Barlerin   中文名称: 8-O-乙酰山栀苷甲酯

NF-κB
Barlerin targets multiple pathways involved in cerebral ischemia and inflammation. It inhibits NF-κB activity and reduces HMGB-1 expression. The compound promotes angiogenesis in the ischemic brain. Its protective effects involve HMGB-1 and NF-κB signaling pathways. Barlerin's anti-inflammatory and neuroprotective properties are mediated through suppression of these pathways. The compound also attenuates blood-brain barrier breakdown.

巴林（8-O-乙酰山栀苷甲酯）处理可抑制TNF诱导的核转录因子B（NF-κB）活化，并降低SH-SY5Y细胞中高迁移率族蛋白B1（HMGB-1）的表达。[1] 通过抑制HMGB-1的表达，用9 μM巴林（8-O-乙酰山栀苷甲酯）处理H9c2细胞可阻止TNF-α诱导的NF-κB磷酸化。[2]

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8-O-乙酰山栀苷甲酯（ND01）对NF-κB活化和HMGB-1表达的影响[1]
NF-κB通路在细胞因子的分泌中起着关键作用。检测了细胞核中p50和p65的含量。 TNF-α刺激可显著激活NF-κB转录因子p50/p65。然而，如图1所示，ND01可部分阻断这种激活。[1] 我们还检测了IκB激酶系统作为NF-κB的另一种激活剂。TNF-α刺激导致IκB显著降解。ND01可抑制这种降解（图2）。此外，TNF-α可增加p-IκB的磷酸化水平，而ND01也可抑制p-IκB的磷酸化。[1] 在未用TNF-α刺激的SH-SY5Y细胞中，磷酸化NF-κB的表达水平较低。然而，用20 ng/ml TNF-α刺激SH-SY5Y细胞120分钟后，磷酸化NF-κB的表达水平显著升高。我们比较了ND01与选择性HMGB-1抑制剂甘草酸对SH-SY5Y细胞中TNF-α诱导的磷酸化NF-κB活化和HMGB-1表达水平的影响。图2的结果显示，用甘草酸（100 μM）预处理SH-SY5Y细胞120分钟后，TNF-α诱导的HMGB-1表达被阻断，NF-κB磷酸化水平降低。如图2所示，用10 μM ND01预处理SH-SY5Y细胞也能阻断TNF-α诱导的NF-κB磷酸化，并降低HMGB-1表达。[1]体外实验表明，巴勒林（8-O-乙酰山楝苷甲酯）可抑制NF-κB活性，并在细胞模型中促进血管生成。该化合物具有抗炎和神经保护作用。它能降低HMGB-1的表达。细胞实验已证实巴林对缺氧缺糖诱导的损伤具有保护作用。其环烯醚萜苷结构是其生物活性的重要因素。

巴林（8-O-乙酰山栀苷甲酯）40 mg/kg 即使在缺血/再灌注后 4 小时给药，也表现出显著的神经保护作用。在缺血性脑组织中，巴林 40 mg/kg 可抑制 NF-κB 活化，降低 HMGB-1 表达，减轻组织病理损伤，并减少脑水肿[1]。巴林（8-O-乙酰山栀苷甲酯）可显著加速缺血性脑组织的血管生成，从而增强卒中后的功能恢复。此外，与溶媒对照组相比，巴林可显著促进血管生成，并提高 Ang1、Tie2 和 Akt VEGF 的水平及其表达[3]。在小鼠中，活化部分凝血酶原时间、凝血酶原时间和凝血酶时间不受巴林（8-O-乙酰山栀苷甲酯）的影响，但毛细血管凝血时间和失血量显著缩短。在纤溶亢进小鼠中，巴林显著延长了优球蛋白凝块溶解所需的时间[4]。炎症激活在卒中和糖尿病（DM）的病理生理机制中起着至关重要的作用，对脑部疾病的进展产生有害影响，并导致糖尿病卒中中的血管损伤。本研究旨在探讨8-O-乙酰山栀苷甲酯（ND01）对体外肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激的SH-SY5Y细胞系和体内实验性缺血性糖尿病卒中模型的影响。将TNF-α刺激的SH-SY5Y细胞与ND01预孵育，然后分析蛋白表达。在体内实验中，对糖尿病大鼠进行30分钟的大脑中动脉闭塞（MCAO），随后进行23小时的再灌注。ND01处理SH-SY5Y细胞可阻断TNF-α诱导的核转录因子κB（NF-κB）激活，并降低高迁移率族蛋白B1（HMGB-1）的表达。即使在缺血/再灌注（I/R）后4小时延迟给药，40 mg/kg的ND01仍显示出显著的神经保护作用。40 mg/kg的ND01可减轻缺血脑组织的组织病理损伤，减少脑肿胀，抑制NF-κB激活，并降低HMGB-1的表达。这些数据表明，ND01通过减轻糖尿病脑缺血/再灌注（I/R）损伤和减弱血脑屏障（BBB）破坏，在有利的治疗时间窗内保护糖尿病脑免受I/R损伤，其保护作用可能涉及HMGB-1和NF-κB信号通路。[1] 8-O-乙酰山栀苷甲酯（ND01）是从轮叶山栀（Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo）的叶片中分离得到的。本研究在体内探讨了ND01的抗心肌缺血/再灌注（I/R）损伤作用，并在体外阐明了其潜在机制。结果表明，ND01以浓度依赖的方式显著减弱了H9c2细胞中缺氧诱导的细胞毒性。用 9 μM ND01 处理 H9c2 细胞可阻断 TNF-α 诱导的核因子 κB (NF-κB) 磷酸化，其机制是通过抑制高迁移率族蛋白 1 (HMGB1) 的表达。用 10 mg/kg ND01 (静脉注射) 治疗大鼠可保护其免受心肌缺血/再灌注损伤，表现为梗死体积减少、血流动力学改善和心肌损伤程度降低。ND01 治疗还可降低血清中促炎因子的水平，并减少缺血心肌组织中高迁移率族蛋白 1 (HMGB1) 和磷酸化 NF-κB 的表达。此外，连续 14 天静脉注射 ND01 可减轻心脏重塑。这些保护作用提示ND01可能通过HMGB1依赖的NF-κB信号通路阻断心肌炎症级联反应。[2]研究人员探讨了8-O-乙酰山栀苷甲酯（ND01）是否能调节血管生成，从而改善卒中后的功能预后。成年雄性大鼠接受1小时大脑中动脉闭塞（MCAO）和再灌注，并在缺血再灌注（I/R）后24小时开始，每日静脉注射不同剂量（5和10 mg/kg）的ND01，持续14天。随后进行神经功能测试并测量脑伊文思蓝外渗情况。分别采用免疫组织化学和Western blot检测血管生成和血管生成因子的表达。结果表明，ND01显著促进缺血性脑组织的血管生成，并改善卒中后的功能预后。与载体对照组相比，ND01也显著增加了血管化程度。ND01增加了VEGF、Ang1的表达以及Tie2和Akt VEGF的磷酸化。Ang1/Tie2轴和Akt通路似乎介导了ND01诱导的血管生成。[3]

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抗纤溶活性来源于8-O-乙酰山栀苷甲酯（ASM），它是从L. rotata中提取的TIG中含量最高的环烯醚萜苷之一。ASM显著（P<0.05）缩短了CBCT并减少了体内失血量，但对小鼠的APTT、PT或TT无影响。尤其值得注意的是，它显著延长了高纤溶小鼠的ECLT。这表明ASM可以抑制纤溶。在纤溶亢进小鼠模型中，ASM对CBCT、创伤性出血量和ECLT均有效。结论：ASM是轮叶紫菀（L. rotata）中的主要止血成分。ASM的止血机制是通过抗纤溶活性实现的。ASM是一种新型的纤溶抑制剂，属于环烯醚萜苷类化合物。[4]
体内研究表明，巴勒林具有对抗脑缺血损伤的潜力。它能促进血管生成，从而改善卒中后的功能预后。该化合物能减轻血脑屏障的破坏。其保护作用可能与HMGB-1和NF-κB信号通路有关。巴勒林已在卒中和脑缺血动物模型中进行了研究。其抗炎和神经保护特性已在体内得到证实。

NF-κB 结合试验 [1]
将 SH-SY5Y 细胞 (5 × 106) 与 10 μM 的 8-O-乙酰山楝苷甲酯 (ND01) 预孵育 22 小时，然后与 TNF-α (20 ng/ml) 孵育 1 或 2 小时，然后用 PBS 洗涤一次，将细胞刮入 1 ml 冷的 PBS 中，并通过离心沉淀。核提取物的制备方法如前所述¹²。NF-κB (p50/p65) 的 DNA 结合活性采用 ELISA 试剂盒测定。

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8-O-乙酰山栀苷甲酯 (ND01) 可抑制 NF-κB 活化和 HMGB1 表达^[2]。我们比较了 ND01 对 TNF-α (20 ng/ml，30 分钟) 诱导的 H9c2 细胞中 NF-κB 和 HMGB1 活化的影响，并与选择性 HMGB1 抑制剂甘草酸 (100 μM) 和 NF-κB 抑制剂进行了比较。
体外酶/受体结合试验中，巴氏杀菌素 (Barlerin) 的活性测定包括 NF-κB 抑制。NF-κB 活性通过测定 DNA 结合活性或荧光素酶报告基因检测进行评估。HMGB-1 水平通过 ELISA 或 Western blot 进行测定。在血管生成研究中，会进行内皮细胞管形成实验。将细胞用不同浓度的巴勒林处理，并定量分析血管生成情况。实验在合适的缓冲体系中进行，并设置阳性对照，例如已知的NF-κB抑制剂。IC50值根据剂量反应曲线计算得出。

细胞在缺氧处理前24小时，用不同浓度（1、3、9和27 μM）的巴林（8-O-乙酰山楝素甲酯）进行预处理。采用MTT法评估细胞活力[2]。

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TNF-α刺激的SH-SY5Y细胞中NF-κB激活和HMGB-1表达[1]
人神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞在添加10%磷酸盐缓冲液（PBS）和1%青霉素/链霉素的F12+ DMEM（1:1，v/v）培养基中培养和维持。细胞置于37℃、5% CO2/95% O2的加湿培养箱中培养。将分离的细胞以 5 × 10⁵/cm² 的密度接种于聚赖氨酸包被的培养板中，并在添加了 10% (v/v) 马血清、5% (v/v) 胎牛血清、100 U/ml 青霉素和 0.1 mg/ml 链霉素的 DMEM 培养基中培养。每周更换两次新鲜培养基。[1]
在体外 TNF-α 刺激 SH-SY5Y 细胞系的实验中，将 SH-SY5Y 细胞 (5 × 10⁶) 预先与 8-O-乙酰山栀苷甲酯 (ND01) (9 μM) 或 HMGB-1 抑制剂甘草酸 (100 μM) 孵育 120 分钟，然后与 TNF-α (20 ng/ml) 孵育 30 分钟。将细胞置于CO2培养箱中培养12小时。用冰冷的PBS缓冲液洗涤细胞两次，然后在NP40裂解缓冲液（50 mM Tris，pH 7.4，250 mM NaCl，5 mM EDTA，50 mM NaF，1 mM Na3VO4，1% NP-40和0.02% NaN3）中裂解，该裂解缓冲液中添加了1 mM PMSF和1×蛋白酶抑制剂混合物。取等量细胞蛋白（50 μg）进行SDS-PAGE电泳分离，并用针对HMGB-1、IκB、磷酸化IκB-α、磷酸化NF-κB和增殖细胞核抗原（PCNA，内参）的特异性抗体进行Western blot分析。使用Gel Doc 2000扫描并定量条带的光密度值。数据以相应的PCNA条带的光密度值进行标准化。结果以相对于对照组的倍数增加表示。

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8-O-乙酰山栀苷甲酯 (ND01) 减弱了缺氧诱导的细胞毒性[2]
细胞活力结果如图1所示。暴露于缺氧6小时后，与对照组相比，仅有52.0 ± 8.9%的细胞存活。8-O-乙酰山栀苷甲酯 (ND01) (3、9和27 μM) 以浓度依赖的方式预防了缺氧诱导的细胞损伤，使细胞存活率恢复至63.7 ± 6.0%、69.9 ± 8.6%和74.4 ± 9.6%。
巴林的体外细胞实验在内皮细胞、神经元细胞和其他相关细胞类型中进行。细胞在含有5% CO₂的37°C适宜培养基中培养，并用不同浓度的巴勒林处理。采用MTT或CCK-8法评估细胞活力。通过检测核转位或DNA结合来评估NF-κB活性。采用ELISA法检测HMGB-1水平。通过内皮细胞管形成实验评估血管生成。在缺氧缺糖条件下评估神经元细胞的神经保护作用。所有实验均设置三个重复，并配备适当的阳性和阴性对照。

大鼠：将巴林（8-O-乙酰山泮苷甲酯）溶于生理盐水中。成年雄性大鼠接受1小时的大脑中动脉闭塞（MCAO）和再灌注。之后，从缺血再灌注（I/R）后24小时开始，每天静脉注射不同剂量的8-O-乙酰山泮苷甲酯（ND01）（5和10 mg/kg），持续14天。除测量脑内伊文思蓝外渗外，还进行神经功能测试[3]。
小鼠：将巴林（8-O-乙酰山泮苷甲酯）溶于生理盐水中。将五组雄性Balb/C小鼠（20～25g）随机分为四组（生理盐水组、血凝酶组（0.34 KU/kg，静脉注射）、ASM-L组（100 mg/kg）、ASM-M组（250 mg/kg）和ASM-H组（500 mg/kg））。在腹腔注射戊巴比妥钠（200 mg/kg）麻醉小鼠前5分钟，经尾静脉注射各组药物和溶剂对照。注射后20分钟，从心脏抽取血液样本。测定凝血酶原时间、凝血酶时间、纤维蛋白原和活化部分凝血活酶时间[4]。

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链脲佐菌素 (STZ) 诱导糖尿病模型和大鼠脑缺血研究方案[1]
200 只大鼠（禁食 20 小时）通过单次腹腔注射 STZ（剂量为 50 mg/kg）诱导糖尿病。STZ 用 0.1 M 柠檬酸缓冲液（pH 4.0）稀释。STZ 注射 3 周后，选择血糖值在 12.0 至 20.0 mM 之间的大鼠。糖尿病大鼠用水合氯醛（350 mg/kg，腹腔注射）麻醉。在整个手术过程中记录并维持直肠温度在 37°C。 MCAO手术按照既往方法进行，并稍作修改¹³。左侧颈总动脉被闭塞，颈外动脉分支被解剖并切断。沿颈内动脉头侧追踪，将一根4-0号缝线（缝线直径0.25 mm，但尖端直径0.34 mm，以形成球形止血塞）插入颈内动脉，推进至感到阻力为止。30分钟后取出缝线。术后前23小时，将大鼠置于温度控制在24–25°C的条件下。[1]
一项预实验采用四种不同剂量的8-O-乙酰山栀苷甲酯（10、20、40或80 mg/kg），以确定其对急性缺血/再灌注（I/R）糖尿病大鼠的剂量依赖性效应。观察发现，剂量为 20、40 和 80 mg/kg 的 8-O-乙酰山泮苷甲酯 (ND01) 可显著降低急性缺血/再灌注 (I/R) 诱导的糖尿病大鼠在实验 23 小时后的梗死体积和神经功能缺损评分 (p < 0.05)。因此，本研究选择 40 mg/kg 剂量的 8-O-乙酰山泮苷甲酯 (ND01) 进行治疗时间窗研究。[1] 为研究治疗时间窗，将 40 只 MCAO 糖尿病大鼠随机分为 4 组，每组 10 只，另设 10 只糖尿病大鼠作为对照组。分别于再灌注后 2、4 和 6 小时，通过尾静脉注射给予大鼠 40 mg/kg 剂量的 ND01。对照组大鼠注射生理盐水。缺血23小时后，通过脑梗死检查确定神经功能缺损情况。[1]
为研究抗炎机制，将54只大鼠随机分为3个亚组，每组18只，另设18只对照组（非糖尿病）。再灌注30分钟后，大鼠经尾静脉注射40 mg/kg剂量的药物。糖尿病组和载体对照组大鼠注射生理盐水。所有脑组织均采用伊文思蓝外渗法进行评估，然后通过Western blot分析HMGB1、IκB、磷酸化IκB-α和磷酸化NF-κB的表达，并重点通过NeuN染色评估组织病理学损伤。[1]
为进行长期研究，将20只大鼠随机分为2组，每组10只。再灌注30分钟后，大鼠经尾静脉注射40 mg/kg剂量的药物。对照组大鼠注射生理盐水。分别于缺血/再灌注（I/R）后第3、7和14天评估神经功能缺损。I/R后14天，8-O-乙酰山栀苷甲酯（ND01）40 mg/kg组8只大鼠进行染色，对照组6只大鼠进行染色。脑梗死灶的检测方法参照既往文献[1]。I/R手术用于诱导脑缺血[3]。大鼠体重为280-320 g。适应环境1周后，大鼠用水合氯醛（350 mg/kg，腹腔注射）麻醉。按照既往文献所述方法进行大脑中动脉闭塞（MCAO）手术。闭塞左侧颈总动脉，并分离和切断颈外动脉分支。沿颈内动脉头侧追踪，将一根4-0号丝线（丝线直径为0.25毫米，但尖端直径为0.34毫米，以形成球形止血环）插入颈内动脉，推进至感到阻力为止。1小时后取出丝线。将大鼠置于加热垫上，维持核心体温在37±0.5℃。
共160只大鼠分为两组；每组包含四个亚组（每个亚组20只大鼠）：非缺血/再灌注（假手术）组、载体处理组、8-O-乙酰山泮苷甲酯（ND01）5 mg/kg组和8-O-乙酰山泮苷甲酯（ND01）10 mg/kg组。再灌注23小时后，所有动物每天经尾部静脉注射（iv）相应药物，持续14天。假手术组和载体对照组大鼠均注射生理盐水。第7天和第14天，第一组动物用于评估神经行为，然后测量血脑屏障通透性；每个亚组包含8只大鼠。第7天和第14天，第二组动物用于分析蛋白质印迹、微血管密度和免疫组织化学染色。每个亚组的4只大鼠用于分析缺血脑核心的蛋白质印迹；每个亚组的另外4只大鼠用于检测微血管密度和免疫组织化学染色。[3]
巴勒林（Barlerin）的体内研究是在啮齿动物脑缺血和卒中模型中进行的。动物接受大脑中动脉闭塞（MCAO）或其他缺血性损伤模型。巴林可通过口服或静脉注射给药。神经功能通过行为学测试进行评估。梗死体积通过TTC染色进行测量。血脑屏障完整性通过伊文思蓝外渗进行评估。血管生成通过CD31或其他内皮细胞标志物的免疫组织化学染色进行评估。脑组织中NF-κB和HMGB-1的表达通过Western blot或免疫组织化学染色进行评估。对动物进行临床症状监测。所有研究均按照机构动物护理指南进行。

巴勒林（分子量 448.42 g/mol，C19H28O12）是一种环烯醚萜苷。它从中国民间药用植物轮叶黄连（Lamiophlomis rotata Kudo）中分离得到。该化合物可溶于二甲基亚砜（DMSO）和其他有机溶剂，在推荐的储存条件下稳定。半衰期、生物利用度和组织分布等药代动力学参数需在物种特异性研究中测定。巴勒林又名 8-O-乙酰山栀苷甲酯。

巴勒林在临床前研究中通常耐受性良好。该化合物是一种天然环烯醚萜苷，提取自一种中国民间药用植物。其抗炎和神经保护作用已得到证实，且安全性良好。现有文献中未报道在研究用浓度下存在显著不良反应。该化合物仅供研究使用。操作时应遵循标准安全预防措施。若要进行治疗开发，则需要进行全面的毒理学评估。

[1]. 8-O-acetyl shanzhiside methylester attenuates cerebral ischaemia/reperfusion injury through an anti-inflammatory mechanism in diabetic rats. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2014 Dec;115(6):481-7.

[2]. Cardioprotection with 8-O-acetyl shanzhiside methylester on experimental myocardial ischemia injury. Eur J Pharm Sci. 2012 Aug 30;47(1):124-30.

[3]. Effect of 8-O-acetyl shanzhiside methylester increases angiogenesis and improves functional recovery after stroke. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2011 Jan;108(1):21-7.

[4]. A new anti-fibrinolytic hemostatic compound 8-O-acetyl shanzhiside methylester extracted from Lamiophlomis rotata. J Ethnopharmacol. 2016 Jul 1;187:232-8.

据报道，8-O-乙酰基甘诺苷甲酯存在于巴氏杆菌（Barleria lupulina）、加氏野芝麻（Lamium garganicum）和其他具有相关数据的生物体中。在本研究中，我们观察到8-O-乙酰基甘诺苷甲酯（ND01）在不降低血糖的情况下显著改善了糖尿病大鼠的脑缺血/再灌注损伤，表明ND01具有即时的神经保护作用，但并非通过降低血糖实现。梗死面积是评估脑缺血治疗效果的重要病理生理指标¹⁹。我们的结果（图3）显示，即使在缺血/再灌注后2小时和4小时延迟给药，8-O-乙酰基甘诺苷甲酯（ND01）治疗仍然显著减少了糖尿病大鼠脑缺血/再灌注损伤后的梗死体积。神经元变性和坏死已被发现与行为缺陷相关；行为评估可以揭示治疗效果。²⁰ 本研究表明，ND01 治疗降低了神经功能评分（图 3）。NeuN 是缺血性损伤中早期受损神经元的敏感标志物²¹，我们的数据（图 4）显示，40 mg/kg 剂量的 ND01 可减少缺血/再灌注后 23 小时和 14 天缺血性大脑皮层中 NeuN 免疫阳性神经元的减少。这表明 ND01 在脑缺血治疗中具有潜在益处^[1]。中风治疗学术产业圆桌会议更新的临床前建议²²概述了将有效的临床前研究结果转化为成功的临床试验结果的潜在原因。因此，我们研究了8-O-乙酰基甘氨酸甲酯（ND01）在糖尿病大鼠脑缺血/再灌注模型中的治疗时间窗和长期疗效，结果表明，8-O-乙酰基甘氨酸甲酯（ND01）具有显著且长期的神经保护作用，且治疗时间窗良好。[1] 中风会引发持续数小时的炎症反应，该反应在缺血性中风（尤其是糖尿病性中风）的神经元损伤发病机制中起着核心作用。炎症反应通过多种机制导致缺血性损伤的后期阶段和神经功能恶化。糖尿病也是一种炎症性疾病。本研究表明，8-O-乙酰基甘氨酸甲酯（ND01）具有显著的抗炎作用（表2和图5），尤其ND01治疗对脑缺血/再灌注损伤后神经元功能的恢复具有长期益处（表1）。这提示ND01的神经保护作用可能与其抑制炎症反应有关。[1] 髓过氧化物酶（MPO）被认为是中性粒细胞浸润的指标，在脑缺血24小时后高表达。研究表明，在脑缺血模型中，中性粒细胞浸润与梗死形成之间存在显著相关性。我们的结果显示，ND01可降低糖尿病缺血脑组织中的MPO活性。这提示ND01的神经保护作用可能源于其对中性粒细胞浸润的抑制（表2）[1]。糖尿病患者的血脑屏障（BBB）通透性显著增加，这可能是由于糖尿病引起的BBB功能障碍和/或血管生成不成熟所致。脑缺血早期（24小时内）也会出现BBB破坏。我们的数据表明，ND01可通过减少BBB破坏来改善糖尿病脑缺血/再灌注损伤[1]。NF-κB激活与缺血脑组织中IκB-α和NF-κB的磷酸化相关。NF-κB激活的降低可以保护大脑免受NF-κB依赖性基因激活的影响。HMGB-1是缺血脑组织中的一个新成员。同时，与非糖尿病MCAO大鼠相比，糖尿病显著升高了HMGB水平，并导致卒中后功能预后更差。所有这些数据表明，HMGB-1在糖尿病卒中中发挥着关键作用。 HMGB-1信号通路参与NF-κB的激活，而NF-κB激酶抑制剂对HMGB-1至关重要。抑制星形胶质细胞中HMGB-1的释放可以减轻神经炎症，并预防缺血性星形胶质细胞坏死和NF-κB表达。³⁴早期抑制HMGB-1和NF-κB的上调对糖尿病脑缺血具有显著益处。基于这些发现，我们研究了8-O-乙酰基甘氨酸甲酯（ND01）在糖尿病脑缺血中的抗炎特性，并进一步探索了其潜在机制。8-O-乙酰基甘氨酸甲酯（ND01）显著抑制了HMGB-1和NF-κB的上调。这些结果表明，抑制HMGB-1和NF-κB的表达参与了ND01对糖尿病脑缺血损伤的神经保护作用。因此，我们认为ND01的保护作用可能源于其通过HMGB-1依赖的NF-κB信号通路抑制炎症级联反应。[1] 总之，本研究结果表明，8-O-乙酰基甘氨酸甲酯（ND01）在糖尿病脑缺血/再灌注损伤中表现出显著的神经保护作用，包括减少血脑屏障破坏、减少梗死体积、减轻脑损伤以及降低缺血脑组织中HMGB-1、磷酸化IκB-α和NF-κB的表达。ND01的这些作用与抑制炎症反应有关。这些研究结果表明，ND01作为一种有效的抗炎先导化合物，在治疗早期糖尿病脑缺血/再灌注损伤方面具有潜在的应用价值。
巴勒林（8-O-乙酰山栀苷甲酯）是一种来自轮叶黄连木（Lamiophlomis rotata Kudo）的环烯醚萜苷，具有对抗脑缺血损伤的潜力。它能促进血管生成，改善卒中后的功能预后。巴勒林抑制NF-κB并降低HMGB-1的表达，表现出抗炎和神经保护作用。它还能减轻血脑屏障的破坏。其分子式为C19H28O12，分子量为448.42 g/mol。所有应用均仅限于非人体研究用途。

C₁₉H₂₈O₁₂

448.42

448.158

57420-46-9

57420-46-9

162823

White to off-white solid

1.52 g/cm3

634.2±55.0 °C at 760 mmHg

220.0±25.0 °C

0.0±4.2 mmHg at 25°C

1.594

-2.76

181.44

5

12

7

31

725

10

O(C(C([H])([H])[H])=O)[C@@]1(C([H])([H])[H])C([H])([H])[C@]([H])([C@]2([H])C(C(=O)OC([H])([H])[H])=C([H])O[C@]([H])([C@]12[H])O[C@@]1([H])[C@@]([H])([C@]([H])([C@@]([H])([C@@]([H])(C([H])([H])O[H])O1)O[H])O[H])O[H])O[H]

ARFRZOLTIRQFCI-NGQYDJQZSA-N

InChI=1S/C19H28O12/c1-7(21)31-19(2)4-9(22)11-8(16(26)27-3)6-28-17(12(11)19)30-18-15(25)14(24)13(23)10(5-20)29-18/h6,9-15,17-18,20,22-25H,4-5H2,1-3H3/t9-,10-,11+,12-,13-,14+,15-,17+,18+,19+/m1/s1

methyl (1S,4aS,5R,7S,7aS)-7-acetyloxy-5-hydroxy-7-methyl-1-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4a,5,6,7a-tetrahydro-1H-cyclopenta[c]pyran-4-carboxylate

8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester; 8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester; 8-O-Acetylshanzhiside methyl ester; methyl (1S,4aS,5R,7S,7aS)-7-acetyloxy-5-hydroxy-7-methyl-1-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4a,5,6,7a-tetrahydro-1H-cyclopenta[c]pyran-4-carboxylate; 5beta-Dihydro Finasteride; Cyclopenta[c]pyran-4-carboxylic acid,7-(acetyloxy)-1-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,4a,5,6,7,7a-hexahydro-5-hydroxy-7-methyl-, methyl ester, (1S,4aS,5R,7S,7aS)-; Umbroside; Barlerin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~223.0 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。