nm 处的吸光度 60 秒。肿胀表明质子载体活性[1]。 质膜电生理：使用硼硅酸盐玻璃膜片钳电极（3–5 MΩ）和 Axopatch 200B 放大器，对 L6 细胞进行全细胞电压钳和电流钳记录。内液：120 mM KCH₂SO₃、4 mM NaCl、1 mM MgCl₂、0.5 mM CaCl₂、10 mM HEPES、10 mM EGTA、3 mM ATP-Mg、0.3 mM GTP-Tris（pH 7.2）。浴液：140 mM NaCl、3 mM KCl、2 mM MgCl₂、2 mM CaCl₂、10 mM HEPES、10 mM 葡萄糖（pH 7.3）。电压钳制实验中，细胞钳制在 -70 mV，每 10 秒施加一个持续 750 ms 的斜坡电压，从 -150 mV 升至 +80 mV。电导测量范围为 -130 mV 至 -60 mV。对于电流钳制实验，细胞在静息膜电位下进行记录[1]。 细胞毒性试验：将细胞（NMuLi、L6、C2C12 细胞每孔 5000 个；原代心肌细胞每孔 10000 个）接种于 96 孔板中，并用化合物处理 48 小时。采用 MTT 或结晶紫（0.5% w/v，溶于 50% 甲醇）染色法检测细胞活力，并读取吸光度值。结果以 DMSO 处理对照组的百分比表示[1]。 BAM15 的体外细胞试验通常使用人或鼠细胞系（例如，HepG2 肝细胞、肾上皮细胞、癌细胞系）。将细胞接种于 96 孔或 24 孔板中，并在合适的培养基（含 10% FBS 的 DMEM，37°C，5% CO₂）中培养。将BAM15以0.1-100 μM的浓度加入细胞中，处理2-24小时。使用JC-1染料测量线粒体膜电位，红色荧光与绿色荧光的比值表示ΔΨm。使用基于荧光素酶的检测方法定量细胞ATP水平。通过MTT或CellTiter-Glo检测评估细胞活力。通过Western blot分析AMPK和ACC的磷酸化水平。 |
| 动物实验 |
动物实验方案：雄性C57BL/6小鼠（8周龄，购自美国国家癌症研究所）经腹腔注射氯胺酮（120 mg/kg）、赛拉嗪（12 mg/kg）和阿托品（0.324 mg/kg）麻醉。通过夹闭双侧肾蒂26分钟诱导双侧肾脏缺血再灌注损伤，随后进行24小时或48小时的再灌注。手术期间维持小鼠核心体温在34–36 °C，术后恢复期间置于30–32 °C的保温箱中。BAM15溶于3% DMSO和50% PEG400的混合溶液中，于缺血前1小时以1或5 mg/kg的剂量腹腔注射。对照组小鼠注射相同溶液。假手术组小鼠接受相同的手术操作，但不进行肾蒂夹闭。血浆肌酐采用比色法测定。组织学方面，肾脏组织经高碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，并进行苏木精-伊红（H&E）染色。急性肾小管坏死程度采用盲法评分，根据外髓管内粉红色管型的百分比进行评分：1级（<10%），2级（10-25%），3级（25-75%），4级（>75%）。肾脏白细胞含量采用流式细胞术分析，使用抗CD45抗体和其他标记物，并经酶消化后进行检测[1]。
BAM15的体内动物研究已在多种疾病模型中进行。对于肾脏缺血再灌注损伤模型，小鼠接受双侧肾脏缺血30-45分钟，随后进行再灌注，并在缺血前或缺血后腹腔注射BAM15（通常为1-10 mg/kg）。肾功能通过血清肌酐和尿素氮水平进行评估，组织损伤则通过组织学方法进行评估。在肥胖研究中，小鼠喂食高脂饮食8-12周，然后每日接受BAM15（1-5 mg/kg，腹腔注射或口服）治疗2-4周；测量体重、食物摄入量、葡萄糖耐量和胰岛素敏感性。在脓毒症模型中，小鼠接受脂多糖（LPS）注射或进行盲肠结扎穿刺术（CLP），并接受BAM15治疗和生存监测。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
BAM15的药代动力学特性已在临床前研究中得到表征。作为一种小分子亲脂性化合物（分子量340.29），它具有良好的口服生物利用度和组织分布。给药后，BAM15分布于富含线粒体的组织，包括肝脏、肾脏、骨骼肌和脂肪组织。该化合物主要在肝脏代谢，可能通过细胞色素P450介导的氧化和结合反应进行。其消除半衰期适中，因此在动物研究中可以每日给药一次或两次。由于其理化性质，BAM15穿过血脑屏障的能力有限。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性/毒代动力学：体外细胞毒性：在浓度高达 50 µM 的宽剂量范围内，BAM15 对 NMuLi、L6、C2C12 和原代大鼠心肌细胞的细胞毒性均低于 FCCP；在相同浓度下，BAM15 处理的细胞活力高于 FCCP [1]。体内耐受性：在肾脏缺血再灌注研究中，腹腔注射 1 或 5 mg/kg BAM15 的小鼠未出现明显的毒性或不良反应；所有小鼠均存活至实验结束，且行为正常 [1]。在筛选浓度下，该化合物未增加 L6 细胞中活性氧的产生，表明其氧化应激风险较低 [1]。BAM15 已在临床前研究中进行了毒性评估。作为一种线粒体解偶联剂，BAM15 的治疗窗较窄，因为高剂量下过度解偶联可能导致体温过高和乳酸性酸中毒。在治疗剂量下，BAM15 通常耐受性良好，不良反应极少。该化合物在有效剂量下似乎不会引起明显的肝毒性或肾毒性。然而，与所有线粒体解偶联剂一样，需要谨慎地进行剂量滴定以避免全身毒性。需要进行长期安全性研究以全面了解其毒理学特征。BAM15 仅供研究使用，不得用于人体治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
补充信息：BAM15是一种结构新颖的线粒体质子载体解偶联剂，与FCCP或DNP无关。它与FCCP具有相同的效力，但有效浓度范围更广，不会使质膜去极化，且细胞毒性更低。其解偶联活性不依赖于腺嘌呤核苷酸转位酶（ANT），也不会改变复合物I-IV的电子传递。BAM15在小鼠急性肾脏缺血再灌注损伤模型中显示出体内疗效，可降低血浆肌酐水平、肾小管坏死和免疫细胞浸润。这些特性使得BAM15成为研究线粒体功能且不产生脱靶效应的宝贵工具，并有望成为治疗涉及线粒体氧化应激疾病（如缺血再灌注损伤、肥胖症和神经退行性疾病）的候选药物[1]。
BAM15是一种新型线粒体质子载体解偶联剂，因其潜在的治疗应用而引起了广泛的研究兴趣。它是一种AMPK激活剂。其独特的化学结构（N⁵,N⁶-双(2-氟苯基)-[1,2,5]恶二唑并[3,4-b]吡嗪-5,6-二胺）使其区别于其他线粒体解偶联剂，例如DNP和FCCP。BAM15正在被研究用于治疗肥胖症、脓毒症、肾损伤、癌症和衰老相关疾病。它以研究级化合物的形式供应，纯度>98%。建议储存于-20°C。本产品仅供研究使用，不可用于治疗用途。 |
| 分子式 |
C16H10F2N6O
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|---|---|
| 分子量 |
340.29
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| 精确质量 |
340.088
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| CAS号 |
210302-17-3
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| PubChem CID |
565708
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
421.7±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
208.9±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.728
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| LogP |
4.19
|
| tPSA |
88.8
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
409
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
OEGJBRZAJRPPHL-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H10F2N6O/c17-9-5-1-3-7-11(9)19-13-14(20-12-8-4-2-6-10(12)18)22-16-15(21-13)23-25-24-16/h1-8H,(H,19,21,23)(H,20,22,24)
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| 化学名 |
5-N,6-N-bis(2-fluorophenyl)-[1,2,5]oxadiazolo[3,4-b]pyrazine-5,6-diamine
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| 别名 |
BAM-15 BAM 15 BAM15
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~146.93 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9387 mL | 14.6933 mL | 29.3867 mL | |
| 5 mM | 0.5877 mL | 2.9387 mL | 5.8773 mL | |
| 10 mM | 0.2939 mL | 1.4693 mL | 2.9387 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT04634409 | COMPLETEDWITH RESULTS | Drug: Bamlanivimab Drug: Etesevimab Drug: Placebo |
COVID-19 | Eli Lilly and Company | 2020-10-29 | Phase 2 |
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463611831
